碱偏离型恩诺沙星注射液对靶动物的安全性试验

董惠峰，刘 芳,2，张俊霞，李 源,2，张凤洪,2*

(1.鼎正动物药业(天津)有限公司 天津 300383；2.天津市饲用微生物制剂企业重点实验室 天津 300383)

恩诺沙星作为广谱的动物专用抗菌药物，已广泛应用于多个国家的兽医临床，对多种病原菌引发的疾病都起到了良好的防治效果。本试验按照兽药新制剂申报的指导原则，并参考有关文献，对偏碱性恩诺沙星注射液进行了临床前靶动物的安全性试验，为兽医临床的安全用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验药物

偏碱性恩诺沙星注射液，由鼎正动物药业(天津)有限公司提供。

1.2 试验动物及饲料

AA白羽肉鸡雏，购自长春市农科院饲养场；肉鸡系列饲料(一号料)，购自长春市吉源饲料厂，批号20140916。

1.3 试验方法

将试验动物随机分为 5组，每组 50只，在前期实验确定的最佳给药剂量的基础上，分别以 1倍(1.75,mL/kg)、3 倍(5.25,mL/kg)、5 倍(8.75,mL/kg)、10倍(17.5,mL/kg)剂量连续 3,d给药，观察临床症状，分别于末次给药、停药7,d后随机抽取10只试验雏鸡的颈静脉血，剖检摘取采血试验雏鸡的心、肝、脾、肺、肾和法氏囊等脏器并称重、记录，计算各脏器的脏器系数(脏器重/体重)，通过肉眼观察和 HE染色分别对各脏器的外观和组织病理变化进行检查。

1.4 数据处理

2 结 果

2.1 临床症状表现

给药后每天观察记录雏鸡的临床症状变化，精神状态、食欲、粪便、呼吸等。健康对照组的雏鸡精神状态良好，食欲、排便及呼吸正常；给予 1倍剂量(推荐剂量)偏碱性恩诺沙星注射液组的雏鸡，精神状态、食欲、粪便、呼吸均表现正常，与不给药对照组的雏鸡无明显差异；给予3倍及以上剂量的偏碱性恩诺沙星注射液组的雏鸡喜卧、精神沉郁、排黄白色稀便，部分雏鸡精神萎靡、死亡(见表1)。

2.2 血液生理指标测定

血液生理指标测定结果显示(见表2)，给予1倍剂量(推荐剂量 1.75,mg/kg)试验雏鸡各指标在末次给药结束和停药 7,d后，与健康对照组相比差异不明显；给予 3倍剂量(5.25,mg/kg)试验雏鸡各指标在末次给药结束和停药 7,d后，与健康对照组相比，除白细胞差异显著外，其余各指标均差异不显著；给予5倍剂量(8.75,mg/kg)和10倍剂量(17.5,mg/kg)试验雏鸡各指标在末次给药结束后，与健康对照组相比，白细胞和中性粒细胞差异显著，停药 7,d后，中性粒细胞恢复正常，白细胞差异仍显著，其余各指标均差异不显著。

表1 偏碱性恩诺沙星注射液对雏鸡临床表现的影响/%(±s，n＝10)Tab.1 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection clinical manifestation of chicks/%(±s，n＝10)

表1 偏碱性恩诺沙星注射液对雏鸡临床表现的影响/%(±s，n＝10)Tab.1 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection clinical manifestation of chicks/%(±s，n＝10)

组别 动物数 给药剂量 临床症状健康对照组 50 不用药 精神、食欲均正常1倍剂量组 50 1.75,mg/kg 精神、食欲均正常3倍剂量组 50 5.25,mg/kg 少部分雏鸡精神萎靡，呼吸困难，口流粘液，食欲减退5倍剂量组 50 8.75,mg/kg 部分雏鸡精神萎靡，呼吸困难，口流粘液，食欲减退，有死亡10倍剂量组 50 17.5,mg/kg 大部分雏鸡精神萎靡，呼吸困难，口流粘液，食欲减退，有死亡

表2 偏碱性恩诺沙星注射液对鸡血液学检测指标的影响(±s，n＝10)Tab.2 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on blood biochemistry index of chicks(±s，n＝10)

