富硒乳酸菌对肉鸡新城疫病毒抗体影响的研究

林耀玮，刘燕霏，杨建德，秦顺义



富硒乳酸菌对肉鸡新城疫病毒抗体影响的研究

林耀玮，刘燕霏，杨建德通信作者，秦顺义

（天津农学院 动物科学与动物医学学院，天津 300384）

本研究旨在探究富硒乳酸菌对肉鸡新城疫病毒（NDV）抗体的影响。在静海县某鸡场抽选1日龄AA肉仔鸡1 000只，随机分2组，一组为基础日粮组，另一组为富硒乳酸菌组。单个试验组在组内随机分为5个重复试验组，每个重复组100只鸡。基础日粮组选用玉米豆粕型日粮作为饲料，富硒乳酸菌组日粮将2%富硒乳酸菌添加到玉米豆粕型日粮中。试验中雏鸡自由饮食和饮水，免疫方法参照常规免疫程序。试验期为42 d，分别在试验第14 d、28 d和42 d随机从每个重复组中选取2只肉鸡进行扑杀，采集血清，进行新城疫病毒抗体效价检测。结果表明，富硒乳酸菌能明显提高新城疫病毒血清抗体效价。

富硒乳酸菌；新城疫病毒；血凝抑制试验；抗体效价

近年来，科学家对硒元素和乳酸菌的研究越来越广，从单一生物活性到其复合物的生物活性都有研究。微量元素硒在我国许多城市都缺乏，养殖业往往更需要重视硒。鸡缺乏硒元素会导致免疫力下降、食欲下降或废绝、甚至死亡[1]。微量元素硒的生物学活性主要以抗氧化和促进生长为主[2-3]，乳酸菌能辅助机体消化吸收食物，抑制有害菌的生长[4-5]，富硒乳酸菌也因具有两者共同的优势而被大量研究。在饲料中直接添加含硒化物（亚硒酸钠），在不控制饮食的状态下易出现硒中毒，通过乳酸菌进行生物转换后，能有效补充硒元素且不易中毒。富硒乳酸菌是新型饲料，在养殖业的应用中需先进行测试，主要针对肉用及有生产性能的动物。有相关研究表明，日粮中添加富硒乳酸菌能有效减弱黄曲霉毒素B1对肉鸡的毒害[6]，增重且有效降低料肉比，提高肉鸡抗氧化功能[7]，增加蛋鸡的产蛋量及含硒量[8]。

新城疫病毒（NDV）主要危害家鸡和火鸡，对养殖业危害巨大。在不同地区，新城疫病毒毒株所引起疾病的症状不同，同种动物表现出的临床症状也不同，常常伴有免疫失败现象，有时常规免疫也不能避免强毒株感染[9]。本试验探究富硒乳酸菌对肉鸡NDV抗体的影响作用，为阐明富硒益生菌提高机体免疫力提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

一日龄AA肉仔鸡1 000只、健康成年鸡1只、玉米豆粕型日粮及NDV弱毒疫苗均由大成万达天津有限公司提供。富硒乳酸菌活菌数不少于5×1011cfu /L，硒含量为10.00 mg/L；标准硒[GBW（E）080215]由国家标准物质研究中心提供。NDV抗原由天津农学院预防兽医学实验室提供。

鸡0.5%红细胞，按文献[10]提供的方法制备。

1.2 方法

1.2.1 动物饲喂及血清采集

1 000只1日龄雏鸡并随机分为两个试验组，第一组为基础日粮组，第二组为富硒乳酸菌组，每个试验组组内随机分为5个重复对照组。基础日粮组选择玉米豆粕型日粮作为饲料，富硒乳酸菌组饲料在玉米豆粕型饲料中添加2%富硒乳酸菌。雏鸡在7日龄采用NDV弱毒苗滴鼻免疫，总的试验天数42 d。分别于第14、28、42 d随机从每个重复对照组中选取2只雏鸡进行扑杀，采集血清并保存于冰箱中冷藏待用。

1.2.2 血凝试验（HA）及血凝抑制试验（HI）

NDV抗原效价检测采用常规的HA方法，抗体效价的检测采用HI方法，参照文献[11-12]进行。

HA在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 μL生理盐水；于左侧第1孔加50 μLNDV病毒液，混合均匀后，吸50 μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 μL；第12孔为红细胞对照；自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 μL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果。

