桑姜感冒系列制剂浸膏制备工艺优化研究

谭瑾，沈咏梅，刘锦，雍妍，刘彬，胡野，张鑫

桑姜系列产品配方源于中医药传统理论组方，以桑菊饮为基础方加减而成。由桑叶、干姜、菊花、连翘、苏叶、苦杏仁六味中药材组成，全方温清并用，不寒不热，性味平和，为平散表邪、协调寒热之剂，是一种兼治风寒风热两种不同感冒的配方[1]。桑姜系列产品包括：桑姜感冒胶囊（国药准字Z20050067）、桑姜感冒片（国药准字Z14020935、Z19983141）、桑姜颗粒（食品）共3个产品。原工艺存在的缺陷：(1) 非有效成分不能被最大限度的除去，浓缩率不够高；(2) 提取液中除有效成分外，往往杂质较多，给精制带来不利；(3) 收膏量较大，不便于下一步制剂的问题。因此为了提高产品质量，本公司利用现代技术对桑姜浸膏的提取分离工艺改进进行立项研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高速离心机（湖南凯达科学仪器有限公司TG22B型台式）、管式离心机（辽阳晟峰制药机械有限公司GQ-105型）、超滤系统（南京凯米科技有限公司KOCH 10T/h）、电子天平（赛多利斯科学仪器BSA223S-CW）、电子天平（成都特斯特仪器有限公司BC1001），高效液相色谱仪（安捷伦Agilent 1100）。

1.2 试药

桑叶、干姜、菊花、紫苏叶、连翘、苦杏仁6味药材购于绵阳好医生饮片有限公司。连翘苷对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：110821－200711）、乙晴（色谱纯）、水为自制超纯水。

2 方法与结果

2.1 高速离心分离参数的确定

按原工艺取桑叶150 g，菊花120 g，紫苏叶160 g、连翘160 g、苦杏仁160 g、干姜100 g净药材置于不锈钢中，加入5倍量纯化水煎煮1.5小时，200目筛网过滤；再加5倍量纯化水煎煮1小时，200目筛网过滤；再加4倍量纯化水煎煮1小时，200目筛网过滤。合并以上过滤后的水煎液，分别取10个1000 mL样品，编号A－J。精密量取A样品50 mL，精密称取其重量；B～J样品分别采用不同转速进行离心，离心后的样品分别精密量取50 mL后称取其重量，重复五次精密称量药液重量。为对比高速离心分离是否对有效成分有影响，采用药典中桑姜感冒片的标识成分连翘苷作对比，按《中国药典》（2015年版）采用HPLC法测定A～J连翘苷的含量。

表1 离心转速分离效果对比表

根据以上试验可以看出，采用高速离心分离确能分理处水煎液中固体杂质，且对有效成分无明显影响，在离心速度达到18000 rad﹒min-1的条件下基本能分离完固体杂质。因工业型管式离心机转速最大为16000 rad﹒min-1，且通过上表可看出该转速条件下分析效率极为接近18000 rad﹒min-1等，实验最终确定离心转速为16000 rad﹒min-1。

2.2 连翘苷含量测定

按照《中国药典》2015年版一部桑姜感冒片连翘苷的含量测定方法。

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱AgilentTechnologies ZORBAXExtend-C184.6×250 mm，5 μm。流动相：乙腈-水(25∶75V/V)。检测波长：230 nm；流速：1.0 mL﹒min-1；柱温30 ℃。

2.2.2 溶液制备 对照品溶液的制备，精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的连翘苷对照品适量，加甲醇制成0.10 mg﹒mL-1的对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成0.05 mg﹒mL-1的对照品溶液，即得。

供试品溶液的制备，精密量取样品各1 mL，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 mL，蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用三氯甲烷振摇提取5次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，回收至干。残渣用50%甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，或滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有相同保留时间的色谱峰，按外标法计算其含量(n=5)。

2.3 超滤参数的确定

按处方放大提取，收得约15000 L水煎液，16000 rad﹒min-1离心分离，将离心后的液体精密量取，分成若干份，每份500 L，分别采用1万、3万、5万、10万、20万分子量的超滤膜，以超滤后的药液每10 L中可溶性固形物重量及连翘苷含量作为指标成分，优选超滤膜。

表2 超滤分子膜参数的确定（n=5）

与水煎液中连翘苷含量（43.2 μg﹒mL-1）比较在不影响有效成分含量的前提下，优选10万分子量的超滤膜。在此基础上，优选超滤温度，分别在20℃，30 ℃，40 ℃，50 ℃、60 ℃条件下进行试验。

表3 超滤温度参数的确定（n=5）

采用10万分子量超滤膜，考察提取液温度与超滤膜渗透通量的关系，做3批平行试验取平均值，结果见图1。

图1 提取液温度与超滤膜渗透通量的关系

2.4 验证实验

按高速离心转速16000 rad﹒min-1，超滤膜分子量为10万分子量，超滤温度为50 ℃，各进行2次验证试验，结果见表4。

由表4结果可知，优选工所得制剂的有效成分含量不变，含水量几乎无差异，崩解时间缩短，吸湿性降低，制剂稳定性好。 因此确定的高速离心参数为16000 rad﹒min-1、超滤膜分子量为10万分子量，超滤温度为50 ℃。

表4 验证试验结果（n=2）

3 讨论

桑姜系列浸膏的提取分离工艺主要为提取和分离两部分。经文献查询适用于中药浸膏制备的提取方法/技术有3种，分离方法/技术有5种[2]。通过对8种提取和分离精制方法/技术在中药制剂中做了应用调研[3～5]和基础性试验筛选，同时又保证药用浸膏符合相关政策（《已上市中药变更研究技术指导原则》），确定联用高速离心技术和超滤技术来优化浸膏工艺。

选取对影响高速离心和超滤技术影响较大的离心转速、超滤膜分子量、超滤温度为考察因素，以药液重量、连翘苷含量和制剂稳定性为评价指标，由于工业生产泵压有安全性和普适性要求，本研究采用常用压力0.05 MPa。首先对离心转速参数进行试验确定，再用离心后的药液确定超滤分子量和温度的参数。

高速离心技术能最大限度地保留有效成分，除去悬浮杂质，且无热处理过程，生产周期短。超滤法具有分离效率高，分离过程中无相变化，能耗低，可在常温下操作等特点，尤其适合热敏性物质的分离。采用高速离心法与超滤法结合，仅影响成型工艺，不属于重大变更。本研究主要是为了提高桑姜系列产品的质量，改善桑姜浸膏提取分离的制备工艺，最大限度的去除杂质，降低收膏量。工艺优化后，桑姜浸膏收膏量降低。制得的桑姜感冒制剂（胶囊/片）的崩解时间大幅缩短、产品吸湿性降低，大大优于原有工艺，不仅提高了药物吸收速度和生物利用度，也更有利于保证制剂的稳定。

[1]樊志文.桑姜感冒片治疗感冒312例.中国民间疗法.2005,13(6): 26.

[2]陈秦娥,梁金龙.中药提取、分离与纯化新技术进展.医药工程设计[J].2012, 33(4): 65.

[3]杨霞,范圣此.中药提取方法研究进展.亚太传统医药[J].2012, 8(8): 194.

[4]焦士龙.微波提取中药有效成分实验研究.天津大学[D].2006.

[5]董立丽.中药提取分离新技术的进展.海峡药学[J].2009,12(21): 107.