凝血酶敏感蛋白-1以及血管内皮生长因子检测在肺癌患者中的应用价值分析

薛鸿涛 任 敏 李 艳

近年来，由于空气污染和生活方式的改变，肺癌的发病率和病死率呈逐年升高的趋势[1]。因此，对肺癌进行预测和监测尤其重要，而传统的肿瘤、淋巴结及远处转移(tumor node metastasis，TNM)分期方法并不能完全准确的监测肺癌进展过程，故寻找判断肺癌发生、发展的生物学指标是临床研究重点[2]。

肺癌是一种富含丰富血管的肿瘤，其进展与新生血管形成密切相关，而新生血管的形成有赖于血管形成促进因子和抑制因子的平衡来实现，可以在一定程度上反映肿瘤细胞的生长及转移[3]。为此，本研究针对肺癌患者具有代表性的血管形成促进因子血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和抑制因子凝血酶敏感蛋白-1(thrombin sensitive protein-1，TSP-1)的水平进行检测，探讨血小板中血管形成调节因子在肺癌发展中的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年6月至2016年9月汉中市中医医院收治的90例肺癌患者，按照病理诊断结果将其分为肺癌转移组(47例)和肺癌未转移组(43例)；同期另选40名健康体检者纳入健康对照组。肺癌转移组中男性27例，女性20例；平均年龄(59.15±16.56)岁；身体质量指数(body mass index，BMI)为24.75±5.12。肺癌未转移组中男性25例，女性18例；平均年龄(60.35±17.78)岁；平均BMI为25.22±5.23。健康对照组中男性24名，女性16名；平均年龄(58.65±16.16)岁；平均BMI为26.10±5.89。3组一般资料方面比较差异无统计学意义，具有可比性。该研究经医院伦理道德委员会批准，且入组者及其家属知悉研究内容并签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

(1)纳入标准：①病理学诊断符合肺癌标准[4]；②年龄为45～75岁。

(2)排除标准：①伴有高血压、糖尿病等血管病变者；②近3个月感染炎性疾病者。

1.3 仪器与试剂

(1)仪器。Sysmex KX 2100型血球分析仪(日本Sysmex公司)；Anthos 2010酶标仪(郑州安图生物工程有限公司)；枸橼酸盐、茶碱、腺苷和潘生丁(ci trate，theophylline，adenosine，and dipyridamole，CTAD)抗凝管(上海科华公司)。

(2)试剂。RIPA裂解液(上海碧云天生物有限公司)；CUSABIO ELISA试剂盒(美国Cusabio Biotech公司)；CATD稀释液(上海科华公司)。

1.4 检测方法

(1)血液样本分离提取。所有研究对象均使用CTAD抗凝管采集其空腹静脉血3 ml，使用Thermo scientific离心机在24 ℃恒温、3000 r/min条件下离心10 min，将富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)置于微量离心(eppendorf，EP)管中，并进行离心，取上层黄色液体得贫血小板血浆(platelet poor plasma，PPP)置于新EP管中，再次离心，取上层血浆，分装保存于-80 ℃冰箱待测。将富血小板的下层血小板沉淀后使用CTAD缓冲液冲洗2次后，加入一定量的CTAD缓冲液，通过Sysmex KX 2100血球分析仪进行浓度监测，调整血小板计数为2×108/ml，分装保存于-80 ℃冰箱待测。

(2)样本检测。从低温冰箱取出血小板悬液和贫血小板血浆，待充分裂解后，在室温下离心，吸取上清液100 μl与标准品分别进行反应，用酶标仪在450 nm波长下测定各孔的光密度值，并制作标准曲线，通过光密度值和标准曲线计算各个样本浓度，最终转换成每106个血小板表示。

1.5 统计学方法

使用SPSS 20.0软件进行统计分析。计量资料采用均数±标准差(x-±s)表示，3组间两两比较采用LSD-t检验，血小板中TSP-1、VEGF与肺癌的相关性采用Spearman分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组贫血小板血浆TSP-1及VEGF水平

