健胃止痛片的质量标准研究

陈 贵，夏稷子，徐作刚

(黔南州食品药品检验所，都匀 558000)

健胃止痛片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第二册，由草豆蔻、乌药、干姜和曼陀罗浸膏组成，具有温胃散寒、顺气止痛的功效，主治胃寒、脘腹胀痛。在现行的质量标准中，质量控制项目包括性状和草豆蔻的显微鉴别、曼陀罗浸膏的化学鉴别以及片剂通项检查[1]。草豆蔻为方中主药，山姜素是草豆蔻中的主要黄酮类化合物，具有抗炎、抗菌、镇痛、止吐、抗癌和抗氧化等作用，且毒性低、安全性好，已普遍应用于草豆蔻药材及其制剂的质量控制[2-3]。乌药具有顺气止痛、温肾散寒的功效，主要含有挥发油、异喹啉生物碱和呋喃倍半萜等成分，龙脑为其主要成分之一[4]。本实验用TLC法对乌药和干姜进行定性鉴别，用HPLC法测定山姜素的含量，为更好地控制健胃止痛片的质量提供了重要依据。

1 仪器与材料

1.1仪器 LC-2010AHT型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；双光束TU-1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)；AG135型电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；BSA224S型电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；SK250LHC型超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)；KQ-300DE型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；ZF-20D型紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。

1.2试药 曼陀罗、草豆蔻、乌药和干姜药材购自药材市场，经鉴定为正品；山姜素对照品(批号762-9001)，干姜对照药材(批号120942-201510)，龙脑对照品(批号110881-201107)，均购于中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯；水为纯净水；其余试剂均为分析纯。健胃止痛片(批号：20160101，20160605，购自河南金鸿堂制药有限公司；批号160801，购自河北百善药业有限公司)。

1.3材料 G型硅胶板(青岛海洋化工有限公司)。

2 方法与结果

2.1乌药的TLC鉴别

2.1.1供试品溶液的制备 取健胃止痛片10片，除去糖衣，研细，加入石油醚(30～60 ℃)20 mL，超声10 min，滤过后将滤液自然挥干，加入1 mL乙酸乙酯溶解残渣，即得[5-6]。

2.1.2对照品溶液的制备 取龙脑对照品，加入乙酸乙酯，制成质量浓度为1 mg·mL-1的对照品溶液。

2.1.3阴性对照溶液的制备 除乌药外，取其余原药材适量，按照处方制备不含乌药的阴性样品，阴性对照溶液按照2.1.1项下方法制得。

2.1.4鉴别方法 按照TLC法(《中国药典》2015年版四部通则)，将上述供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各吸取2 μL，点于同一G型硅胶板上，置于展开剂为正己烷-乙酸乙酯(8.5∶1.5)的展缸中展开，用香草醛硫酸试液作为显色剂，105 ℃加热使斑点清晰[7]。供试品在与龙脑对照品TLC色谱相应位置上，显相同的紫红色斑点，阴性对照无干扰，见图1A。

2.2干姜的TLC鉴别

2.2.1供试品溶液的制备 取健胃止痛片10片，除去糖衣后研细，置于锥形瓶中，加入30 mL甲醇，水浴回流提取30 min，滤过后将滤液置于水浴上蒸干，用30 mL乙醚使残渣溶解，滤过后将滤液自然挥干，加入2 mL乙酸乙酯使残渣溶解，即得[8-9]。

2.2.2对照药材溶液的制备 取1 g干姜对照药材，按照2.2.1项下方法制得对照药材溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备 除干姜外，取原药材适量，按照处方制备不含干姜的阴性样品，阴性对照溶液按照2.2.1项下方法制得。

2.2.4鉴别方法 按照TLC法(《中国药典》2015年版四部通则)，将上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各吸取2 μL，点于同一G型硅胶板上，置于展开剂为石油醚(30～60 ℃)-乙醚(2∶1)的展缸中展开，置于紫外光灯365 nm处检视[10]。供试品在与干姜对照药材TLC色谱相应的位置上，显相同的黄绿色荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1B。

图1TLC图

A．乌药：1．健胃止痛片；2．阴性样品；3．龙脑。B．干姜：1．健胃止痛片；2．阴性样品；3．干姜。

Fig.1 TLC chromatograms

A．Linderaaggregate(Sims) Kosterm.：1．Jianweizhitong Tablets；2．negative sample；3．borneol.B．ZingiberofficinaleRosc.：1．Jianweizhitong Tablets；2．negative sample；3．ZingiberofficinaleRosc..

