高效液相色谱法测定食品中胭脂虫红的含量

□ 张艳娇 广州万正药业有限公司

胭脂虫红是从仙人掌上的雌性胭脂虫体内提取的一种蒽醌类天然色素[1]，其理化性质非常稳定，色调呈粉红至紫红，被视作最安全的天然色素而用于食品、化妆品、药品及纺织品等生产。欧洲、美国、日本及中国都允许作食品添加剂使用，《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）中明确规定其使用范围及最大使用量，但尚无相关检验方法标准。为了保障食品中胭脂虫红的合理使用，本文针对不同类型的食品（饮料、糖果、肉制品等），建立高效液相色谱法（HPLC）快速测定食品中胭脂虫红含量的检测技术，为食品质量监督检测提供准确、高效分析方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

胭脂虫红标准物质：分子式C22H20O13，CAS登录号 1260-17-9，纯度98.5%，德国Dr.公司。甲醇、乙腈：色谱纯，美国TEDIA公司。胭脂虫红储备液：准确称取胭脂虫红标准物质100.0 mg，用超纯水溶解并定容至100 mL容量瓶中，配制浓度为1 000 µg/mL标准储备液。

1.2 仪器与设备

液相色谱仪：HPLC-2010A型，日本岛津公司。分析天平：CPA324S型，德国Sartorius公司。超声波萃取仪：SK2510LHC型，上海科导公司。离心机：Concentrator plus型，德国Eppendorf公司。

1.3 色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（ 250 mm×4.6 mm×5 µm）。检测波长：275 nm。流动相：乙腈-0.5% H3PO4溶液（80:20）。流速：1.0 mL/min。柱温：25 ℃。进样量：10 μL。

1.4 样品前处理

样品经粉碎后准确称取5.0 g（精度0.1 mg），加5 mL 0.5%磷酸水溶解，超声萃取5 min，加入0.5%磷酸水定容至10 mL，8 000 rpm离心30 s，取上清液过0.45 µm微孔滤膜，滤液供HPLC测定。

2 结果与分析

2.1 吸收波长的选择

采用光二极管阵列检测器（PAD）对胭脂虫红标准溶液进行190～800 nm紫外可见光吸收峰扫描，结果发现胭脂虫红在275、310、495 nm波长处均有较大吸收峰，其中275 nm的紫外吸收峰响应值最高，且峰形最好。故检测波长选择275 nm。

2.2 流动相的选择

比较了甲醇/乙腈-水、甲醇/乙腈-乙酸钠缓冲液、甲醇/乙腈-H3PO4溶液等不同流动相体系对胭脂虫红的色谱分离情况。结果表明：当以乙腈-0.5% H3PO4溶液（80∶20）作为流动相时，胭脂虫红峰形对称，保留时间为13.589 min（图1）。

图1 胭脂虫红标准品的高效液相色谱图

2.3 萃取溶剂的选择

分别采用正己烷、乙酸乙酯、乙腈、磷酸水溶液等试剂萃取食品中胭脂虫红，结果发现磷酸水溶液具有较高的萃取率，且当使用0.5%磷酸水作为萃取溶液时，胭脂虫红萃取率高达98.7%。故选择0.5%磷酸水作为萃取溶剂。

2.4 线性范围、定量限、精密度及回收率

准确移取适量胭脂虫红标准储备液到容量瓶中，用去离子水定容配制 浓 度 依 次 为 0.5、1.0、5.0、10.0、50 mg/kg系列标准工作液，以胭脂虫红质量浓度（x）为横坐标，以相应色谱峰响应值（y）为纵坐标，绘制标准曲线。结果显示：胭脂虫红在0.5～50 mg/kg范围内，具有较好的线性关系，线性回归方程为 y=3.12×104x+2.3×103，相关系数r2为0.999 9。通过对添加一系列低浓度的胭脂虫红的试样进行HPLC测定，以10倍信噪比计算定量限，结果显示：本方法定量限为0.1 mg/kg。通过对饮料、糖果、肉制品等不同食品进行胭脂虫红加标试验，使其终浓度分别为0.5、25、50 mg/kg，按本文所建HPLC法进行测定，3种不同食品在3种加标水平下，胭脂虫红的加标回收率为89.3%～98.8%，相对标准偏差为1.58%～3.12%。

3 结论

本研究建立了食品中胭脂虫红的高效液相色谱检测方法，该法操作简单、准确高，适于食品中胭脂虫红含量的测定，可为食品中胭脂虫红的监督检验提供检测技术。