高效液相色谱法测定酒类中总糖含量

□ 吴国辉 王柳玲 邓伟恒 广州检验检测认证集团有限公司

糖主要包括单糖（葡萄糖、果糖等）、双糖（蔗糖、乳糖等）和多糖（淀粉、纤维素等），不同类型的酒含有不同的糖，葡萄酒、果酒主要含果糖、葡萄糖；黄酒主要含葡萄糖；而大部分的配制酒添加了白砂糖，即主要含蔗糖，所以酒的总糖主要为果糖、葡萄糖、蔗糖三者的加和。糖在酒中发挥着重要作用，如改善口感，但糖会带来一定的健康问题，如肥胖、糖尿病、高血压等。总糖是食品的重要成分之一，总糖含量也是食品行业中评价产品质量、营养、风味的指标之一[1]，因此为了保证和控制酒的质量，建立简单、可靠且快速的糖类物质成分分析及含量测定方法具有重要意义。

目前，国内对酒的总糖检测方法主要是滴定法——直接滴定法[2]适用于果酒、葡萄酒、露酒；亚铁氰化钾滴定法[3]适用于干、半干黄酒；廉爱农法[3]适用于甜、半甜黄酒。以上方法都有一个共通点，就是对样品中总糖含量、实验过程中的加热温度、滴定操作、滴定速度以及实验人员技术等要求严格[4]。滴定法操作步骤多、费时长，影响因素也多，特别是含糖量较多的色酒、配料杂的酒，此类产品终点难判定，容易导致测量结果产生误差，而通过加入活性炭对有颜色的酒吸附脱色再测定，可以使样品变为无色，从而使滴定终点容易判定。但有结果表明，不论在何种条件下，随着活性炭添加量的增加,吸附色素效果增强的同时吸附的糖也随之增加，吸附时间越长，活性炭吸附的糖越多，致使测得结果偏低[5]。此外，不同类型的酒采用不同的滴定法，也会导致每天处理的样品量少，效率低。高效液相色谱法具有普及率高、操作简便、快速、分离效果好等优点，是目前检测糖类物质的主要手段。本文将通过优化液相色谱分离的条件检测酒类中的几种糖，结合酒类中糖的主要成分，建立高效液相色谱法测定酒类中总糖的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters e2695高效液相色谱仪，配备Waters 2414示差检测器；果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖标准品，来源于Dr.Ehrenstorfer GmbH；超纯水（18.2MΩ），实验室自制；乙腈（色谱纯）；酒样购自本地超市。

1.2 标准溶液配制[6]

混合标准储备液：分别称取果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖标准品各0.25g（精确至0.1mg）于50mL烧杯中，用超纯水溶解，转移并定容至25mL容量瓶中，保存在4℃冰箱中。

混合标准工作液：分别取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL混合标准储备液于10mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。

1.3 样品前处理

酒类样品基质相对简单，不含蛋白质、脂类等复杂物质，可直接过0.45 µ m微孔滤膜至进样瓶，供高效液相色谱分析。

1.4 液相色谱条件

色谱柱：Athena NH2，120A，4.6×150mm，3 µm。

流动相：乙腈+水=75+25（V/V）。

流速：1.0mL/min。

进样量：10 µL；柱温：30℃；采集时间：15min。

检测器温度：35℃。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

2.1.1 流动相的选择

在70%～80%范围内考察不同比例的（乙腈+水）流动相，实验结果发现，增加乙腈的比例时，峰形有效改善，有利于各组份的分离，但分析时间会延长；当增加水的比例时，分析时间变短，但分离度变小，且水的比例过大时，不利于流动相在漂移管内的汽化，使基线噪声增大，从而使灵敏度降低。综合考虑分离效果、分析时间等因素，选择乙腈+水为75+25（V/V）的体系作为流动相。使用优化后的液相色谱条件分离5种糖的色谱图，如图1所示，5种糖分离良好，峰形对称。同一条件分析某一酒样的色谱图，如图2所示，糖分离度良好，峰形对称。

图2 酒样品色谱图

2.1.2 色谱柱温度的优化

实验考察了色谱柱温度（20～40℃）对样品中糖的检测的影响，如图3所示。随着色谱柱温度的升高，色谱峰保留时间提前，分析时间缩短，但是随着柱温的升高，色谱峰的峰形会变得不规则；而色谱柱温过低，保留时间相近的目标峰分离效果不佳。综合考虑分析时间与分离度，本实验选择色谱柱温度为30℃，目标峰保留时间适宜且分离度佳。

图3 不同色谱柱温度对糖的色谱峰影响（出峰时间顺序与图2一致）

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系考察

参照1.2节方法配制糖混合标准工作溶液，分别以各分析物的峰面积（y）和对应的质量浓度（x，mg/m L）作标准曲线，得到线性方程和相关系数，见表1，各组分呈线性关系，相关系数均大于0.99 9。

表1 5种糖的线性方程和相关系数

2.2.2 加标回收率和精密度试验

为验证方法的准确度，把某一样品和混合标准储备液按一定比例进行了3个梯度的加标回收实验（n=6），实验结果见表2。5种糖的平均回收率为90.1%～102%，相对标准偏差（RSD，n=6）在0.8%～1.5%之间，方法显示了良好的准确性和重现性。

表2 某一酒样中5种糖的加标回收率和精密度

2.3 具体样品分析

采用本方法检测15个具有代表性酒样品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的含量，从而计算出总糖含量，将本方法与现行的国家标准方法进行比较。结果如表3所示，两种方法的测定结果较为一致。结果表明，本方法简单、准确、快速，可用于酒类中总糖含量的测定。

表3 本法测定酒类中5种糖含量与国家标准方法检测结果的比较（单位：g/L）

3 结论

本研究通过优化液相色谱分离的条件，样品经过简单的过滤膜处理直接上机，示差检测器检测，外标法定量测定酒类的糖，从而计算出总糖含量，建立了高效液相色谱法测定酒类的总糖。该方法操作简单、快速，定量准确，重现性好，适用于酒类中总糖的测定。

[1] 黎涛.总糖测定中取样量的确定[J].热带作物机械化,1998(02):19-21.

[2] GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法[S].

[3] GB/T 13662-2008 黄酒[S].

[4] 吴东林，张建宁，于飞，闫飞.对国标GB/T 15038-2006中总糖还原糖测定方法的改进[J].科技风，2009(07):29.

[5] 江龙发.干红葡萄酒中总糖快速测定技术研究[D].南昌大学，2015.

[6] GB 5009.8-2016食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定[S].