2.3山姜素的HPLC测定

2.3.1检测波长的选定 取适量的山姜素对照品加甲醇制成扫描用溶液，波长扫描范围为200～400 nm，扫描结果显示，在208和285 nm处有最大吸收，为了排除溶剂吸收的影响，故选择285 nm作为检测波长。

2.3.2色谱条件 Waters Symmetry®C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(50∶50)；柱温：30 ℃；检测波长：285 nm；体积流量：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。在此条件下，山姜素理论塔板数大于4 000，检测成分与相邻成分之间达到基线分离。HPLC图见图2。

2.3.3对照品溶液的制备 取10.55 mg的山姜素对照品，将其置于50 mL量瓶中，加入甲醇制成山姜素质量浓度为211.0 μg·mL-1的对照品溶液。

2.3.4供试品溶液的制备 取健胃止痛片样品，除去糖衣，研细，取0.3 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇40 mL，超声(功率250 W，频率40 kHz)20 min，放冷，加入甲醇定容，滤过，取续滤液，即得。

2.3.5线性关系考察 分别精密吸取2.3.3项下制备的对照品溶液1 mL，置于2，5，10，50和200 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。取对照品溶液及上述5个线性质量浓度溶液测定峰面积。以山姜素对照品质量浓度为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)，得到回归方程为y=8 658.2x+698.6(r=1.000 0)，线性范围为1.055～211.0 μg·mL-1。

图2HPLC图

A．对照品；B．供试品；C．阴性样品；1．山姜素。

Fig.2 HPLC chromatograms

A.reference substance；B.sample；C.negative sample；1.alpinetin.

2.3.6精密度实验 按照2.3.2项下色谱条件，取同一质量浓度的对照品溶液重复进样6次，记录峰面积，得山姜素峰面积的RSD值为0.15%。结果表明，该仪器精密度良好。

2.3.7稳定性实验 取2.3.4项下制备的供试品溶液，按照2.3.2项下色谱条件分别测定供试品溶液制备0，2，4，6，12和24 h后的含量。测得山姜素含量的平均值为3.04 mg·g-1，RSD值为0.43%。结果表明，供试品溶液在制备后24 h内稳定性良好。

2.3.8重复性实验 取健胃止痛片样品(批号20160101)6份，按照2.3.4项下方法制得供试品溶液，进行重复性实验，按照2.3.2项下色谱条件进行测定。测得6份样品中山姜素的平均含量为3.04 mg·g-1，RSD值为0.60%。结果表明，该方法重复性良好。

2.3.9加样回收率实验 取山姜素对照品9.15 mg，置于10 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.915 mg·mL-1的山姜素加样回收用储备液。取已知山姜素含量的样品(批号20160101)6份，各0.3 g，分别精密加入加样回收用储备液1 mL，按照2.3.4项下方法制备，按照2.3.2项下色谱条件进样测定，计算山姜素的加样回收率。结果见表1。

2.3.10样品测定 取3个批次样品(批号：20160101，20160605，160801)，每批次3份，按照2.3.4项下方法制备供试品溶液，按照2.3.2项下色谱条件进样测定，结果3个批次样品中山姜素的含量分别为3.02，3.77和2.05 mg·g-1。

表1山姜素的加样回收率结果

Tab.1 Results of the recovery test of alpinetin(n=6)

编号称取量/g原含有量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.309 60.9350.9151.870102.19101.70.8320.306 40.9250.9151.866102.8430.303 80.9170.9151.848101.7540.308 60.9320.9151.857101.0950.308 50.9320.9151.863101.7560.303 20.9160.9151.835100.44

3 讨论

3.1山姜素检测波长的选择 相关文献报道了山姜素含量测定时检测波长的选择，包括235，286，294和300 nm等[11-17]，实验根据波长扫描的结果，选择了最大吸收波长285 nm作为山姜素含量测定的检测波长。

3.2山姜素提取条件的选择 实验考察了不同超声时间(10，20和30 min)和超声频率(33，35，40和50 kHz)对样品中山姜素提取的影响，结果显示，在超声频率40 kHz下提取20 min山姜素提取率较高。

3.3山姜素的HPLC法适用性 实验考察了不同色谱柱(Waters Symmetry®C18、Agilent ZORBAX SB-C18、Agilent Eclipse XDB-C18、Diamonsil®C18、AlltimaTMC18和依利特Hypersil BDS-C18，规格均为150 mm×4.6 mm，5 μm)对样品中山姜素检测的影响。预实验中参考相关文献选择了流动相为甲醇-水(70∶30)[18-19]，结果分析时间较短，大部分色谱柱未能使山姜素峰与相邻峰基线分离；当选择流动相为甲醇-水(50∶50)时，6种色谱柱得到的色谱图中山姜素峰形对称，与相邻峰均达到基线分离，说明此方法适用性良好。

4 小结

本实验建立的乌药中龙脑的TLC鉴别方法，可有效控制乌药挥发性成分的损失。从山姜素含量测定结果来看，不同厂家各批次产品之间存在较大差异，有必要建立含量测定方法加以控制，确保产品质量的均一稳定。