3组贫血小板血浆TSP-1及VEGF水平均低于试剂盒检测限，采用CTAD抗凝血过程中血小板并未发生活化。

2.2 三组血小板TSP-1及VEGF水平比较

肺癌转移组与肺癌未转移组血小板TSP-1水平均明显低于健康对照组，VEGF水平明显高于健康对照组，其差异有统计学意义(t=-11.307、t=-6.295、t=12.851、t=9.732；P＜0.05)；肺癌转移组血小板TSP-1水平明显低于肺癌未转移组，其差异有统计学意义(t=-5.777，P＜0.05)；VEGF水平明显高于肺癌未转移组，其差异有统计学意义(t=4.624，P＜0.05)，见表1。

表1 三组血小板TSP-1和VEGF水平比较(±s)

表1 三组血小板TSP-1和VEGF水平比较(±s)

注：表中TSP-1为凝血酶敏感蛋白-1，VEGF为血管内皮生长因子。

组别 例数 TSP-1(ng/106PLT) t值 P值 VEGF(pg/106PLT) t值 P值肺癌转移组 47 8.89±2.36ab -11.307 ＜0.05 22.01±6.78ab 12.851 ＜0.05肺癌未转移组 43 12.45±3.43a -6.295 ＜0.05 16.12±5.10a 9.732 ＜0.05健康对照组 40 18.56±5.28 - - 7.64±2.16 - -t值 -5.777 4.624 P值 ＜0.05 ＜0.05

2.3 三组血小板TSP-1和VEGF水平与肺癌的相关性

采用Spearman分析方法对血小板TSP-1和VEGF水平与肺癌的相关性进行分析，结果显示，血小板TSP-1与肺癌呈负相关性(r=-0.697，P＜0.05)，血小板VEGF与肺癌呈正相关性(r=0.757，P＜0.05)。即随着肺癌的发生和转移，血小板TSP-1水平呈下降趋势，血小板VEGF水平呈上升趋势。

3 讨论

肿瘤的进展有赖于肿瘤新生血管的形成，组织原有的血管是形成肿瘤新生血管的基础，而肺部是实现机体与外界环境之间气体交换的主要器官，其丰富的血管为肺部新生血管生长提供了有利条件[5]。血管内皮细胞通过旁分泌作用血管生长促进因子，加快新血管的生成，使其不断为肿瘤细胞提供营养物质，促进肿瘤细胞的生长，反之，肿瘤细胞同样可以分泌血管生长促进因子，加快肿瘤细胞的生长[6]。可见，血管生长促进因子在肿瘤生长过程中占有重要地位。

血小板中的α颗粒中存在多种血管形成调节蛋白VEGF及TSP-1等，有研究显示，血小板中的VEGF水平远高于血浆，因此本研究对血小板中血管形成调节因子浓度变化进行了检测，使用CTAD抗凝管收集样本，3组贫血小板血浆TSP-1及VEGF水平均低于试剂盒检测限，表明血小板处理过程中并未发生活化，确保了准确性[7-8]。VEGF是最有效的促血管生长因子，TSP-1是具有代表性的血管形成抑制因子，正常人体内二者维持平衡，但在癌症患者体内存在明显失衡[9]。本研究结果显示，肺癌患者体内血小板VEGF水平明显高于健康对照组，TSP-1水平明显低于健康对照组，表明VEGF和TSP-1可反映肺癌的发生。胡金华等[10]研究证实，食管癌患者中也含有升高的VEGF，与本研究结果类似，提示VEGF和TSP-1对肺癌患者的诊断具有一定意义。

