湖南省长沙市某屠宰场猪群主要疫病检测

漆 亮，刘增再，薛 爽，陈 智，谭 丹，唐爱明，赖诗嘉，宁华杰

（长沙市动物疫病预防控制中心，湖南长沙 400013）

猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒（PCV）、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HPPRRSV）和口蹄疫病毒（FMDV）是近年来规模猪场流行和危害最为严重的疫病病原，给养猪业造成了严重经济损失。

为了解湖南省临床健康猪群主要疫病的流行情况，根据“2017年湖南省动物疫病监测与流行病学调查计划”要求（以下简称“监测计划”），长沙市动物疫病预防控制中心于2017年3月-2018年3月在雨花区红星盛业屠宰场，采集临床健康猪群的组织样品，应用实时荧光定量PCR方法，对以上6种主要疫病开展病原学监测，并分析感染情况，为湖南省主要猪群疫病的防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

按照“监测计划”中“国家级、省级定点专项监测计划”的相关规定，每月从红星盛业屠宰场采集2群临床健康猪的扁桃体和淋巴结，每群采集15份，共采集390份，送长沙市动物疫病预防控制中心实验室。

猪群主要来自长沙、岳阳、衡阳、株洲、娄底、永州、郴州7个市（州）。

1.2 试剂

猪瘟病毒/猪蓝耳病毒/伪狂犬病毒/猪圆环病毒Ⅰ型四通道核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）、猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）和口蹄疫病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）：均购自中山大学达安基因股份有限公司；核酸提取试剂盒（磁珠法）：购自苏州天隆生物科技有限公司。

1.3 主要仪器设备

MM400组织研磨仪：购自德国莱驰公司；NP968 核酸提取仪：购自西安天隆科技有限公司；Light Cycler 480 II 荧光定量PCR 仪：购自Roche公司。

1.4 方法

1.4.1 病毒核酸提取 取采集的组织样品（2 g/份），按1∶5加入生理盐水研磨，12 000 r/min离心3 min，取200 µL上清备用。运用西安天隆科技有限公司的核酸提取仪以及配套核酸提取试剂盒（磁珠法）提取病毒核酸[1]，按试剂盒说明书进行操作。

1.4.2 实时荧光定量PCR检测 按照相应疫病的病毒核酸检测试剂盒说明书进行操作及结果判定。1.4.3 感染情况鉴定 同一份组织样品只检测到1种病原核酸阳性的为单一感染，同时检测到2种的为二重感染，同时检测到3种的为三重感染，同时检测到4种的为四重感染[2]。

2 结果与分析

对390份组织样品分别进行CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、HPPRRSV和FMDV核酸检测；根据检测结果，进行感染率、单一感染、二重感染和多重感染分析。

2.1 不同病原感染情况

在这6种病原中，阳性检出率最高的是PCV2，为77.95%；其次是HPPRRSV和PRRSV，分别为24.10%和23.85%；再次是PRV和CSFV，分别为8.46%和5.13%；最低的是FMDV，为0.51%。结果表明，临床健康猪群的主要感染病原是PCV2，其次是PRRSV（图1）。

图1 屠宰场猪群6种病原阳性率比较

2.2 不同时间感染情况

每月的PCV2阳性检出率普遍较高，除2017年8月未检出外，其他月份的阳性率均在50%以上，说明屠宰猪群PCV2的隐性感染情况较为普遍。HPPRRSV和PRRSV几乎每月都有检出，表现出一定的季节性，秋冬季节阳性率明显高于夏季，说明这两种病毒的感染在秋冬季节高发。PRV、CSFV和FMDV检出阳性的月份较少，多数月份无阳性，说明这3种病毒在屠宰猪群中的携带率很低；部分月份的PRV和CSFV检出率偏高，说明屠宰猪群中仍存在局部的严重隐性感染（表1）。

表1 屠宰场猪群6种病原不同时间阳性率比较单位：%

2.3 不同地区感染情况

390份猪组织样品中，有195份来自岳阳，其余来自长沙、衡阳、株洲、娄底、永州和郴州等地。分析发现，PCV2、HPPRRSV、PRRSV感染范围较广，病原分布差异不明显，而CSFV、PRV、FMDV具有明显的区域特征，只在局部地区存在（表2）。