表2 偏碱性恩诺沙星注射液对鸡血液学检测指标的影响(±s，n＝10)Tab.2 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on blood biochemistry index of chicks(±s，n＝10)

*为差异显著(0.01＜P＜0.05)

组别 RBC(1012/L) HGB(g/L) WBC(109/L)NEUT(109/L)EON比率%,BASON比率%, LYMPHN比率%, MONON比率%,健康对照组 3.06±0.16 103±0.48 21.53±0.64 2.33±0.11 6.47±0.53 1.48±0.04 57.2±0.3 4.62±0.17 1 倍剂量组(给药结束) 3.13±0.25 109±0.13 24.15±0.07 2.03±0.62 6.66±0.25 1.32±0，14 53.24±1.56 4.69±1.02 3 倍剂量组(给药结束) 2.86±0.13 95±0.23 50.15±0.17* 2.25±0.32 6.51±0.35 1.30±0.22 53.14±1.41 4.96±1.48 5 倍剂量组(给药结束) 2.83±0.02 80±0.63 50.12±0.12* 3.51±0.41* 6.56±0.42 1.36±0.16 57.28±1.19 4.89±1.26 10 倍剂量组(给药结束) 2.73±0.15* 80±0.13 40.35±0.13* 4.65±0.42* 6.53±0.33 1.24±0.22 59.58±1.37 5.16±1.14 1 倍剂量组(停药 7,d 后) 3.08±0.17 115±0.27 21.46±0.71 2.11±0.53 6.43±0.52 1.44±0.12 54.43±2.62 4.94±0.07 3 倍剂量组(停药 7,d 后) 2.83±0.04 105±0.47 42.16±0.51* 2.03±0.61 6.38±0.57 1.38±0.23 56.52±1.16 4.57±0.37 5 倍剂量组(停药 7,d 后) 2.82±0.16 90±0.57 43.05±0.41* 2.63±0.72 6.51±0.46 1.41±0.25 56.58±1.19 4.68±0.57 10 倍剂量组(停药 7,d 后) 2.78±0.15 90±0.17 45.22±0.53* 3.74±0.53* 6.37±0.62 1.40±0.17 57.88±1.23 4.75±0.62

2.3 血液生化指标测定

不同剂量组雏鸡给药前后的血清生化指标检测结果见表3。1倍剂量(推荐剂量 1.75,mg/kg)组雏鸡给药后，药物在雏鸡组织器官内吸收、代谢良好，给药结束时除血清总胆红素正常外，白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、碱性磷酸酶等血液生化指标都有明显变化。停药7,d后，各项指标恢复正常，即偏碱性恩诺沙星注射液可在停药 7,d内经过肾脏排泄出体外，对雏鸡肝脏、肾脏损伤较小。

3倍剂量偏碱性恩诺沙星注射液组的雏鸡血液生化指标检测结果显示，给药结束时除血清总胆红素正常外，白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、碱性磷酸酶等血液生化指标亦有明显变化。停药 7,d后，白蛋白、总蛋白指标明显低于健康对照组和 1倍剂量组；谷草转氨酶(AST)与碱性磷酸酶血液生化指标明显高于健康对照组和1倍剂量组。

5倍及以上剂量偏碱性恩诺沙星注射液组的雏鸡血液生化指标检测结果显示，给药结束时除血清总胆红素正常外，白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、碱性磷酸酶等血液生化指标亦有明显变化。停药 7,d后，白蛋白、总蛋白指标均明显低于健康对照组和 1倍剂量组；谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶血液生化指标明显高于健康对照组和 1倍剂量组。

表3 偏碱性恩诺沙星注射液对鸡血液生化学检测指标(±s，n＝10)Tab.3 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on hematology index of chicken(±s，n＝10)

表3 偏碱性恩诺沙星注射液对鸡血液生化学检测指标(±s，n＝10)Tab.3 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on hematology index of chicken(±s，n＝10)