本研究结果显示，肺癌转移患者体内VEGF水平明显高于未转移患者，为进一步研究VEGF水平在肺癌患者中的确切作用，对其相关性进行了研究，其结果显示，血小板VEGF水平与肺癌存在正相关性，即随着肺癌的发生与转移，VEGF呈上升趋势，表明VEGF可作为肺癌进展的有效监测指标。随着肿瘤的发生与转移，肿瘤细胞不断合成与分泌VEGF，从而VEGF水平升高[11-12]。此外，当血液中的血管生成调节蛋白增多时，血小板具有选择性的吸收血液中VEGF的作用，通过吞噬作用聚集这些蛋白，使得血小板中的VEGF浓度增高。血小板不仅存在大量血管生长促进因子，其中也含有较多的抑制因子[13]。本研究中肺癌转移患者TSP-1水平明显低于未转移患者，TSP-1水平与肺癌存在负相关性，即随着肺癌的发生与转移血小板TSP-1水平呈下降趋势，表明TSP-1水平不仅可做为诊断指标，对肺癌的转移也具有检测意义。但对于血小板TSP-1的水平变化一直备受争议，马新福等[14]发现，结直肠癌患者体内TSP-1水平表达降低；赖闺娥等[15]研究显示，乳腺癌患者体内TSP-1水平呈高表达，由此可见，外周血中TSP-1水平的变化与癌症组织的关系仍需进一步研究。

本研究采用CTAD抗凝血避免了血小板活化，肺癌患者血小板VEGF和TSP-1水平较高，反映了肺癌的发生和转移，可作为肺癌进展的有效检测指标。

[1]Stinchcombe TE，Socinski MA，Gangarosa LM，et al.Lung cancer presenting with a solitary colon metastasis detected on positron emission tomography scan[J].J Clin Oncol，2016，24(30)：4939-4940.

[2]王丹平，束军，沈继龙，等.PEDF与VEGF检测在非小细胞肺癌诊断中的应用探讨[J].医学与哲学，2015，36(18)：70-72.

[3]郭秋均，李丛煌，花宝金.解毒活血药调控肿瘤新生血管形成机制的研究进展[J].中华中医药杂志，2016，31(7)：2699-2702.

[4]张剑，董欣敏，吴婧，等.血清人附睾蛋白4在肺癌诊断中的临床应用探讨[J].中华全科医学，2016，14(8)：1302-1304.

[5]宋之光，李邦国，余洪，等.周围型肺癌双源CT灌注成像与肿瘤血管生成的相关性研究[J].临床放射学杂志，2016，35(2)：192-196.

[6]付建珠，刘贵敏，成志勇，等.JAK2信号通路与肿瘤血管新生[J].现代肿瘤医学，2016，24(09)：1497-1501.

[7]王堃，何娜萍，吴琼，等.血管内皮生长因子在肺癌中的临床应用价值[J].检验医学，2016，31(9)：765-769.

[8]石红，陈盈.血小板源性生长因子及血管内皮生长因子与食管鳞状细胞癌肿瘤血管生成的关系研究[J].检验医学与临床，2016，13(13)：1864-1866.

[9]廖楚舒，范莎莎，邓中华，等.血清TSP-1、VEGF水平与原发性肝癌的关系[J].检验医学，2017，32(2)：104-107.

[10]胡金华，张耀晴，朱斌.食管癌患者血清VEGF、TNF-α和IL-6表达与预后的相关性[J].现代肿瘤医学，2017，25(1)：63-66.

[11]唐晓梅，刘坦坦，张红娟，等.联合检测E-cadherin，VEGF表达水平在卵巢良恶性肿瘤诊断中的临床价值[J].现代生物医学进展，2017，17(20)：3897-3900.

[12]徐炎良，陈春香.化疗对晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变状态的影响[J].实用癌症杂志，2017，32(3)：386-388.

[13]任卫华，仝甲钊.血管内皮生长因子及其受体系统与肿瘤生长相关性的研究进展[J].肿瘤学杂志，2015，21(7)：611-614.

[14]马新福，刘梅，戈锐，等.结直肠癌中血小板反应蛋白-1和生存素的表达及临床意义[J].中国老年学杂志，2017，37(19)：4817-4819.

[15]赖闺娥，江柏青.乳腺癌患者血浆中TSP-1表达及意义[J].中国妇幼保健，2014，29(30)：4988-4991.