河北省承德市接坝地区包虫病疫苗免疫效果评估

包虫病是棘球蚴病的俗称，是棘球绦虫的中绦期，寄生于羊、牛等家畜及多种野生动物和人的肝、肺等器官内引起的人兽共患寄生虫病，为我国优先防治的二类动物疫病。河北省承德市接坝地区特殊的饲养管理方式及气候条件为该病的流行提供了有利条件。包虫病危害严重、防治困难。保护易感动物，对中间宿主进行免疫，是防治包虫病的重要措施[1]。为了评估包虫病基因工程亚单位疫苗在该地区应用的安全性和免疫效果，进行了本试验。

1 材料与方法

1.1 试验对象

选择接坝地区4个牧场（编号A、B、C、D）8周龄左右羔羊，共479只。牧场饲养方式为自然放牧。

1.2 试验分组

将每场的羔羊随机分组：免疫组308只、对照组171只（表1）。免疫组除注射疫苗外，其他条件与对照组完全一致。

表1 各牧场试验羔羊分组情况 单位：只

1.3 试验疫苗

羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗（主要成分为羊棘球蚴EG95抗原），由重庆澳龙生物制品有限公司生产，批号为2017013-1，生产日期为20171114，有效期为1年。

1.4 免疫程序与方法

8周龄左右进行首次免疫，首次免疫后间隔1个月加免1次。按照疫苗瓶签注明的头份，用疫苗专用稀释液稀释，颈部皮下注射1 mL/只。

1.5 安全性评价

免疫后对免疫羔羊的精神状态及注射部位局部变化等进行仔细观察，持续2 d，确定有无疫苗反应及反应的轻重程度。

1.6 抗体检测

免疫组分别于首次免疫前、加强免疫前，首次免疫后2、6和9个月，对照组分别于试验前和试验后9个月，全部采血收集血清，用羊棘球蚴（包虫）病ELISA抗体检测试剂盒（批号20180110）进行检测，按照试剂盒说明书进行操作及阴阳性判定。

2 结果

2.1 疫苗安全性

免疫组个别羊有轻微的疫苗反应，表现为精神萎顿，饮食欲减退，注射部位轻微肿胀，但很快恢复正常。

2.2 免疫效果检测

免疫组：首次免疫前平均抗体阳性率为2.27%，1个月后（加强免疫前）平均抗体阳性率上升到87.16%；首次免疫后2、6和9个月的抗体阳性率分别为99.32%、93.49%和86.46%。对照组：首次免疫前抗体阳性率（感染抗体）与免疫组近似，为2.34%，9个月后，抗体阳性率上升至7.93%（表2）。4个牧场免疫效果检测具体结果见表3。

表2 免疫组和对照组抗体检测结果

采用SPSS 22.0软件，对试验开展9个月后4个牧场对照组的羊包虫病感染抗体阳性率进行卡方检验，发现P值均大于0.05，无显著性差异。

3 分析与讨论

免疫羊虽对本疫苗有轻微的免疫应激反应，但这可能是因抓羊和免疫注射刺激导致的，因此可以认为疫苗的免疫副作用较小。本研究为了验证疫苗的安全性及免疫效果，选择了8周龄左右的羔羊。这是因为此阶段羔羊感染包虫病的概率较低，有利于正确评价疫苗的免疫效果[2]。因本级实验室不具备做虫卵攻击试验的条件，所以本次试验以抗体滴度来验证疫苗的保护效果。有报道称，抗体滴度高低与疫苗保护强弱之间存在明显正相关关系[3]。因此，抗体滴度能够反映出疫苗的保护效果。

表3 4个牧场的免疫抗体阳性率检测结果单位：%

免疫抗体检测结果显示，免疫后抗体阳性率快速直线上升，加强免疫后1个月内，仍继续上升，但幅度变小，免疫9个月后，仍保持较高的抗体水平（图1），说明疫苗能快速诱导羊机体产生免疫保护抗体，且加强免疫后，能维持较长时间。根据试剂盒说明，样品OD值介于0.3～0.6之间，判为保护力低。免疫组加强免疫前的抗体合格率虽然达到了87.16%，但抗体水平较低的样品占到55%，所以首免后间隔1个月进行加强免疫十分必要。

图1 抗体合格率变化趋势

对照组在试验开展9个月后，包虫病感染抗体阳性率上升为7.93%，与前期所做流行病学调查数据相符[4]。4个牧场对照组包虫病感染抗体阳性率无显著差异，说明本研究做到了试验对象选定及分组的随机性。

本研究结果表明羔羊免疫后可以获得应有的保护，但由于时间有限，未能形成程序化的免疫程序，这有待今后继续研究。

4 结论

试验数据显示，该包虫病基因工程亚单位疫苗具有良好的安全性和免疫效果，按照疫苗说明书中的免疫程序对羔羊群进行免疫，9个月后动物个体仍维持较高的抗体水平。试验结果表明，该疫苗对羊包虫病具有较好保护力，可以在包虫病流行区推广应用。