老年高血压患者左心室肥厚与血浆Klotho蛋白水平的相关性

李宝善 蒋 宜 唐渝平 马厚勋 裴文楠 李婷婷 周 敏 褚静鑫

(重庆市急救医疗中心老年病科，重庆 400014)

研究发现Klotho基因突变与人类衰老的各种表型，如寿命缩短、肺气肿、动脉硬化、骨质疏松等密切相关〔1〕。刘晓林等〔2〕研究发现Klotho基因单核苷酸多态性与老年高血压相关，左心室肥厚(LVH)是高血压的最常见并发症，本课题组进一步研究还发现Klotho基因多态性与其高血压LVH明确相关〔3〕。腺相关病毒介导的Klotho基因转导在自发性高血压大鼠(SHR)在体动物实验也证实Klotho蛋白表达的增加可以抑制SHR高血压进程，并且发现Klotho蛋白高表达可以降低心脏指数、抑制心肌细胞肥大和心肌纤维化，即提示Klotho蛋白表达调节可能在LVH的发生、发展过程中发挥重要作用〔4〕。本研究旨在揭示Klotho蛋白水平与LVH的相关性及可能的作用机制。

1 对象和方法

1.1研究对象 2015 年5月至2016年5月重庆市急救医疗中心老年病科住院的老年高血压合并LVH患者74例为LVH组，所有病例完善超声心动图检查，根据欧洲协会心血管影像协会(EACVI)/美国超声协会(ASE)2015年推荐的LVH标准诊断〔5〕。LVH标准：左心室质量指数(LVMI)：老年男性LVMI≥115 g/m2，女性LVMI≥120 g/m2，即诊断LVH。对照组为同期住院患者经超声心动图检查排除LVH的老年高血压患者80例。血脂异常的诊断参考《中国成人血脂异常防治指南》(2007)〔6〕；高血压诊断符合《中国高血压防治指南2010》〔7〕；参考1999年世界卫生组织2型糖尿病诊断标准诊断2型糖尿病。重庆市急救医疗中心医学伦理委员会审查通过本研究方案，所有入选患者充分知情并签署知情同意书。

1.2方法 左心室参数的检测方法：采用Acuson 128XP/10彩色多普勒超声仪变频探头2.5～4.0 MHz。获取心脏胸骨旁左心室长轴二尖瓣腱索水平的M型二维图像，在舒张末期分别测出室间隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)、左心室内径(LVID)，然后计算LVMI。本研究所涉及的所有心脏超声检查由同一个经过严格培训的专业技术人员完成，确保检查结果准确、可靠。入院次日清晨，空腹测量患者体重、身高，计算体重指数(BMI)。共抽取静脉血6 ml，取其中3 ml使用肝素钠抗凝，使用湘仪L400台式低速自动平衡离心机(中国湖南湘仪离心机厂生产)2 500 r/min离心10 min分离血浆，-20℃冰箱保存备用；剩余3 ml静脉血使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，2 500 r/min离心10 min分离血清，使用日立7060全自动生化分析仪测定血糖、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。吸取血浆样品100 μl，使用人Klotho蛋白酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒(编号：DY5334-05、DY008，购自美国R&D公司)，SpectraMax M2e 酶标仪(Molecular Devices)，按照ELISA试剂盒说明书流程操作。

1.3统计学处理 应用PASW Statistics 18.0统计学软件进行χ2检验、独立样本t检验、Logistic多因素回归分析。

2 结 果

2.1两组一般临床情况对比 LVH组BMI明显高于对照组(P<0.01)，Klotho蛋白水平明显低于对照组(P<0.001)。LVH组糖尿病患者比例高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)；两组年龄、性别、血清脑钠素(BNP)水平、血脂异常比较均差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 两组一般临床情况对比

2.2多因素回归分析 以Klotho蛋白测定值的中位数为分界线，低于中位数视为血浆Klotho蛋白降低，赋值为1，高于中位数赋值为0；患有高血压、糖尿病、血脂异常者赋值为1，无则赋值为0。该模型包括性别、2型糖尿病、BMI、血脂异常及血浆Klotho蛋白水平。在单因素分析高血压LVH危险因素时，高BMI这个传统危险因素和血浆Klotho蛋白水平在两组间就有显著型差异。Logistic 多因素回归分析提示低血浆Klotho蛋白水平、2型糖尿病、高BMI是LVH的独立危险因素，见表2。

