大补阴丸中多指标成分研究

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一、研究意义

大补阴丸出自元代医学家朱震亨著述的《丹溪心法》，此书由明代程充校订，刊于1481年。原方载为黄柏（炒褐色）、知母（酒浸，炒，各四两）、熟地（酒蒸）、龟板（酥炙）各六两为末，猪脊髓和蜜丸，桐子大，每服七十丸、空心淡盐汤下。此方降阴火补肾水。目前收录于2015版《中国药典》一部，其中在含量检测项仅对黄柏的主要成分小檗碱进行测定，无法全面反映此方君药熟地黄和臣药盐知母等药味，现主要对大补阴丸进行全波长3D扫描，确定其主要成分[1]。本文采用了HPLC-DAD法确定了大补阴丸中的主要成分。

二、仪器与材料

Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）、DAD检测器、Alltech6000型蒸发光散射检测器、CBL-Model9960D型超声振荡仪、Sartorius BSA224S型电子天平。甲醇和乙腈（色谱纯，安徽时联特种溶剂股份有限公司），磷酸二氢钾（分析纯，天津博迪化工股份有限公司），水为纯化水。其余试剂均为分析纯，芒果苷对照品（111607，中国食品药品检定研究院），毛蕊花糖苷对照品（111530，中国食品药品检定研究院），密力特苷（19467-03-9）、新芒果苷（64809-67-2）和地黄苷 D（81720-08-3）均来自成都格利普生物科技有限公司，大补阴丸厂家为杭州胡庆余堂药业有限公司。

三、研究方法与结果

1.大补阴丸HPLC-DAD含量测定

色谱条件：色谱柱：AccurasilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30∶70）；流速为1.0ml/min；检测波长为270nm；柱温为35℃；进样量为10μl。

对照品溶液的制备：取芒果苷和毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液制成每1ml含芒果苷50μg和毛蕊花糖苷10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品水蜜丸，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液25ml，密塞，称定质量，超声处理（功率140W，频率42kHz）1小时，放冷，再称定质量，用上述混合溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[2]。

按照以上方法对大补阴丸进行含量测定。（见图1）

2.大补阴丸色谱条件的建立

对大补阴丸按照上述条件、方法进行HPLC-DAD全波长三维扫描。（见图2）

图1 大补阴丸含量色谱图

图2 大补阴丸全波长三维扫描

通过全波长扫描可以看出，在270nm处，色谱峰数目较多，且通过芒果苷（盐知母）和毛蕊花糖苷（熟地黄）全波长三维扫描（见图3），可以看出在270nm处，两者均有吸收。同时对熟地黄中所含化学成分进行进一步三维扫描，并确定了熟地黄中密力特苷的三维扫描色谱图（见图4），并证明了密力特苷对主方法没有干扰，确定了此方法的合理性和优越性[3]。

图3 芒果苷和毛蕊花糖苷全波长三维扫描

图4 密力特苷三维扫描色谱图

四、讨论

本文首先对2015版《中国药典》检测方法进行优化，确定了最佳流动相比例和吸收波长（270nm），使各种成分得到了很好的分离效果。同时对大补阴丸进行全波长扫描，得到了主要成分芒果苷和毛蕊花糖苷三维立体色谱图，证明了在270nm处二者均有吸收，此检测方法能全面地反映大补阴丸的主要含量指标，并且通过进一步对君药熟地黄和盐知母中其他主要化学成分进行三维扫描，验证了在270nm处密力特苷、地黄苷D和新芒果苷对主方法没有干扰。因此本方法为大补阴丸的质量控制提供了有效依据，可进一步提高大补阴丸的质量标准。※

[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2015.

[2]蔡铃英，陈子春.高效液相色谱法测定大补阴丸中盐酸小檗碱的含量[J].中国民族民间医药，2010（14）：39.

[3]孙忠义.大补阴丸在临床中的应用[J].内蒙古中医药，1996（S1）：74.