不同处理条件对金银花工艺茶绿原酸含量的影响研究

◎ 康 立

（品测（上海）检测科技有限公司，上海 201108）

“金银花”一词最早的文献记录出现在我国《本草纲目》一书中，其别名有密二花、双苞花、金藤花、鹭鸶花和忍冬花，属于忍冬科忍冬属植物[1]。在我国，从气候寒冷的东北地区到炎热的华南地区，从最西部的青藏高原到最东部的山东半岛，都有人工种植和自然生长的金银花[2]。在东亚的日本、韩国、朝鲜、俄罗斯等国境内也有野生的金银花存在。金银花属多年生半常绿灌木，其叶片、果实、花蕾等组成部分作为中药材应用广泛，特别是花蕾的功效最为显著。《中华药典》记载，金银花具有抗菌抗病毒、消炎、清热解毒、保护肝脏、止血凉血、提高人体免疫力、抗动脉粥样硬化、中枢兴奋等作用，在医学上主要用于治疗风热感冒、细菌性感染、急性肠胃炎、高血脂症等40多种疾病[3]。金银花中的主要功效物质是绿原酸，其提取、纯化、工业化生产技术和具体的开发用途已引起了国内外学者的广泛关注。根据有关文献报道，绿原酸具有较广泛的抗菌作用、兴奋神经和清除人体内自由基的作用[4]。金银花中的有机酸、黄酮类物质、挥发油成分以及三萜类成分等也被证实具有良好的保健和医疗用途。金银花的茎中主要功效成分为皂甙、木樨草黄素和有机酸等物质，叶片中主要功效成分为挥发油、皂甙、黄酮等物质，果实中还含有还原糖等物质。从开发利用现状来看，金银花除用作传统中药的主要配方以外，还在食品工业、化妆品行业、饮料行业等方面被广泛的应用。目前，已有学者将金银花同茶叶、银杏叶、甘草、绿豆等原料混合共同研制新型保健饮料[5]。本文以金银花工艺茶加工中的杀青温度、杀青时间、干燥时间为影响因素，通过三因素三水平正交试验设计，研究不同处理条件对金银花工艺茶中绿原酸含量影响，以期找出不同处理条件下金银花工艺茶中绿原酸含量的变化规律。

1 材料与方法

1.1 主要材料

金银花：采自四川省南江县，收集三青、二白、大白、银花和金花5个采收时期的金银花样品，经过干燥后保存在真空干燥器中待用。

1.2 实验仪器

高效液相色谱仪（HPLC）、蒸汽杀青机、分筛机、造型机、物料粉碎机、干燥机和真空干燥器。

1.3 实验试剂

甲醇、乙醇（分析纯）、乙腈（色谱纯），绿原酸标准品。

1.4 实验方法

1.4.1 绿原酸的提取流程

金银花→粉碎→热回流浸提→抽滤→浓缩→沉淀离心→真空冷冻干燥→粉末状提取物。

1.4.2 高效液相色谱法测定绿原酸含量

（1）色谱柱条件。色谱柱：Kromasil C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：CH3CN-0.3% H3PO4水溶液（体积比例为10∶90）；流速：1.0 mL/min；检测波长：327 nm，灵敏度：1.0AUFS，进样量：20 μL[6]。

（2）对照品溶液的制备。精密称取绿原酸对照品12.8 mg于100 mL容量瓶中，50%甲醇溶解并定容，作为对照品溶液。用时适当稀释。

（3）供试液的制备。称取金银花粉末状提取物17 mg，精密称定，置于25 mL 容量瓶中，加20 mL 50%甲醇超声30 min，放冷后定容，摇匀。微孔滤膜过滤后，采用HPLC测定。

（4）标准曲线的绘制。精密量取绿原酸对照品溶液适量，分别置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释到刻度，制成不同浓度的溶液，并测定其峰面积。以绿原酸标准品浓度为横坐标，以与其相应峰面积为纵坐标绘制标准曲线。标准曲线回归方程为Y=24 963 900X-54 563，r=0.999 9。