HI在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加50 μL生理盐水；第1孔加被检鸡血清50 μL，吹吸混合均匀，吸50 μL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50 μL，稀释度分别为：1∶2、1∶4、1∶8……；第12孔加新城疫阳性血清50 μL，作为血清对照；自第1孔至12孔各加50 μL 4个血凝单位的新城疫病毒液，其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照，振荡混合均匀，置室温中作用10 min；自第l孔至12孔各加0.5% 鸡红细胞悬液50 μL，振荡混合均匀，室温下静置后观察结果。

1.2.3 统计学分析

对普通日粮组与富硒乳酸菌组的HI效价，采用Excel中检验进行差异显著性分析。

2 结果

2.1 NDV抗原效价的测定

经3次重复试验，血凝试验检测NDV抗原的HA效价为29，见图1。根据测定的NDV抗原效价，制备4单位的病毒应对抗原稀释27倍。

图1 NDV抗原效价测定结果

2.2 富硒乳酸菌对肉鸡NDV抗体的影响

经HI检测，饲喂基础日粮肉鸡体内NDV抗体效价在14 d处于21和22之间，在28 d处于21和26之间，在35 d处于23和27之间。试验结果见表1。饲喂富硒乳酸菌组肉鸡体内NDV抗体效价在14 d处于21和24之间，在28 d处于23和27之间，在35 d处于24和28之间，试验结果见表2。

表1 基础日粮组效价范围及所占比例 （log2，%）

表2 富硒乳酸菌组效价范围及所占比例 （log2，%）

比较数据得出，添加富硒乳酸菌肉鸡组抗体效价范围高于基础日粮组，更趋于稳定。从图2得出，富硒乳酸菌组NDV抗体效价比基础日粮组高，两组试验抗体效价均呈现上升趋势。通过对抗体水平测定和统计学分析，富硒乳酸菌组NDV抗体显著高于普通日粮组（＜0.01）。

图2 富硒乳酸菌对仔鸡NDV抗体的影响

3 讨论

近年来，富硒益生菌在食品及饲料方面逐渐得到人们的关注。 硒是人和动物所必需的微量元素，具有提高机体免疫力、抗自由基、延缓衰老、抗癌、拮抗有毒元素等多种功能[2-3]。在许多国家日粮补硒已是养殖业采取的常规措施，常用的补硒方法是在日粮中添加亚硒酸钠，但鉴于其结合率低、毒性大，而且会对环境造成潜在污染，因此已被限量使用。益生菌是一类通过改善动物胃肠道微生物区系平衡而促进动物健康和生长的有益菌。富硒益生菌是利用生物转化的原理，应用益生菌将无机硒转化为有机硒的有机硒制剂，可发挥有机硒和益生菌的双重功效[4-5]。秦顺义等[6]研究日粮中添加富硒乳酸菌制剂对肉鸡生产性能、血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的影响。结果表明，饲喂富硒乳酸菌可显著提高肉鸡日增重，显著降低料肉比，显著提高肉鸡血清GSH-Px和T-SOD活性，MDA水平明显下降。富硒乳酸菌还能提高小鼠NK细胞活性，降低肠道中致病性大肠杆菌的黏附与定植[13-14]，但尚未见有富硒益生菌对病毒免疫效果的研究。本研究对富硒乳酸菌对肉鸡NDV病毒抗体的影响研究发现，从试验开始至结束，普通日粮组和富硒乳酸菌组NDV抗体均处于上升趋势，富硒乳酸菌组肉鸡的NDV抗体效价范围广，效价值更高，免疫更趋于稳定。试验中均有偏低与偏高的数值，可能与自身免疫、免疫程序及采食饮水量等方面因素有关。试验第42 d基础日粮组所检测到最低NDV抗体效价为23，推测属于免疫水平较差的个体。本研究发现，日粮中添加富硒乳酸菌能显著提高肉鸡NDV抗体水平，这在富硒益生菌影响病毒免疫方面尚属首次。推测可能原因是硒元素和乳酸菌共同发挥作用的结果。这与Chuang等[15]的研究结果一致，证实这些灭活乳酸菌能刺激细胞增殖和白细胞介素IL-10、IL-12、IFN-γ的产生，并使Th细胞分泌升高。目前，控制新城疫是养禽业的首要问题，免疫失败现象时有发生。本次试验发现富硒乳酸菌添加到饲料日粮中可提高NDV免疫抗体水平1.0～1.3log2滴度，可显著辅助疫苗产生免疫保护作用，为抵抗该病发挥重要作用。

[1] 龚商羽. 一例肉种鸡硒缺乏引起的肌纤维变性[J]. 畜牧兽医科技信息，2017（5）：102.

