猪瘟和猪圆环病毒2型混合感染流行病学调查

郑艺杰 王艺娟

（1，福建省龙海市动物疫病预防控制中心 363100；2，福建省漳州市动物疫病预防控制中心 363000）

猪瘟 （CSF）是由猪瘟病毒 （CSFV)引起的猪高度接触性传染病，是严重危害生猪生产的重要疫病，其分布广、危害大，给养猪业造成巨大的经济损失[1]。2017年国家调整完善重大动物疫病防控支持政策，对猪瘟暂不实施国家强制免疫政策，但在福建省仍将猪瘟列为全面免疫病种之一。当前猪瘟病以温和型、非典型猪瘟为主，而急性猪瘟较少，其发病特点为感染时间和潜伏期长、不受季节影响、免疫无效等特点[2]。

猪圆环病同样也是危害我国养猪业的一种重要疫病，其中PCV2与多种新的猪传染病的发生密切相关，包括断奶仔猪多系统衰竭综合征 （PMWS）、猪呼吸道病复合征 （PRDC）及猪增生性和坏死性肺炎 （PNP）等[3，4]，其中以PMWS的影响最为严重。PCV2可引起猪的多系统功能障碍性疾病，侵害机体的免疫系统，造成猪的免疫抑制[5,6]，影响猪免疫功能，使猪群对其他病原体的抵抗能力下降[7]，以猪副嗜血杆菌的继发性感染最为常见。2000年郎洪武等首次在国内猪群中检测到PCV2的感染，PCV2的感染和流行，给我国规模化猪场造成相当大的经济损失[8,9]。

猪瘟病毒 （CSFV）和猪圆环病毒2型 （PCV2）严重影响猪群健康，是危害猪场生产的两种主要病毒。为了更好地预防和控制猪瘟、猪圆环病等相关疫病，需要对龙海市猪群中猪瘟病毒与猪圆环病毒2型单一感染、混合感染情况有较为清楚的认识，以便制定更有针对性的防治措施来提高猪场的生产效率。

1 材料与方法

1.1 检测样本

2016年3月～2017年6月，从龙海市部分猪场35头病死猪中无菌采集扁桃体、肺脏、脾脏等组织，于-20℃冻存送检。

1.2 主要试剂

病毒RNA提取试剂盒、promega反转录试剂盒、病毒DNA提取试剂盒、DNA Marker1和2x Taq PCR MasterMix均购于天根生化科技有限公司。

1.3 主要仪器

TGL-16MC冷冻离心机；BIO-RAD凝胶成像系统；ABI 7500 PCR仪；DYY-6C型电泳仪。

1.4 引物设计与合成

根据GenBank登录的猪瘟病毒基因和猪圆环2型基因序列，利用primer5.0设计2对引物。引物序列如下∶HCV-F：5'-CCACCTCGAGATGCTATGTGGA-3'， HCV-R： 5'-CCATGTGCCATGTACAGCAGAG-3'， 目标片段： 167bp； PCV-F：5’ -TGGGTVTTVACAATTAACAATC-3'， PCV-R： 5'-CAGCCACCCGTAAAAGTCGT-3'，目标片段：236bp。以上引物分别由上海英骏生物技术有限公司合成。

1.5 病毒核酸的提取及PCR反应体系

病毒DNA、RNA提取，反转录及PCR反应体系依次按实验操作步骤完成。

2 结果与分析

2.1 DNA与RNA提取效果检测

用1%的琼脂糖凝胶电泳对病毒DNA和RNA进行检测，结果见图1～2。提取的DNA条带明亮、清晰，可以进行下一步实验。

2.2 PCR扩增结果

PCR结果可见，PCR扩增产物具有良好的特异性，片段长度大小与预期的一致，没有非特异性杂带，说明这2对引物可以运用于病源检测。CSFV扩增结果如图3，PCV扩增结果如图4。