（5）供试液中绿原酸含量测定。取不同处理条件下的绿原酸提取溶液，以上述高效液相色谱法测定其峰面积，代入回归方程，得出供试液中绿原酸的浓度，再换算成供试液中绿原酸的质量。

（6）金银花中绿原酸含量测定。金银花中绿原酸含量（%）=供试液中绿原酸的质量（mg）/原金银花的质量（mg）。

1.5 金银花工艺茶制作流程

金银花工艺茶制作流程如图1所示。

图1 金银花工艺茶制作流程图

（1）杀青。将金银花薄摊放于蒸汽杀青机的链板中，控制金银花通过蒸汽杀青热备的时间，取出后放至室温。

（2）造型。将杀青后的金银花充分混合均匀后，放入造型机中造型，期间每锅分别均匀喷洒蔗糖溶液100 mL和香精的溶液100 mL，时间约为15 min，取出后放至室温。

（3）干燥。在晴好天气选择晒干的方式，将其松散地薄摊在竹席上曝晒。

2 结果与分析

2.1 不同采收期金银花绿原酸含量测定

测定不同采收期金银花绿原酸含量，3次重复试验取平均值，结果见表1。由表1可知，采收期为大白的金银花中绿原酸含量最高，为2.16%。因此，金银花的最佳的采收期为大白时期。

表1 不同采收期金银花绿原酸含量表

2.2 金银花工艺茶正交试验

以采收期为大白的金银花70 g为基础，做杀青时间、杀青温度、干燥时间的三因子三水平正交实验，并测定不同处理条件下的金银花工艺茶绿原酸含量，测定试验重复3次，取平均值。正交试验配方参数见表2，结果见表3。

表2 正交试验因素水平表

表3 L9(34)正交实验结果与分析表

通过对金银花工艺茶正交试验结果进行等差分析可知，影响金银花工艺茶中绿原酸含量的3个因素的顺序依次为杀青温度＞干燥时间＞杀青时间。综合不同处理下金银花工艺茶中绿原酸含量的最终结果，可以得出获得较高的绿原酸含量的金银花工艺茶影响因素组合为A1B2C2，即杀青温度90 ℃、干燥时间6 h、杀青时间15 min。在此影响因素组合条件下，金银花工艺茶中绿原酸含量为1.83%。

3 结果与讨论

（1）通过测定不同采收期金银花绿原酸的含量，得出采收期为大白期的金银花中绿原酸含量最高，为2.16%。金银花的最佳的采收期应为大白时期。

（2）通过对金银花工艺茶正交试验结果进行等差分析可知，影响金银花工艺茶中绿原酸含量的3个因素的其顺序依次为杀青温度＞干燥时间＞杀青时间。

（3）根据金银花工艺茶正交试验的最终结果，可以得出获得较高的绿原酸含量的金银花工艺茶影响因素组合为A1B2C2，即杀青温度90 ℃、干燥时间6 h、杀青时间15 min。

（4）研究发现，金银花在加工形成金银花工艺茶的过程中，其绿原酸含量有明显的下降，至于过程导致绿原酸含量下降的机理，有待深层次进行研究。

[1]李 聃.金银花的研究进展[J].科技信息，2012（24）：77-78.

[2]葛菁华，曾令祥，朱国胜.贵州省金银花种植产业发展现状及存在的问题研究——以黔南州为例[J].安徽农业科学，2012（11）：6826-6828.

[3]郑雪峰，李振玉.中药金银花药用成分及药理作用分析[J].中西医结合心血管病电子杂志，2016（30）：55-56.

[4]胡 樱，程明川，杭太俊，等.绿原酸和双黄连粉针剂中的成分绿原酸在大鼠体内的药动学比较[J].中国新药与临床杂志，2009（4）：45-48.

[5]蒋燕山，李加兴，陈双平.金银花饮料生产工艺研究[J].食品与机械，2004（2）：25-26.

[6]左 霞，刘春霞，杨金霞，等.HPLC法测定不同来源不同采收期忍冬藤和金银花中绿原酸含量[J].中国药师，2015（4）：682-684.