[2] 吴国杰，舒绪刚，尹国强，等. 硒饲料添加剂在动物养殖中的应用[J]. 广东饲料，2015，24（9）：27-29.

[3] 史秋盛，吴娇. 硒对畜禽养殖的影响[J]. 中国畜牧兽医文摘，2014，30（9）：198.

[4] 袁玲，许丽，徐基利，等. 乳酸菌菌体及全菌液制剂对雏鸡生长性能和盲肠菌群的影响[J]. 中国畜牧杂志，2011，47（13）：59-62.

[5] 枉候军，黄兴国，谷雪玲. 乳酸菌的生物学功能及其在肉鸡生产中应用[J]. 湖南饲料，2015（3）：25-27.

[6] 秦顺义，王宏祥，黄宝霞，等. 富硒乳酸菌对肉鸡生产性能和抗氧化功能的影响[J]. 黑龙江畜牧兽医，2015（3）：22-24.

[7] 王宏祥，秦顺义，黄宝霞，等. 富硒乳酸菌对饲喂黄曲霉毒素日粮肉鸡生产性能和抗氧化功能的影响[J]. 畜牧与兽医，2014，46（6）：87-89.

[8] 梁丛丛，胡治铭，国洪旭，等. 富硒益生菌对蛋鸡生产性能及鸡蛋中硒含量的影响[J]. 安徽农业科学，2015，43（5）：99-100，210.

[9] Khorajiya J H，Pandey S，Ghodasara P D，et al. Patho-epidemiological study on Genotype-XIII Newcastle disease virus infection in commercial vaccinated layer farms[J]. Veterinary World，2015，8（3）：372-381.

[10] 雷莉辉. 影响血凝试验和血凝抑制试验的因素分析[J].中国畜牧兽医，2013，40（6）：244-246.

[11] 王丽娟. 鸡新城疫血凝和血凝抑制试验操作注意事项[J].畜牧兽医科技信息，2016（6）：23-24.

[12] 蔡文杰，邱立新，邱美珍，等. 血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法[J]. 湖南畜牧兽医，2012（5）：39-41.

[13] 曹萌，陈龙，许龙兵，等. 富硒乳酸菌对镉暴露机体自然杀伤细胞活性调节[J]. 中国公共卫生，2005，21（6）：681-682.

[14] 杨家军. 富硒益生菌制剂工业化生产条件及其抑制致病性大肠杆菌的研究[D]. 南京：南京农业大学，2008.

[15] Chuang L，Wu K G，Pai C，et al. Heat-killed cells of lactobacilli skew the immune response toward T helper 1 polarization in mouse splenocytes and dendritic cell- treated T cells[J]. J Agric Food Chem，2007，55（26）：11080- 11086.

责任编辑：张爱婷

Effect of se-enriched lactobacillus on antibody of NDV of broilers

LIN Yao-wei, LIU Yan-fei, YANG Jian-deCorresponding Author, QIN Shun-yi

（College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China）

The purpose of this experiment is to study the effect of se-enriched lactobacillus on antibody of Newcastle Disease Virus (NDV) of broilers. One thousand day-old AA broiler chicken were selected from a chicken farm of Jinghai country, and the chicken were divided randomly into two groups which respectively had five repeat groups with 100 chickens each, one named basal diet group, and the other named se-enriched lactobacillus group. Corn soybean meal diet was selected for basal diet group, while 2% se-enriched lactobacillus was added into corn soybean meal diet for the other group. In this experiment, method of feeding was free diet, drinking and routine immunization program. This test period was 42 days. Two chicken were selected randomly in each repeat for slaughtering and collecting serums on 14th, 28thand 42ndday. Assessments on the effect of se-enriched lactobacillus in antibody titers of NDV of broilers were made by hemagglutination-inhibition test. The result indicated that antibody titers of NDV was increased significantly by se-enriched lactobacillus.

se-enriched lactobacillus; NDV; hemagglutination-inhibition test; antibody titers

S852.4

A

2018-02-18

国家自然科学基金项目（31101867）；天津农学院附属动物医院项目（ZH004903）

林耀玮（1994-），男，本科在读，研究方向为预防兽医学。E-mail：3111491142@qq.com。

杨建德（1969-），男，教授，博士，研究方向为预防兽医学。E-mail：jiandeyang@126.com。

1008-5394（2018）02-0036-03

10.19640/j.cnki.jtau.2018.02.009