表2 LVH危险因素的多因素回归分析

3 讨 论

高血压作为最常见的衰老相关性心血管疾病之一，已成为影响老年人健康和长寿的重要因素。随着高血压病程发展，常可导致心、脑、肾等重要靶器官损害，其中以心脏损害最为常见(LVH尤为常见)。LVH是心脏负荷增加时的一种最初代偿性改变，但随着其病程的持续性进展，包括心力衰竭、心肌梗死、心源性猝死等心血管事件的发生率明显增高，严重危及患者生命，已成为临床上心血管事件发生的独立危险因素〔8〕。早有研究证实心室肥厚是一个涉及包括多种刺激因素、膜受体、细胞内信号级联放大及多种转录因子、基因表达调控和效应器参与其中的高度复杂的病理过程〔9〕。李龙等〔10〕证实人Klotho基因多态性与高血压LVH有明确相关性。推测Klotho基因在高血压LVH发生、发展中所起的作用有可能就是通过Klotho蛋白的生物活性来影响心肌细胞而发挥其生物学作用的。研究已证实膜型Klotho蛋白作为FGF23的一种特有的受体辅助因子，通过形成Klotho-FGF23-FGFR1复合物形式影响FGF23的信号转导而发挥生物学作用〔11〕。由此推测Klotho蛋白可能通过FGF23通路，影响高血压LVH的发生、发展进程。而其具体调节机制、信号通路有待进一步研究、探索。

Xie等〔12〕使用异丙肾上腺素诱导产生LVH小鼠模型，研究发现Klotho基因缺乏小鼠比野生鼠LVH更严重，而在Klotho转基因小鼠中，Klotho基因过表达，可以阻止异丙肾上腺素诱导的LVH。可见Klotho蛋白可以保护心肌避免发生LVH。

4 参考文献

1Kuro-o M,Matsumura Y,Aizawa H,etal.Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing〔J〕.Nature,1997；390(6655):45-51.

2刘晓林，马厚勋，田小春，等.Klotho基因3个SNP位点与老年高血压及脂代谢的相关性〔J〕.中国老年学杂志,2010；30(23):3429-32.

3蒋 宜,刘晓林,田晓春,等.老年高血压患者克老素基因单核苷酸多态性与其左心室肥厚的相关性研究〔J〕.重庆医科大学学报,2013;38(8):891-5.

4李宝善,马厚勋,王艳娇,等.Klotho基因转导延缓自发性高血压大鼠高血压进程及改善其心脏损害的作用研究〔J〕.中华医学遗传学杂志,2012;29(6):662-8.

5Marwick TH,Gillebert TC,Aurigemma G,etal.Recommendations on the use of echocardiography in adult hypertension:a report from the European Association of Cardiovascular Imaging(EACVI) and the American Society of Echocardiography(ASE)〔J〕.J Am Soc Echocardiog,2015;28(7):727-54.

6中国成人血脂异常防治指南制订联合委员会.中国成人血脂异常防治指南〔J〕.中华心血管病杂志,2007;35(5):390-419.

7中国高血压防治指南修订委员会.中国高血压防治指南2010〔J〕.中华心血管病杂志,2011;39(7):579-616.

8阎国辉，张玉东，孙志丹.遗传性高血压致左室肥厚机制的研究现状〔J〕.中国综合临床，2004;6(6):573-4.

9Rohini A,Agrawal N,Koyani CN,etal.Molecular targets and regulators of cardiac hypertrophy〔J〕.Pharmacol Res,2010;61(4):269-80.

10李 龙,李 莉,崔天祥,等.Klotho基因多态性与高血压左室肥厚的关系〔J〕.中国老年学杂志,2013;33(11):2501-3.

11Yamazaki M,Ozono K,Okada T,etal.Both FGF23 and extracellular phosphate activate Raf/MEK/ERK pathway via FGF receptors in HEK293 cells〔J〕.J Cell Biochem,2010;111(5):1210-21.

12Xie J,Cha SK,An SW,etal.Cardioprotection by Klotho through downregulation of TRPC6 channels in the mouse heart〔J〕.Nat Commun,2011;3:1238.