表2 不同地区猪群6种疫病病原阳性率比较 单位：%

2.4 单一感染情况

PCV2的单一感染率最高，为77.95%，FMDV最低，为0.52%（表3）。

2.5 二重感染情况

PCV2和其他病原的混合感染最为多见。其中：感染率最高的是“PRV+PCV2”，阳性率为7.43%；其次是“PRRSV+PCV2”，阳性率为2.31%；再次是“HPPRRSV+PRRS”，阳性率为2.05%（表4）。这表明“PRV+PCV2”混合感染最为普遍。

表3 单一感染情况

表4 二重感染情况

2.6 多重感染情况

“H P P R R S V+P R R S V+P C V 2”三 重 感 染 率 最 高， 为115.4%；“CSFV+HPPRRSV+PRRSV+PCV2”四重感染阳性率最高，为3.85%；“CSFV+PRRSV+PCV2”“CSFV+HPPRRSV+PRRSV”“HPPRRSV+PRRSV+PRV+PCV2”等其他三重以上感染阳性率分别为0.26%、0.77%和0.77%（表5）。

表5 三重以上感染情况

3 讨论

近年来，随着我国养猪业规模化程度增加和集约化发展，病毒的变异频率在加速，导致猪病日趋复杂，免疫失败、新老疫病混合感染时有发生，在流行特点上以多重感染、继发感染、免疫抑制、繁殖障碍症候、呼吸道症候等为主要表征。

检测发现，PCV2感染最为严重。PCV2可导致免疫抑制，降低机体抵抗力，从而继发其他疾病[2]，造成多重感染。这可能是导致猪群两种或多种病毒混合感染普遍存在的主要原因之一。“PRRSV+HPPRRSV”混合感染较为严重，感染毒株类型较为复杂，使得这两种病原的防控工作难度加大。PRV近几年导致的发病率逐渐上升，与PCV2、PRRSV的混合感染也越来越多，需要加快开展猪群的PRV净化，以减少PRV的野毒感染。CSFV阳性率较低，这是因为多年来实施的强制免疫，使猪群获得了较好的保护力，部分猪场甚至达到了猪瘟免疫净化状态。FMDV阳性率偏低，可能与采样和检测方法有关，导致检出阳性率与真实阳性率出现一定的偏差。

对6种病原的检测数据进行统计发现，PCV2与其他病毒的混合感染最为常见。二重感染中，PCV2与PRV的混合感染率最高，为7.43%；三重感染中，与“PRRSV+HPPRRSV”混合感染率最高，为11.54%；四重感染中，与“CSFV+HPPRRSV+PRRSV”的混合感染率最高，为3.85%。韦显凯等[3-4]研究发现，2014年广西部分地区屠宰场“CSFV+PCV2+PRV”的三重感染率为0.67%。由此可见，湖南省临床健康猪群主要疫病的混合感染情况较为严重。

检测结果提示：一要继续落实以免疫为主的综合防控措施，做好猪瘟等主要猪病的基础免疫工作；二要扩大主动监测范围，加大采样监测频次，及时掌握猪群疫病流行状况；三要深入推进猪伪狂犬病、猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征等主要疫病的净化工作，降低猪群主要疫病的隐性感染率。

4 结论

本研究采用实时荧光定量PCR方法，对红星盛业屠宰场采集的390份组织样品进行了6种主要猪群疫病病原的核酸检测，发现PCV2的阳性率最高，其次是HPPRRSV、PRRSV。感染情况分析发现，临床健康猪群的多重感染较为严重，尤其是PCV2与PRRSV、HPPRRSV和PRV的混合感染。因此，要重点加强养殖环节PCV2、HPPRRSV、PRRSV和PRV感染的防控。

[1] 何世成，林源，王昌建，等. 五种核酸提取法对猪繁殖与呼吸综合征病毒提取效率的比较[J].中国动物检疫，2014，31（8）：70-72.

[2] 郎洪武，陈晓春，吴华伟，等. 猪圆环病毒病及其生物制品学的研究进展[J]. 中国兽医科学，2012，42（5）：545-550.

[3] 韦显凯，蒋晓霞，苏姣秀，等. 2014年广西部分地区常见猪群疫病感染情况监测分析[J]. 中国畜牧兽医，2016，43（4）：1079-1085.

[4] 韦显凯，闭璟珊，蒋晓霞，等. 2016年广西部分地区猪群五种疫病感染情况监测 [J]. 中国动物检疫，2017，34（8）：20-22.