肿瘤异常糖蛋白在肺癌中的诊断价值

陈秋莉，王莲子，吴 宪，刘嘉清，李 涛，徐元宏，周 敏，徐胜前

目前，常用的肺癌血清肿瘤标志物有癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、可溶性细胞角蛋白19片段(cytokeratin frament19，CYFRA 211)、神经元特异性烯醇酶(neuron specific enolase，NSE)、糖类抗原125(cancer antigen 125，CA125)及鳞状细胞癌相关抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC)[1-2]。由于血清肿瘤标志物的敏感性低，不能作为肺癌早期诊断的有效工具。计算机断层扫描(computed tomography，CT)作为肺癌早期筛选的工具[3]，使用低剂量CT早期筛查可有效降低肺癌患者的死亡率，CT检查的敏感性高，但是对早期肺癌诊断的特异性低，易把肺良性肿块误诊为肺癌，所以寻找一种对早期肺癌诊断有效的检测指标显得尤为重要。该文通过分析肿瘤异常糖蛋白(tumor abnormal protein，TAP)、CEA、NSE、CYFRA 211单独及联合检测对肺癌诊断的敏感度和特异度，探讨TAP检测在肺癌诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1病例资料选取安徽医科大学第一附属医院2016年7月～2017年7月就诊患者共612例，其中包括未经治疗新诊断肺癌患者400例，肺部良性疾病患者212例。肺癌的确诊依据是肺组织病理学检出肿瘤细胞，肿瘤的组织学分型及病理学分期是根据WHO 2004 分级法[4]和UICC的TNM分类指南[5]。患者具体病例特征见表1。

表1 患者病例特征

1.2检测方法及仪器

1.2.1TAP检测 TAP检测试剂盒及TAP专用检测仪器由中国浙江瑞生医药技术有限公司生产。取患者外周抗凝全血25 μl，制成均匀的血涂片，室温干燥10 min，加入适量凝集试剂，1.5～2 h后形成凝集微粒，在肿瘤异常蛋白检测系统图像分析仪或生物显微镜、集成阅片仪下观察，有不规则类圆形类晶体颗粒，颗粒呈淡绿色，淡黄色或棕色，中心有屈光性，四周混合物较多而呈棕黑色或墨绿色，为阳性，无上述颗粒检出为阴性。凝集颗粒的面积计算方式为用鼠标在颗粒的四周圈出颗粒的大小，系统会自动算出凝集物颗粒面积。TAP凝集物面积参考值范围如下：面积<121 μm2为TAP正常/无明显凝集物，121 μm2≤凝集物面积<225 μm2为异常/凝集物较小，凝集物面积≥225 μm2为异常/凝集物较大。

1.2.2血清CEA、NSE、CYFRA211检测 取受试者清晨空腹静脉血4 ml，离心后提取血清。检测CEA，NSE，CYFRA 211的仪器购买自罗氏诊断产品(上海) 有限公司，仪器名称为cobase 601，采用电化学发光法检测，试剂来自罗氏相关配套试剂盒。检测步骤均严格参照试剂盒说明书进行。结果判定： CEA>5.0 ng/ml，NSE>17.0 ng/ml，CYFRA211>3.5 ng/ml为结果升高。

1.3统计学处理采用SPSS 22.0软件进行分析。计数资料及等级资料的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1TAP对肺癌检测的敏感度通过分析612例肺癌患者的TAP检测结果，显示TAP检测对肺癌患者高度敏感，差异有统计学意义(P<0.001)，检测的敏感度和特异度分别是83.25%、34.91%(使用121 μm2的cut-off值，表2和图1)。同时结果显示TAP检测对肺癌诊断的敏感度比血清CEA、NSE、CYFRA211对肺癌诊断的敏感度高,差异有统计学意义(χ2=49.552，P<0.001)，见图1。

表2 TAP结果与肺癌关系

2.2TAP检测结果与肺癌分期及组织学分型的相关性TAP检测结果与肺癌的分期无关(χ2=3.378，P=0.60)；TAP检测与肺癌的组织学分型有关(χ2=8.139，P=0.043)。见表3、4。

表3 TAP检测与肺癌分期

1为TAP结果阴性；2为TAP结果凝集物较小；3为TAP结果凝集物较大

图1 TAP、CEA、NSE、CYFRA211检测对肺癌诊断的敏感度、特异度及阳性预测值

组织学分型总数TAP检查结果阳性阴性χ2值P值腺癌11185268.1390.043鳞癌67616小细胞癌33303大细胞肺癌110总数21217735

2.3TAP、CEA、NSE、CYFRA211单独及联合检测对肺癌的诊断效价比较ROC(receiver operating characteristic)曲线分析显示，CEA、NSE、CYFRA211 3项指标联合检测的曲线下面积(area under the curve，AUC)及95%可信区间(95% confidence interval，95%CI)分别是0.804(0.763～0.846)，TAP单独检测AUC是0.668(0.611～0.725)，CEA、NSE、CYFRA211及TAP 4项联合检测ROC曲线的AUC是0.822(0.782～0.862)。因此，结果显示4项指标联合检测对肺癌的诊断效价优于CEA、NSE、CYFRA211 3项联合检测(图2)。

