血力口服液的毒理学安全性评价

姜涛　黄静　彭晓辉　董婧婧　许冬瑾　乐智勇

【摘 要】目的：探讨血力口服液的安全性。方法：以健康成年SPF级昆明小鼠、SD大鼠及鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型四株试验菌株（TA97、TA98、TA100、TA102）为受试对象，进行急性经口毒性实验、三项遗传毒性试验及30天喂养实验。结果：血力口服液对两种性别的小鼠经口MTD均大于15g/kgBW；三项遗传毒性试验结果均为阴性，在受试剂量范围未见致突变活性；30天喂养试验中受试大鼠各项生理、生化指标与对照组比较，无显著性差异（P>0.05）。结论：血力口服液无明显毒副作用。

【关键词】血力口服液；急性毒性；遗传毒性；30天喂养试验

【中图分类号】R285.5 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0019（2018）04--01

为确保其发挥药效的同时兼顾安全性，本次试验参考《保健食品检验与评价技术规范》[1]，对血力口服液进行了系统的毒理学安全性评价，为血力口服液的进一步开发提供安全性依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 受试物 血力口服液（批号 20160404，20ml/瓶，每日推荐剂量为40ml/60kgBW），为满足毒理实验要求，将样品浓缩8倍后进行后续实验。

1.1.2 动物 SPF级昆明种小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2012-0001；SD大鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2016-0011。

1.1.3 试验菌种 鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株。

1.2 方法

1.2.1 急性毒性试验

选用昆明小鼠20只，雌雄各半，动物体重为18-22g。采用最大耐受量（MTD）法进行小鼠急性毒性试验，设计剂量为25.00g/kg BW（相当于人推荐日摄入量的240倍）。动物检疫3d，试验前动物禁食16h、自由饮水。样品用无菌水配制，配制浓度为0.75g/mL，按最大灌胃量（20mL/kg BW），一次给样，受试物给予剂量为25.00g/kg BW。给样后连续观察14d，记录中毒表现及死亡情况。

1.2.2 三項遗传毒性试验

1.2.2.1 Ames试验

选用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型试验菌株（TA97、TA98、TA100、TA102），开展加与不加大鼠肝S9的平皿掺入法试验。受试物配制及灭菌方法：称取1g样品加无菌水配制成20ml液体，于0.103MPa，灭菌20min，灭菌后对受试物进行无菌检测，37℃培养24h，无菌生长，即得到最高工作浓度50mg/ml（5000μg/皿），其他浓度以此为基础，依次用无菌水，5倍等比稀释。共设5个剂量组，分别为5000、1000、200、40、8μg/皿，同时设未处理对照、溶剂（无菌水、无菌DMSO）对照和阳性对照组，不加S-9的阳性对照为敌克松（50.0μg/皿，适用菌株TA97、TA98、TA102）、叠氮钠（1.5μg/皿，适用菌株TA100）；加S-9的阳性对照为2-氨基芴（10.0μg/皿，适用菌株TA97、TA98、TA100）、1，8-二羟蒽醌（50.0μg/皿，适用菌株TA102）。

1.2.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

选用体重25-30g小鼠50只，随机分组，每组10只，雌雄各半。设计高、中、低剂量组分别为10.0g/kg BW、5.0g/kg BW、2.5g/kg BW，分别相当于人体推荐剂量的96、48、24倍。阳性对照组给予40mg/kg BW环磷酰胺，阴性对照组给予等体积蒸馏水，小鼠灌胃体积20mL/kg BW。采用30h给予受试物法，即两次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h，颈椎脱臼处死小鼠，取胸骨骨髓材料制片、染色，双盲法阅片。

1.2.3 统计分析

采用SPSS11.0软件进行数据处理。对计量资料采用单因素方差分析，按方差分析的程序进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，对方差不齐的数据进行适当的变量转换，使其满足方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐，改用秩和检验进行统计分析。对计数资料采用X2检验。

2 结果

2.1 急性毒性试验

染毒后14d内，动物状态正常，无中毒体征和死亡况，在第15d处死动物进行大体解剖检查，主要器官未见明显异常。受试物对两种性别小鼠的经口MTD大于25g/kg（>15g/kg），属于无毒级

2.2 三项遗传毒性试验

2.2.1 Ames试验：受试物各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照组、未处理对照组回变菌落数2倍以上，无剂量-反应关系，血力口服液在加与不加肝微粒体酶活化系统情况下，Ames试验结果均为阴性。

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

各剂量受试物对两种性别小鼠的骨髓细胞增殖无明显抑制作用，低、中、高三个剂量组PCE/NCE比值说明受试物无细胞毒性。两种性别小鼠各剂量组骨髓PCE微核率与溶剂对照组比较均无显著性差异（P>0.05），说明在受试剂量范围内，血力口服液小鼠嗜多染红细胞微核试验阴性。

3 讨论

血力口服液组方安全，其中阿胶及茯苓属于《卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知》（卫法监发[2002]51号）附件1《可用于保健食品的物品名单》中的品种，葡萄糖酸亚铁为食品营养强化剂，收载在国家中医药管理局制定的《保健食品原料目录（一）》（2016年第205号）中，其他原料党参、白术、木香属于《卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知》（卫法监发[2002]51号）附件2《可用于保健食品的物品名单》中的品种。多项研究资料也证明了上述原料的安全性[2-5]。

参考文献

保健食品检验与评价技术规范[S]，中华人民共和国卫生部，2003，167-224.

郭婕，谢玮，颜燕，等.阿胶的毒理学安全性评价[J].《毒理学杂志》，2013，27（4）：314-315.

余滨，王伯章.复方茯苓甘草汤水煎液的毒理学实验研究[J].《国医论坛》，2010， 25（3）：46-48.

张丽娟.葡萄糖酸亚铁在小儿缺铁性贫血治疗中的应用价值探讨[J].《中国继续医学教育》，2015，7（32）：125-126.

李建恒，周玉勋，郑富稳，等.微量元素铁对小鼠的时辰毒理作用研究[J].《河北职工医学院学报》，1999，16（1）：10-12.