武汉地区汉族老年男性骨质疏松危险因素的相关研究

赵晟珣 陈辉 刘菊

武汉市第一医院老年病科，湖北 武汉 430000

目前全世界约有2亿人患有骨质疏松症(osteoporosis，OP)，其患病率已跃居常见疾病的第7位[1,2]。在以往研究中，对于绝经后妇女骨质疏松症的研究较多，而老年男性骨质疏松症并没有得到应有的重视，有报道显示老年男性骨质疏松的危害并不亚于老年女性，其伤残率和死亡率均明显高于老年女性[3]。因此确定老年男性骨质疏松的危险因素有助于预防及减少老年男性人群骨折发生率及致残率，从而提高晚年生活质量。

有研究发现，OP 46%～62% 由遗传因素决定，38%～54%取决于后天因素[4,5]，因此，从基因学角度研究十分必要，Klotho基因首次是由Kuro-o于1997年发现的，被报道与OP的发生密切相关，主要集中于G395 A、 F352 V、C1818T基因位点等[6]， 而不同国家、地区、民族、性别间的研究结果不尽相同[7-11]。

本研究通过病例-对照研究分析武汉地区汉族老年男性骨质疏松症的危险因素，并重点分析Klotho G-395 A位点基因分布差异。

1 对象与方法

1.1 研究对象

回顾性调查：收集武汉第一医院老年科2015年2月至2016年10月住院的武汉地区汉族老年男性人群(年龄≥60岁)作为研究对象，共计195例，符合下列入选标准：所有病例均排除严重脑血管病、急性心肌梗死、肿瘤、严重肝肾功能不全、急性感染及应激等影响实验结果的疾病。

将195例实验对象随机分为两组：1.符合WHO原发性骨质疏松症诊断标准[12](即双能X 线测得骨密度值≤青年健康人群骨密度-2.5SD)，除外继发性骨质疏松症老年男性患者(平均年龄78.71±6.17)110例，作为原发性骨质疏松组OP组；2.同期住院无骨质疏松症(即双能X线测得骨密度值>青年健康人群骨密度-1SD)老年男性人群(平均年龄74.27±7.14)85例，作为骨质疏松症对照组。

1.2 方法

1.2.1临床资料

收集入选病例的年龄、测量身高、体重、计算体重指数(BMI)，测量收缩压(SBP)、舒张压(DBP)，清晨空腹采血化验血糖(FBG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 等各项指标。

1.2.2骨密度测定

应用法国DMS公司生产的DEXA检测腰椎前后位和(或)髓关节BMD,每日开机后用体模对设备进行BMD校准,当体模测量值的变异系数(腰椎为1.2%,股骨近端为2.0%)在正常范围内时即可开始检测,每部位重复操作3次,每次均重新定位。骨密度检测人员是经过专门培训的同一个技术人员,骨密度分析系统可自动获得BMD结果。

1.2.3Klotho基因SNP检测

用Taqman等位基因特异性杂交分析进行单核苷酸多态性(SNP)分型。参照Klotho基因序列(NCBI序列号:AL161898)及文献,由合成引物和Taqman探针,上游引物:TAGGGCCCGGCAGGAT,下游引物CCTGGAG-CGGCTTCGTC,FAM标记探A:CCCCAAGT-CGGGAAAAGTTGGTC,HEX标记探针G:CCC-CCAAGTCGGGGAAAGTTGGTC。采用20 μl反应体系,上下游引物浓度均为0.8 μmol/L,探针A和G终浓度分别为75 nmol/L和250 nmol/L,反应条件:95°预变性3 min,95°15 s、60°1 min共40个循环,在荧光定量PCR仪上进行扩增。

1.3 统计分析

建立数据库，将资料统一录入数据库，利用SPSS18.0软件，对连续变量的危险因素进行t检验，将非连续变量危险因素的暴露等级分为两级(有、无)，计算每个因素的OR值及95%CI，应用多元Logistic回归分析武汉市汉族老年骨质疏松的独立危险因素。

