微贮栗树叶中单宁含量的变化研究

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(1.唐山师范学院，唐山市动物营养与饲料工程重点实验室，河北 唐山 063000；2.唐山市有巢农业开发有限公司，河北 迁西 064300)

0 引言

植物单宁是广泛存在于植物体内的次生代谢产物, 为分子量500～3000Da的多酚类化合物, 按其结构的不同可分为水解单宁和缩合单宁两大类。单宁的化学性质活泼, 尤其是饲料中的单宁易与蛋白质、糖类、金属离子等结合而成为难以消化吸收的复合物, 使其具有抗营养作用[1-2]。对于反刍动物而言，高含量的单宁可以与唾液中的蛋白质、粘蛋白在口腔发生作用而产生涩味，影响动物的采食量；单宁的抑菌作用也会影响瘤胃的发酵功能，限制食草动物对营养物质的利用[3]。近年来，板栗产业发展迅速，种植面积不断增加，栗树叶的产量也大大增加。研究表明，栗树叶中含有较丰富的粗蛋白、粗脂肪等营养物质，可作为反刍动物优质的粗饲料，具有很好的开发价值。但因单宁含量高，目前只是作为鹿用粗饲料。研究表明[3]，某些微生物可以将单宁降解，从而降低其抗营养作用。鉴于此，本研究利用微贮发酵技术处理栗树叶，以研究其对栗树叶中单宁含量的影响，以便为栗树叶的深入开发利用提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 样品采集及处理

从河北省唐山市迁西县板栗生产基地采集栗树叶样品，样品采集后，按照菌种活化→菌液配制→栗树叶处理→装罐→密封等步骤对样品进行微贮发酵，每个组设3个重复，发酵时间45 d。栗树叶微贮发酵配方及分组见表1。发酵结束后，取各组栗树叶发酵物400 g，一部分烘干、粉碎、保存备用，一部分用于测定pH。

表1 各组微贮成分搭配

注：表中“-”表示未添加该试剂。

1.2 测定指标及方法

1.2.1 pH测定

对采集的微贮栗树叶样品各取100 g，加入900 mL蒸馏水，冷藏保存24 h，制成浸提液，用pH测定仪立即测定浸出液pH。

1.2.2 单宁测定

分光光度法[4-5]

1.3 数据处理与分析

试验所得数据用Excel2010软件进行统计分析。

2 结果及分析

对5组微贮栗树叶的pH及单宁含量及微贮处理前的栗树叶中单宁含量测定结果见表2。

表2 微贮栗树叶的PH和单宁含量测定结果

注：表格中的数据为平均值±标准误，用标记字母法表示差异显著性，同列数据标有不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)；同行数据字母不同表示差异显著(P<0.05)。

从表2数据可见，各组栗树叶微贮后pH均下降，且均在4以下，但各组间无显著差异(P>0.05)；各组微贮栗树叶中单宁含量分别比微贮前降低42.99%、47.25%、23.81%、39.81%和38.14%，均达到极显著水平(P<0.01)；以2组的降低比例最大，3组的降低比例最小。说明2组配方组合微贮发酵时对单宁的降解效果最好。

3 讨论

试验结果显示，5个处理组的栗树叶经过微贮发酵45 d后，pH均低于4，说明发酵效果很好。张养东等(2016)报道[6]，pH是评定青贮饲料品质的指标之一，优质的青贮饲料pH一般低于4.2。栗树叶微贮发酵可以极显著降低栗树叶中单宁含量。单宁作为抗营养因子，可以与饲料中蛋白质、矿物元素等结合，降低营养物质利用率，还可以降低饲料的适口性，从而降低动物的采食量。

何强等(2001)报道[7]，对于饲料中的单宁可以通过加入竞争试剂、蒸汽加热、微波加热等热处理、加入碳酸氢钠等碱处理方法降低单宁的抗营养作用。很多文献显示单宁可抑制某些细菌活性，而很多霉菌、酵母菌或细菌对单宁具有很好的降解作用。李东生(2006)研究了黑荆棘树单宁的含量、抑菌效果和作用机理，结果显示，黑荆棘树单宁具有很好的抑菌效果[8]。张梅梅研究了单宁对反刍动物瘤胃微生物的影响，发现一定添加量的单宁可以降低瘤胃总细菌、厌氧真菌、三种纤维降解菌、普雷沃氏菌、丁酸弧菌和产甲烷菌的数量，说明单宁对细菌生长有一定限制作用[9]。艾庆辉等(2011)报道[10]，可以通过微生物处理技术降低植物饲料中单宁含量，某些霉菌、芽孢杆菌属的细菌、少数种类的酵母菌和乳酸菌对降解单宁均有一定的效果。王晓东(2012)报道[11]，通过筛选，获得了18株单宁降解菌，可以降解菜籽粕中单宁含量，18株单宁降解菌包括细菌6株、酵母菌1株、霉菌11株。本研究中用于栗树叶微贮发酵的菌剂中含有酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌等细菌，这些细菌在微贮发酵过程中通过一系列的反应将栗树叶中的单宁进行分解。

4 结论

试验结果表明，通过微贮技术处理栗树叶，可使栗树叶中单宁含量明显降低。为提高栗树叶的利用效率饲料化开发利用提供了技术支持。