芜湖产地金银花的质量分析

张晓冲，戴胜，曹井相

(1.安徽中医药高等专科学校药学系，安徽 芜湖 241000；2.芜湖张恒春医药有限公司销售部，安徽 芜湖 241006)

药用金银花又名双花、忍冬花，为忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或带初开的花。种植及应用历史悠久，是传统、常用中药材。具有清热解毒、宣散风热等功效[1]。我国是金银花的重要产地之一，多地都可种植，其中山东、河北、河南是较出名的三大产地。近年来金银花的需求量不断攀升，而安徽省芜湖市的气候也非常适合种植金银花，因此选用芜湖产的金银花进行了含量测定。现有文献对安徽芜湖产地金银花质量研究分析较少，为了客观评价、充分利用安徽芜湖产地药材资源，并有效控制药材质量，根据2015版《中国药典》第一部[2]，运用HPLC法测定了金银花中有效成分绿原酸含量，对安徽芜湖产金银花药材质量进行了初步研究，为芜湖产金银花质量控制提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

Agilent Technologies 1260 (美国安捷伦公司，二元泵，自动进样器，DAD紫外检测器)；色谱柱(Agllent HC-C18,5 μm,4.6×250 mm)；XL-130多功能粉碎机(永康市小宝电器有限公司，31000 r/min，650 W) ；FA1204N型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)；KH3200B型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；Sigma 2-16KL高速离心机(德国Sigma公司)；AP-01P真空泵(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；基因型 1850A摩尔纯水机(重庆摩尔水处理设备有限公司)。

绿原酸(质量分数99.39%，批号 17030620)，对照品由北京标准物质网和北京北纳创联生物技术研究院联合研制。甲醇(色谱纯，美国TEDIA,16085016);乙腈(色谱纯，美国TEDIA, 16085016)；磷酸(色谱纯，上海展云化工有限公司，批号160815)；超纯水(实验室制备)。金银花采集自安徽芜湖丫山、芜湖安徽中医药高等专科学校药园、芜湖安徽中医药高等专科学校草场，购买的为山东平邑产金银花，共8个批次。经安徽中医药高等专科学校李林华讲师鉴定，为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱为Agllent HC-C18,5μm,4.6×250mm，柱温30℃[3]，波长为327nm[4]，流速为1mL/min，进样量20μL，以乙腈(A)-0.4%磷酸(B)为流动相洗脱[5]。理论塔板数不低于3000。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 标准品溶液的制备。取绿原酸标准品5.7mg，至于5mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成1.14mg/mL的对照品溶液。

1.2.2.2 供试品溶液的制备。取干燥、粉碎过的金银花粉末(过60目筛)约0.5 g，精密称定，放入碘量瓶中，精密加入50%甲醇25 mL称定质量，超声处理30 min[6]，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足损失，离心10 min，12000 r/min，取上清液滤过，取续滤液过0.22 μm一次性过滤器，滤液即为供试品溶液。采集及购买的金银花来源详见表1。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察

将对照品溶液稀释2、4、8、16、32、64倍，摇匀，按照上述色谱条件进样，并记录色谱峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并线性回归。回归方程及线性范围见图1。Y=33784x+122,R2=0.9995,R=0.9997。线性范围8.9～570 μg。结果表明，对照品线性关系良好。

2.2 精密度考察

精密吸取对照品溶液，按照2.1项下色谱条件下重复进样6次，进样20μL，以对照品峰面积进行计算，RSD为0.11 %[7]。结果表明，对照品精密度良好。

2.3 稳定性实验

取待测金银花LJT1号为供试品溶液，按照上述2.1项下的色谱条件，分别在2、4、6、8、12、24h进样[8]，测定绿原酸的峰面积RSD为1.38 %，表明样品液在24h内稳定。结果表明，对照品稳定性良好。

2.4 重复性实验

取待测金银花LJT1号粉末约0.1g，平行称定3份，按照上述2.2.2项下方法操作，制备供试品溶液6份，每份精密吸取20μL，按照2.1项下色谱条件测定有效成分绿原酸的质量分数的RSD为1.92%。结果表明，对照品重复性良好。

2.5 加样回收率

取金银花LJT1号粉末6份，每份约0.5g，精密称定，每份加入相同量的绿原酸对照品，按照2.1项下条件测定，平均回收率为103.15%，RSD为1.97%[9]。结果表明，对照品回收率良好。

2.6 样品测定

取不同批号的金银花药材约1.0g，精密称定，按2.2.2项下方法[10]、条件操作，制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，并计算绿原酸的质量分数[11]，结果见图2和表2。绿原酸标准品HPLC图见图3。

表1 金银花的来源

表2 金银花药材中有效成分的测定结果

图1 绿原酸标准品标准曲线

图2 金银花混合样品在波长327nm下HPLC图

图3 绿原酸标准品在波长327nm下HPLC图

3 结论与讨论

3.1 提取溶剂的选择：参照2015版《中国药典》金银花含量测定项下的样品处理方法，对比了水、纯甲醇、50%甲醇作为溶剂，经过筛选，表明以50%甲醇为溶剂效果最好。参考文献后，采用了超声提取法进行提取。

3.2 本实验对流动相进行了筛选：通过对纯甲醇，甲醇-水和乙腈-水的筛选，发现乙腈-水的洗脱效果更理想，为抑制峰的拖尾，加入冰醋酸和磷酸进行筛选，结果表明,以乙腈(A)-0.4%磷酸(B)为流动相峰型较好。

3.3 本次实验测定了购买的金银花(山东平邑产)中金银花中绿原酸的含量，和在芜湖丫山和安徽中医药高等专科学校药园采摘的金银花2个产地不同批次的金银花中绿原酸的含量，其中丫山产(野生)金银花中绿原酸含量均高于药典规定含量(1.5%)，平均含量为2.1%；安徽中医药高等专科学校药园及药园外采摘的金银花有效成分含量较低，与该药材为人工栽培的改良后的金银花品种有关。

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