组别 白蛋白参考范围38～55(g/L)谷丙转氨酶参考范围0～40(U/L)谷草转氨酶参考范围0～40(U/L)血清总胆红素参考范围 2.1～19(µmol/L)总蛋白参考范围60～80(g/L)碱性磷酸酶参考范围10～115(U/L)健康对照组 39.6±2.02 25.3±2.16 24.6±2.36 3.2±0.99 60.3±9.58 80.4±2.33 1 倍剂量组(给药结束) 13.1±5.68 118.8±1.83 234.6±25.89 18.2±4.24 23.8±8.47 4,029.4±125.89 3 倍剂量组(给药结束) 14.2±3.54 236.9±1.89 342.5±54.58 16.3±8.69 25.2±8.75 4,200.4±253.47 5 倍剂量组(给药结束) 11.7±2.54 335.7±1.87 406.3±54.52 12.3±3.56 23.8±5.68 4,678.3±328.24 10 倍剂量组(给药结束) 10.8±2.14 366.1±2.53 526.4±87.92 11.8±4.21 20.2±5.47 5,778.6±532.14 1 倍剂量组(停药 7,d 后) 40.5±5.24 28.5±4.14 28.4±9.24 3.6±0.74 60.6±17.21 96.7±19.32 3 倍剂量组(停药 7,d 后) 34.4±4.21 22.6±9.27 72.5±18.47 17.4±6.57 45.4±12.51 896.5±148.59 5 倍剂量组(停药 7,d 后) 29.6±6.97 172.7±41.21 284.3±76.28 5.8±1.47 32.3±9.36 1,256.8±234.17 10 倍剂量组(停药 7,d 后) 19.2±5.28 223.8±24.88 268.7±43.23 12.9±4.21 20.5±4.57 2,486.3±278.44

2.4 病理组织学观察

2.4.1 连续给药3,d后各脏器病理组织学观察

连续给药 3,d后，颈静脉采血完毕，剖检试验雏鸡，肉眼观察，与健康对照组相比，偏碱性恩诺沙星注射液各剂量组均未发现任何明显的病变和异常。病理组织学切片结果显示：偏碱性恩诺沙星注射液各剂量组试验雏鸡的心脏、脾脏无明显病理学变化。1倍剂量(推荐剂量1.75,mg/kg)组试验雏鸡肝脏有少量细胞核碎裂和溶解，呈现轻微坏死，法氏囊小叶中存在少量水肿液。随着给药剂量的增加，试验雏鸡肝脏的嗜碱性粒细胞明显增多且大量聚集，呈现局部区域性化脓灶，中门静脉血管组织中有大量红细胞聚集、充血；肺脏的肺泡腔间质增厚，且充血、出血逐渐明显，支气管管腔充血，并伴有炎性细胞浸润；肾小管管腔和间质间有充血，且炎性细胞逐渐增多，雏鸡肾脏呈现不同程度的病理损伤；法氏囊小叶中存在少量水肿液，随着给药剂量的增加，法氏囊小叶出现组织缺失，并有红色团状物质存在，组织间隙增宽。由此可见，给予不同剂量偏碱性恩诺沙星注射液后，雏鸡肝脏、肺脏、肾脏和法氏囊均呈现不同程度的病理损伤。

2.4.2 停药7,d后各脏器病理组织学观察

停药7,d后，颈静脉采血完毕，剖检试验雏鸡，肉眼观察，与健康对照组相比，偏碱性恩诺沙星注射液各剂量组均未发现任何明显的病变和异常。病理组织学切片结果显示：偏碱性恩诺沙星注射液各剂量组试验雏鸡的心脏、脾脏和法氏囊无明显病理学变化。1倍剂量(推荐剂量1.75,mg/kg)组试验雏鸡各组织器官无明显病理学变化。3倍剂量(5.25,mg/kg)组和5倍剂量(8.75,mg/kg)组试验雏鸡肺脏肺泡腔间质充血、出血明显，肺泡数量减少；肾小管管腔和间质间有充血，且炎性细胞增多。10倍剂量(17.5,mg/kg)组雏鸡肝脏有少量血细胞集聚；肺泡腔间质有明显出血和肺泡数量减少，支气管管腔充血，并伴有炎性细胞浸润；肾小管管腔内，炎性细胞明显增多。

