大红袍花椒不同部位提取物抗氧化效果研究

王征帆，李娜

（渭南师范学院 化学与材料学院，陕西 渭南 714099）

花椒属于芸香科植物，香气浓郁，是居家必备的一种调味品，具有定麻味、增香辛和除腥减膻的作用，位列调料“十三香”之首，被称为“调味之王”。花椒同时也是一味中药，其药性辛热，归脾、胃、肾经，具有芳香健脾、温中散寒、除湿止痛、杀虫解毒、止痒等功效。李时珍在《本草纲目》中曰：“花椒坚齿，乌发，明目，久服好颜色，耐老，增年，健神。”现代医学研究证明，花椒中含有多种化学成分，具有局麻、镇痛、抗炎、抑菌、抗氧化、抗肿瘤、杀虫等药理活性［1］。目前，对花椒成分研究的资料很多，但花椒不同部位提取物抗氧化效果的研究还未见报道。本研究采用超声波提取法提取陕西韩城产大红袍花椒不同部位的活性成分，并采用紫外分光光度法测定花椒各部位提取物的抗氧化效果，为人们合理利用和进一步开发花椒资源提供参考。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

紫外－可见光谱仪 莱伯泰克有限公司；超声震荡仪 昆山市超声仪器有限公司；多功能搅拌器 广东美的生活电器公司；电子分析天平 北京赛多利斯仪器公司。

过氧化氢（30%，分析纯）、乙醇（75%，分析纯）、硫酸亚铁（分析纯）：西安化学试剂厂；水杨酸（分析纯）：天津市百世化工有限公司；邻苯三酚（分析纯）：天津市北辰区方正试剂厂；磷酸氢二钾（分析纯）：四川金地亚美科技有限公司；磷酸二氢钾（分析纯）：天津市登峰化学试剂厂。

大红袍花椒：产地陕西韩城。

1.2 实验方法

1.2.1 抗氧化成分提取

将处理好的花椒壳、花椒籽、花椒叶分别洗干净，放置于70℃烘箱中烘制4h，取出后分别用粉碎机粉碎，准确称取0.8g 3种样品于3个锥形瓶中加入30mL乙醇（75%），将锥形瓶放入超声震荡仪中震荡30min，取出后进行过滤，将过滤后的滤渣在相同提取条件下再提取2次，将提取液用玻璃棒引流至250mL的容量瓶中定容，制成提取液备用。

1.2.2 羟基自由基清除能力的测定

羟基自由基是目前所有自由基中最活泼的一种，可以与体内的分子发生氧化反应，对身体产生危害，因此研究大红袍花椒不同部位对羟基的清除能力可以评价其抗氧化效果。此次实验利用Fenton反应产生羟基自由基后，加入水杨酸可以与羟基自由基反应生成有色物质。加入具有清除羟基自由基的提取液，能有效地清除羟基自由基，进而减少有色产物的生成量，以致吸光度减少，具体操作如下：

取1支试管，加入8.8mmol/L的H2O2标液0.5mL，然后加入FeSO4（9mmol/L）标液0.5mL，摇匀后加入0.5mL（9mmol/L）水杨酸溶液和2.5mL乙醇（75%），在37℃的恒温水浴锅中反应30min后，设置紫外分光光度计波长为510nm，记录测得吸光度为A1。随后将提取液取一定量加入试管中，反应3min，此时测得吸光度为A3。当显色剂有颜色时，它对测定波长会有吸收，而其他均没有或很少，因此，需要做1组试剂空白实验，将上述FeSO4（9mmol/L）标液换为0.5mL的乙醇（75%），重复上述操作，记录测得的吸光度为A2，清除率计算公式为［2］：

1.2.3 超氧自由基清除能力的测定

超氧自由基也是在人体内产生的一种自由基，会引起人体脂质过氧化，诱发癌症等疾病，严重危害着人体健康。此次实验选用邻苯三酚自氧化法测定花椒各部位提取液对超氧自由基的清除效果，评价其抗氧化效果，具体实验操作如下：

将pH为8.2的K2HPO4－KH2PO4缓冲溶液和浓度为3mmol的邻苯三酚溶液分别放置于30℃的恒温水浴锅中预热30min，预热结束后，先移取邻苯三酚溶液0.3mL至试管中，再加入缓冲溶液5.0mL，迅速震荡使之反应，倒入比色皿中，设定测定波长为320nm，记录测定的吸光度为A4，另取试管加入0.3mL邻苯三酚溶液，加入一定量的花椒壳、花椒叶、花椒籽提取液，再加入5.0mL缓冲液，记录吸光度为A5，清除率计算公式为［3］：

清除率＝（1－A4/A5）×100%。

2 结果与分析

2.1 不同部位提取物对羟基自由基的清除效果

按上述1.2.2的方法分别加入0.2，0.4，0.6，1.0mL提取物样品，测定吸光度，并通过清除率计算公式得出清除率，不同体积乙醇提取液对羟基自由基的清除率见表1。

表1 提取液对羟基自由基的清除率

由表1可知，花椒不同部位的提取液对羟基自由基有一定的清除能力，且清除率与加入提取液的体积成正相关，但花椒部位不同，对羟基的清除能力也有明显的差别，具体表现为花椒叶＞花椒壳＞花椒籽。

2.2 不同部位提取物对超氧自由基的清除效果

按上述1.2.3的方法加入0.2，0.4，0.6，1.0mL提取物样品，测定吸光度，并通过清除率计算公式得出清除率，不同体积乙醇提取液对超氧自由基的清除率见表2。

表2 提取液对超氧自由基的清除率

由表2可知，花椒不同部位的提取液对超氧自由基有一定的清除能力，且清除效果有明显差异，具体清除效果表现为花椒叶＞花椒壳＞花椒籽。且总体清除效果没有羟基自由基好，其中花椒籽对超氧自由基几乎没有清除能力。

3 结论

本实验通过超声波提取法，以乙醇为溶剂，分别对陕西韩城产的大红袍花椒不同部位抗氧化成分进行了提取，并利用邻苯三酚自氧化法和Fenton反应研究了提取物对超氧自由基和羟基自由基的清除效果，据此评价其抗氧化效果。实验结果表明：花椒叶、花椒壳、花椒籽对羟基自由基和超氧自由基均有一定清除作用，清除率与提取物加入的体积成正相关，具有抗氧化效果。但不同部位对自由基清除率不同，表现为花椒叶＞花椒壳＞花椒籽。另外花椒相同部位提取物对2种自由基的清除率有差异，表现为羟基自由基＞超氧自由基。因此，陕西韩城产大红袍花椒叶和花椒壳是非常好的药食两用类原料和天然抗氧化产品。该实验方法具有仪器简单、操作简便等特点，对寻找和筛选天然抗氧化剂资源有实际的意义。