图1 病毒基因组DNA电泳检测结果

图2 病毒基因组RNA电泳结果

图3 猪瘟PCR扩增结果

图4 猪圆环病毒2型PCR扩增结果

2.3 35份病料检测结果

送检样品中对PCV2、CSFV的检测结果为：RT-PCR和PCR的产物电泳结果显示检测样品可扩增出PCV2、CSFV的特异性片段分别为236bp、167bp。分别检测35份样品中有22份样可扩增出236bp特异性片段，有19份样品可扩增出167bp，说明检测猪圆环病毒2型 （PCV2）35份样品中检出阳性22份，阳性率为62.85%；猪瘟病毒 （CSFV）阳性19份，阳性率为54.28%，猪瘟病毒 （CSFV）、猪圆环病毒2型（PCV2）都呈阳性者13份，混合感染率为37.14%，参见表1～2。

表1 CSFV和PCV2两种病毒检测结果

表2 CSFV和PCV2两种病毒总感染

3 讨论

从送检结果可以看出： (1)送检病猪中猪瘟阳性率偏高，很多病猪受到猪瘟病毒的影响； （2）猪圆环2型带毒率达到62.85%，这与曾中华于2004～2006年在漳州市猪圆环病毒流行病学调查中提到的，龙海市送检组织样品中PCV2阳性率56.92%，猪场PCV2阳性率52.17%相比较[10]，组织样品阳性率增加5.93%，已严重危害猪群健康； （3）两种病毒混和感染较为严重。

4 综合防治措施

猪瘟病毒 （CSFV）及猪圆环病毒2型 （PCV2）都会严重危害猪群健康，降低饲料报酬率，给养猪场造成很大经济损失，所以应采取必要措施对这两种病毒进行防治，最终达到消灭传染源，切断传播途径，减少易感动物，从而提高猪场生产效率。

（1）制定科学免疫程序，提高猪群抗病能力。疫苗接种是控制猪瘟和猪圆环病的有效方法，定期进行抗体及病原的监测，准确了解猪群的健康状态，及时发现问题并采取防范措施。

（2）加强猪群饲养管理，减少应激因素刺激。严格引种检疫，严禁引入隐性感染的猪群，清除带毒母猪和种公猪，实行全进全出制度；强化环境消毒灭源工作，及时对尸体、死胎、流产物和其他污染物、排泄物销毁做无害化处理，减少环境载毒量，创造猪只适宜的生存环境。

（3）采取合理药物预防，控制猪群继发感染。猪圆环病是一种免疫抑制性疾病，在平时饲养管理中应注重提高猪群免疫抵抗力，增加维生素、氨基酸、矿物质的水平，注射或添加抗病毒的干扰素，黄芪多糖等，控制猪蓝耳病病毒、猪链球菌、猪副嗜血杆菌、猪肺炎支原体等病原的继发感染，最大限度地降低猪群的死亡率，减少经济损失。

[1]袁东波,汤德元,曾智勇,等．猪瘟病毒的分子结构及其新型疫苗研究［J］.世界农业,2008(1)：59-62.

[2]夏迎春.我国猪瘟的流行现状与防控措施建议[J].当代畜禽养殖业,2017(2):51.

[3]刘建波,张辉,刘长明.猪圆环病毒的流行趋势与防控对策[J].动物医学进展2014,35(1):111-115.

[4]葛猛,杨阳,蒋重合,等.猪圆环病毒2抗体水平的监测及意义[J].湖南畜牧兽医,2009(3):8-10.

[5]万青山.四川部分地区猪圆环病毒2型流行病学调查研究[D].四川农业大学,2013.

[6]戴爱玲,刘建奎,李鸿文,等.闽西地区猪圆环病毒2性血清学调查及遗传变异分析[J].中国兽医学报,2016,36(6):896-901.

[7]卢寄军,王祝荣,张进.湖南省猪圆环病毒2型流行病学调查[J].中国动物检疫,2012,29(2):42-43.

[8]赵津.我国东南地区猪圆环病毒流行病学调查及PCV2、PEDV、TGEV和GAR复合PCR方法的建立与应用[D].南京农业大学,2013.

[9]石坤.上海地区PCV2分子流行病学及PCV2感染猪肺泡巨噬细胞的磷酸化蛋白组学研究[D].中国农业科学院,2016.

[10]曾中华.漳州市猪圆环病毒病流行病学调查与净化技术研究[D].扬州大学,2006.