图2 CEA、NSE、CYFRA211、TAP 3项及4项联合检测对肺癌诊断的ROC曲线对比

2.4TAP、CT联合检测当在CT检测阳性(CT报告结果提示肺癌可能为结果阳性)的患者中进行了TAP检测时(n=198)，在这些患者中，确诊肺癌的患者是168例，其余30例是非肺癌患者，其检测的特异度是40.0%，敏感度是79.17%，TAP检测可以提高CT检查对肺癌诊断的敏感度，差异有统计学意义(χ2=46.967，P<0.001)。因此，TAP和CT联合检测可以提高早期肺癌的诊断效率。见图3。

图3 TAP、CT对肺癌诊断的敏感度、特异度及阳性预测值测值

3 讨论

TAP是癌细胞突变后产生的异常糖蛋白、钙组蛋白及其他一些正常物质的复合物，当肿瘤细胞发生一定程度的突变时，大量的突变物质释放到血液中，可以在外周血中检测得到[6]。TAP检测是一种特殊的识别技术，在促凝剂的帮助下，促进肿瘤异常蛋白的凝集，从而形成特殊的晶状结晶颗粒，而没有TAP物质存在的血液就不能形成凝集颗粒。TAP检测是多阶段的耦合凝集反应，首先，各种促凝剂先使各种异常糖链糖蛋白形成初级凝集颗粒，然后初级凝集颗粒通过钙组蛋白形成二级凝集颗粒，这就是在TAP检测中观察到的颗粒状凝集物。

本研究显示，在肺癌患者中，TAP检测阳性率高于良性肺部疾病组，其对肺癌诊断的敏感度是84.25%，特异度是34.91%，差异有统计学意义。TAP与肺癌分期无关，与肺癌的组织学分型有关，这与Liu et al[7]报道不一致，该文献研究表明，TAP检测结果与肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤组织学分型无关。原因可能是在本研究中肺癌的组织学分型的样本例数过少，如大细胞肺癌的样本只有一例，所以增大样本量以提高研究的准确性。结合血清肿瘤标志物CEA、NSE、CYFRA 211分析，结果显示4项指标联合检测的AUC是0.82(P<0.01)，显著高于个指标单独检测的诊断效能，所以临床上应该建立有效的多指标、多参数联合检测模型以提高对肺癌诊断的准确性。此项研究也表明TAP联合CT检查可以提高对肺癌诊断的阳性预测值，由于TAP测试只需要一滴血，而且它非常方便，所以当患者在CT检查后，可以选择进行TAP测试，以便更方便有效地诊断肺癌。

[1] Seemann M D, Beinert T, Furst H, et al. An evaluation of the tumour markers, carcinoembryonic antigen (CEA), cytokeratin marker (CYFRA211) and neuron-specific enolase (NSE) in the differentiation of malignant from benign solitary pulmonary lesions[J].Lung Cancer,1999,26(3):149-55.

[2] Edelman M J, Hodgson L, Rosenblatt P Y, et al. CYFRA211 as a prognostic and predictive marker in advanced nonsmall-cell lung cancer in a prospective trial: CALGB 150304[J]. J Thorac Oncol,2012,7(4):649-54.

[3] Isgrò M A,Bottoni P,Scatena R,et al. Neuron-specific enolase as a biomarker: biochemical and clinical aspects[J].Adv Exp Med Biol,2015,867:125-43.

[4] Travis W D, Brambilla E, Mueller-Hermelink H K,et al.Introduction to The 2015 World Health Organization Classification of Tumors of the Lung,Pleura,Thymus, and Heart[J].J Thorac Oncol,2015,10(9):1240-4.

[5] Sobin L H, Gospodarowicz M K, Wittekind C.et al.TNM classification of malignant tumours[M].7th. Chichester: John Wiley & Sons , 2009:136-47.

[6] Thakkar V, Patel P, Prajapati N,et al.Serum levels of glycoproteins are elevated in patients with ovarian cancer[J].Indian J ClinBiochem,2014,29(4):345-50.

[7] Liu Z,Cai J,Yu Y,et al. Tumor abnormal protein as a novel biomarker in papillary thyroid carcinoma[J].Clin Lab,2017,63(3):479-85.