2.5 器官指数测定

不同剂量组试验雏鸡给药前后器官指数的测定结果表明(见表4)，给予 1、3、5、10倍临床推荐剂量(1.75、5.25、8.75、17.5,mg/kg)的偏碱性恩诺沙星注射液，连续给药 3,d及停药 7,d后，各脏器指数与健康对照组相比，差异不明显。

表4 偏碱性恩诺沙星注射液对雏鸡脏器相对体质量的影响/%(±s，n＝10)Tab.4 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection organ relative weight of chicks/%(±s，n＝10)

表4 偏碱性恩诺沙星注射液对雏鸡脏器相对体质量的影响/%(±s，n＝10)Tab.4 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection organ relative weight of chicks/%(±s，n＝10)

*为差异显著(0.01＜P＜0.05)

检测时间 心脏 肝脏 脾脏 肺脏 肾脏 法氏囊健康对照组 0.93±0.083 4.82±0.34 0.06±0.02 0.73±0.17 0.93±0.11 0.13±0.01 1 倍剂量组(给药结束) 1.01±0.45 4.44±0.80 0.06±0.05 0.73±0.44 0.86±0.62 0.11±0.15 3 倍剂量组(给药结束) 0.98±0.088 4.50±1.010 0.08±0.023 0.63±0.311 0.87±0.30 0.16±0.03 5 倍剂量组(给药结束) 0.94±0.62 4.67±0.16 0.08±0.05 0.81±0.07 0.93±0.11 0.15±0.11 10 倍剂量组(给药结束) 0.89±0.01 5.27±0.63 0.08±0.006 0.70±0.11 0.98±0.22 0.13±0.00 1 倍剂量组(停药 7,d 后) 1.05±0.55 4.62±1.95 0.06±0.004 0.74±0.22 0.74±1.21 0.15±0.31 3 倍剂量组(停药 7,d 后) 1.03±0.886 4.20±1.410 0.07±0.210 0.67±0.013 0.76±0.47 0.14±0.20 5 倍剂量组(停药 7,d 后) 0.93±0.89 4.33±0.32 0.07±0.10 0.74±0.17 0.82±0.48 0.16±0.27 10 倍剂量组(停药 7,d 后) 0.98±0.08 4.30±0.18 0.07±0.14 0.90±0.40 0.77±0.36 0.11±0.01

3 结 论

本研究以人工构建的雏鸡大肠杆菌病模型为基础，给予 1倍剂量(推荐剂量 1.75,mg/kg)、3倍剂量(5.25,mg/kg)、5倍剂量(8.75,mg/kg)和10倍剂量(17.5,mg/kg)偏碱性恩诺沙星注射液，在连续给药3,d后，雏鸡血液生理指标显示：1倍剂量组(推荐剂量 1.75,mg/kg)试验雏鸡各指标在末次给药结束和停药 7,d后，与健康对照组相比差异不明显。随着给药剂量的增加，白细胞和中性粒细胞数量明显增高。停药7,d后白细胞差异仍显著，其余各指标均差异不显著。血液生化指标显示：1倍剂量组(推荐剂量1.75,mg/kg)试验雏鸡各指标在停药 7,d后各指标恢复正常。随着给药剂量的增加，白蛋白和总蛋白升高，谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶降低。病理组织切片显示：随着给药剂量的增加，肝脏、肺脏和法氏囊有病理损伤，在给药结束 7,d后，1倍剂量(推荐剂量 1.75,mg/kg)组试验雏鸡各组织器官无明显病理学变化。3倍剂量(5.25,mg/kg)组和 5倍剂量(8.75,mg/kg)组试验雏鸡肺脏肺泡腔间质充血，出血明显，肺泡数量减少；肾小管管腔和间质间有充血，且炎性细胞增多。10倍剂量(17.5,mg/kg)组雏鸡肝脏有少量血细胞集聚；肺泡腔间质有明显出血和肺泡数量减少，支气管管腔充血，并伴有炎性细胞浸润；肾小管管腔内炎性细胞明显增多。得出结论，给予雏鸡1倍剂量(1.75,mg/kg)偏碱性恩诺沙星注射液时，对雏鸡生存状态和脏器影响较小，使用安全，可作为临床推荐剂量使用。