HPLC法测定卵磷脂中6个成分的含量

周文君

（朝阳市质量检验检测中心 辽宁 朝阳 122000）

1.前言

在临床医学所使用的磷脂类材料中，磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、鞘磷脂等，均是具有药用价值的卵磷脂，这些卵磷脂能够在慢性肝炎、肝硬化、高胆固醇血症等方面起到预防、治疗的作用。

2.实验器材和原料

本文根据HPLC法的测试实验要求，选用了蒸发光散射检测器[1]。

实验样本方面，本文选用了由上海某制药公司提供的五组蛋黄卵磷脂作为实验样本，标示为a1～a5。此外，为了保证实验数据的准确性，本文还分别选取了六个成分的对照品进行对比实验，通过数据对比来获取各组样本蛋黄卵磷脂的成分含量特点。

3.实验开展

在HPLC法当中，针对卵磷脂的测定一般依靠色谱柱来完成，通过蒸发光散射检测仪的照射，与色谱柱进行对比，并对流动相进行分析，最终获得样本的特征。本文在进行实验时，选用了diol色谱柱，色谱精度为5μm，色谱柱规格为25c×0.4cm。流动相分为A、B两组，其中A组流动为正庚烷：异丙醇=65∶113，B组流动为正庚烷：异丙醇：水=31∶61∶13。其洗脱梯度的具体数据为：其中A75%和B50%为0分钟，A50%和B50%为3分钟，A100%则为5～11分钟，B75%则为13～20分钟。流速为0.8mL/min，色谱柱温度为40℃，进样量为10μL。

随后，本文依据这一数据开展了分离度的测定实验。分别取六种成分的对照样品，加入到A组流动相当中进行稀释、溶解，称之为为特定容量的溶液，其中，韩棕榈酸甘油酯为27.5μg/ml、胆固醇450μg/ml、磷脂酰乙醇胺656μg/ml、磷脂酰胆碱3378μg/ml、鞘磷脂58.3μg/ml以及溶血性磷脂酰胆碱48.8μg/ml。随后根据色谱条件进行进样，获取各蜂的分离度，并进行符合程度测定。

4.实验结果分析

4.1 绘制标准化结果曲线

在完成了分离度测定之后，本文采用metter AE型号分析天平，对对照品磷脂酰胆碱以及磷脂酰乙醇胺进行精密称取，称取计量分别为68mg和13mg，将二者共同置于20ml的量瓶之中，用A流动相的溶液进行混合稀释，并将其作为储备溶液。再分别量取四组储备溶液，以2∶1∶1∶1的比例放置在量瓶之中，量瓶容量分别为20毫升、10毫升、10毫升和10毫升，并运用A组流动相进行稀释，使其成为标准溶液。分别对标准溶液和储备溶液进行精准量取，在色谱条件下进行进样测定，随后对棕榈酸甘油酯和胆固醇、鞘磷脂、溶血性磷脂酰胆碱进行精准量取，分别为5.5mg、43mg、10.9mg、10.3mg，并分别放置于量瓶之中。与前者相同，运用A组流动相进行混合稀释，形成各组储备液。再通过精密量取，获取各组储备液10ml、2ml、2ml和3ml，共同放置到量瓶之中，由A组流动相进行稀释，作为杂质标准溶液，分别精准量取2μL、5μL、10μL、20μL和30μL，对比色谱条件进行测定。

4.2 对数分析

通过实验测定可以获取峰面积的对数和进样量的对数，两组对数分别对应为纵坐标和横坐标，进而形成logA与logW的方程关系及及相关系数[2]，通过进样量的分析可以确认线性范围的区间，如下表：

方程及相关系数 线性范围磷脂酰胆碱为 logA=1.840logW+2.813（r=0.9979） 1.69～33.88μg磷脂酰乙醇胺 logA=1.417logW+2.981（r=0.9996） 0.33～6.97μg棕榈酸甘油酯 logA=1.252logW+3.200（r=0.9990） 0.17～8.83μg胆固醇 logA=1.290logW+3.097（r=0.9993） 0.88～14.83μg鞘磷脂 logA=1.116logW+2.971（r=0.9553） 0.21～3.85μg溶血性磷脂酰胆碱 logA=1.376logW+3.084（r=0.9957） 0.49～4.72μg

4.3 供试样品测定

为了完成测试对比，本文将a1～a5五组蛋黄卵磷脂进行了测定，选取样品量75mg，分别放置于25mL的量瓶之中，通过A组流动相进行稀释并完成混合，再将其在色谱条件当中测定的峰值面积的对数带入到回归方程当中进行计算。计算结果显示，五组样品的六个成分的含量十分相近，均控制在一定区间。其中，棕榈酸甘油酯的含量为1.27±0.03μg；胆固醇的含量为8.83±0.17μg；磷脂酰乙醇胺的含量为15.88±0.37μg；磷脂酰胆碱的含量为76.93±5.98μg；鞘磷脂的含量约为2.39±0.03μg；溶血性磷脂酰胆碱的含量则为2.11±0.07μg。

5.结论

相较于其他的测量方法如薄层分析法、气相色谱法而言，HPLC法具有简单、快捷的特征。通过检验可以看出，作为同一批次的蛋黄卵磷脂，在六个成分的含量方面差别不大，这部分卵磷脂具有较好的药用价值，能够作为乳化剂或口服使用。

[1]杜章斌，滕英来，汪勇，等.核磁共振氢谱法测定卵磷脂、溶血磷脂和甘油磷脂酰胆碱含量[J].中国油脂，2015，40(03):83-86.

[2]祝艺娟，黄媛，晁若冰.HPLC法测定脂肪乳注射液及卵磷脂中溶血磷脂的含量[J].药物分析杂志，2012，32(06):1048-1051.