2 结果

2.1 临床资料比较

两研究组 DBP、LDL-C水平无显著差异(F值分别为0.393、3.445,P值均>0.05)；OP组年龄、BMI、SBP、FBG水平高于对照组 (F值分别为6.790、0.360、6.537、10.084，P值均<0.05)。见表1。

表1 两组临床资料的比较Table 1 Comparison of clinical data between

2.2 Klotho G-395 A 基因位点分布

OP组AA基因型及A等位基因频率较对照组均升高，有显著性差异(OR值分别为2.429、1.462，P值分别为0.022、0.027)，两组AG、GG基因型频率无统计学差异(P值均>0.05)见表2。

2.3 应用Logistic回归分析OP危险因素

以是否患骨质疏松为因变量，将单因素分析有统计学意义的5个因素作为自变量选入多因素进行Logistic多元回归分析，结果显示，年龄、BMI、SBP、FBG、klotho基因G395 A AA基因型5个因素均为武汉地区汉族老年男性患者发生骨质疏松的危险因素(OR值分别为1.088、1.319、1.055、1.208、2.969，P值分别为 0.002、0.001、0.001、0.049、0.033)，其中AA基因型是武汉地区汉族老年男性骨质疏松的易感基因型。见表3。

表2 Klotho 基因G-395 A多态性分布[n(%)]Table 2 The polymorphism distribution of Klotho gene G-395 A [n (%)]

表3 OP危险因素分析(Logistic回归分析)Table 3 Risk factors analysis of OP (logistic regression analysis)

3 讨论

在老年人群中，OP的发生率高、致残率高，越来越成为困扰老年人的疾病之一。骨折作为OP的临床后遗症,普遍认为主要是绝经妇女的健康问题[13],但男性也承担着巨大的健康负担。50岁以上的男性骨质疏松患者的骨折风险高达22%左右[13]。和女性不同，男性倾向于缓慢地丢失骨量[14, 15]。因此，研究老年男性骨质疏松的危险因素，有助于指导易感人群预防骨质疏松，减少男性的骨质流失和骨折风险[16, 17]。

本研究校正混杂因素后行Logistic回归分析，显示年龄、高体重指数、高收缩压、高空腹血糖、Klotho G-395 A AA基因型是武汉市汉族老年男性骨质疏松的独立危险因素，其中Klotho G-395 A位点中AA基因型可能是武汉汉族老年男性骨质疏松的易感基因型，这与MG Pavlatou等研究类似，证明了原发性骨质疏松症的发生、发展可能与Klotho G-395 A基因表达异常有关10。目前有关Klotho G-395 A位点与OP的关系有不同的研究结果，分析可能与被研究人群的年龄、地区和种族差异不同有关，还需进一步的采取不同地区及种族的大样本实验研究证实。

增龄是OP的危险因素，多篇文献已明确，随着年龄的增加，成骨细胞活性减弱、1α羟化酶活性减弱、甲状旁腺及降钙素等参与骨形成的激素均减少，从而导致OP的发生[18]。而BMI与OP的关系存在争议，有文献报道较高的体质量和BMI可以保护机体，减少OP的发生[19]，而本研究显示高BMI是武汉地区老年男性OP危险因素，可能对于骨质疏松的发生，体重指数有相对安全范围，过高、过低的BMI指数均为OP的危险因素。此外，两组对比，高收缩压的老年男性患者更易罹患OP疾病，而两组舒张压对比无明显统计学差异，可能原因为老年人脉压差增大，多以单纯收缩压升高为主，收缩压升高会引起钙代谢紊乱，尿钙排泄增多，导致骨骼脱钙[20]，从而引起OP的发生。本研究还证实了高空腹血糖是武汉地区老年男性OP的危险因素，糖尿病与OP的关系是近年来研究的热点，很多学者认为肥胖、高胰岛素血症、氧化应激、慢性炎症反应、终末糖基化产物等因素可能导致骨代谢的异常[21]。

综上所述，年龄、BMI、SBP、FBG、klotho基因G395 A AA基因型可作为武汉地区汉族老年男性骨质疏松的预测指标，但具体机制还需做进一步的深入研究。