“软伤痛舒灵”擦剂对大鼠急钝性损伤后血清CK、IL-6的影响

赵 航

（北京体育大学，北京 100084）

在体育运动过程中发生的各种损伤称为运动损伤 。损伤后可出现疼痛、皮温升高、关节活动障碍，甚至关肿胀、皮下出血等。这时肌纤维的撕裂、水肿，炎性细胞浸润。传统医学认为，急钝性损伤属于“筋伤”的范畴，气运血行不畅，主要是气滞血瘀，脉络不通 。血瘀则气滞，气滞则疼痛，瘀血不散则化热，故治疗以行气止痛、活血化瘀为主 。本次实验主要目的是制定并完善“软伤痛舒灵”擦剂的配方，建立动物损伤模型，研究软伤痛疏灵对软组织损伤的修复作用，为该药临床治疗急性软组织损伤提供理论依据。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

“软伤痛舒灵”擦剂对大鼠急钝性损伤后血清CK、IL-6的影响。

1.2 研究材料

1.2.1 主要实验仪器 软组织损伤打击器，G＆G T-500型电子天平，基本手术操作器械，血清CK全自动生化分析仪，BIO RAD 酶标仪，低温高速离心机，5mL 真空采血管，Axygen 200ul 吸头，5mL 离心管，500g砝码。

1.2.2 主要材料和试剂 实验试剂：5%水合氯醛 300mL，肌酸激酶（CK）试剂盒，IL-6 酶联免疫（ELISA）试剂盒，软伤痛舒灵原药材，云南白药气雾剂。

实验擦剂的配制和选用：本研究采用50%乙醇作为溶剂进行提取。制配流程如图1。

1.3 研究方法

1.3.1 实验对象 选用SD大鼠36只，SPF级，雄性，8周龄，体重270±10g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。购入后适应性喂养1周。标准啮齿类动物饲料喂养，自由饮食、饮水。鼠笼18个。造模后，按体重给每只大鼠编号，分为空白对照组、损伤模型组、云南白药组、软伤痛舒灵组，共4组，空白对照组6只大鼠，其余每组各10只。

1.3.2 造模方法 空白对照组不做处理，其余3组在造模前一天将右侧后肢脱毛刀脱毛。造模采用自由落体打击，俯卧固定于鼠板上，使腓肠肌暴露清楚。把500g砝码从30cm高处自由下落，打击 1次，造成钝性损伤，形成模型，造模后右侧后肢明显肿胀，皮下淤血，可见跛行，无骨折显示造模成功。

1.3.3 实验给药途径、方法、剂量 造模后遵循RICE原则进行制动、冷敷等，24h后即开始对用药组进行相应干预，损伤模型组用0.9%生理盐水进行对照干预，云南白药组、软伤痛舒灵组2组相应的局部喷药，3次/ d，空白对照组不做任何处理。3d后4组一起取材。采用腹腔注射水合氯醛麻醉大鼠，把腹腔静脉暴露出来，每只分别取静脉血50mL×2，静置30min后，等血液凝固，再放入高速离心机内，离心以后，血清编号分装，置于-20℃的冰箱中保存。

1.3.4 指标的观察与监测 大鼠血清CK 的检测：将低温存放的血清置于常温下解冻后用Max MAT 仪器，用湿式检测方法测定。大鼠血清 IL-6 的检测：采用ELISA 的夹心法测得，将待测样本加入酶标板内进行检测，标准样品的浓度已知，同时先温育生物素标记的抗体。大鼠血清白介素-6（IL-6）洗涤后，加入 HRP酶标记过的亲和素。再将未结合的酶结合物清除掉，然后加入底物 A、B 两种，使其与酶结合物发生显色反应。样品的浓度和颜色的深浅成比。再由 BIORAD 酶标仪测得。

1.3.5 统计学方法 所有数据采用SPSS软件包进行处理，测定结果以`x±SD表示。

2 研究结果

从表1可以看出，损伤模型组是损伤后未作任何处理比空白对照组的血液CK更高，有显著性差异（P＜0.05）。云南白药组CK指标低于损伤模型组，且有明显差异（P＜0.05）；软伤痛舒灵组CK指标低于损伤模型组，且有显著性差异（P＜0.01）；损伤模型组的IL-6数值均高于空白对照组，且存在显著性差异（P＜0.01）；云南白药组、软伤痛舒灵组IL-6值均低于损伤模型组，且存在显著性差异（分别为P＜0.01，P＜0.05）。

3 讨 论

3.1 软伤痛舒灵对骨骼肌损伤后血清CK的作用

CK 存在于动物的骨骼肌中，与肌肉收缩有直接关系。一直以来被作为骨骼肌损伤情况的重要生化指标之一 。在大鼠发生急钝性损伤3天后，观察血清CK变化：损伤模型组的CK值明显高于空白对照组，说明了损伤情况发生。云南白药组和软伤痛舒灵组CK值都是低于损伤模型组，说明在骨骼肌损伤后及时给药的两组受到的干预，使血清CK未能继续急剧上升。因此，软伤痛舒灵可以降低骨骼肌急钝性损伤后的血清CK水平，对骨骼肌损伤的愈合有一定促进作用。

3.2 软伤痛舒灵对骨骼肌损伤后IL-6的作用

白细胞介素-6（IL-6）容易在急、慢性炎症中出现。除了在骨骼肌的损伤中，在修复中也有重要作用，炎症细胞、骨骼肌细胞都可以分泌IL-6 。在大鼠发生急钝性损伤3d后，观察到IL-6：损伤模型组的IL-6值明显高于空白对照组。云南白药组、软伤痛舒灵组的血清 IL-6 含量均小于损伤模型组（分别是P＜0.01，P＜0.05），且接近正常水平，说明软伤痛舒灵能有抑制骨骼肌急性损伤后血清IL-6 的升高。肌肉损伤后，刺激了机体细胞大量分泌和释放 IL-6 等细胞因子，一定量值的IL-6能促进骨骼肌损伤的修复，软伤痛舒灵抑制了炎性细胞，减缓了IL-6的大量释放，对骨骼肌损伤修复有积极作用。

表1 血清CK、IL-6的测试结果 ±s

表1 血清CK、IL-6的测试结果 ±s

注：#表示与空白对照组相比，P＜0.05，##为P＜0.01；*表示与损伤模型组相比，P＜0.05，*为P＜0.01。

组别 只数CK（U/L）IL-6（μg/L）空白对照组损伤模型组云南白药组软伤痛舒灵组6 10 10 10 780.08±116.07 1154.99.51±299.55#830.79±68.26*843.03±73.54**26.12±4.96 32.17±1.07##27.70±1.35**28.24±1.78*

4 结 论

在损伤早期及时给予软伤痛舒灵干预能加快大鼠急钝性软组织损伤的愈合，其原理可能是： 软伤痛舒灵可以降低骨骼肌急钝性损伤后的血清CK水平；软伤痛舒灵抑制了炎性细胞，减缓了IL-6的大量释放。