猪口蹄疫O型灭活疫苗对猪不同免疫次数的效果比较

王孝德，李志贤，黄 觉，黄诗惠，禹婷婷

(1.贺州市动物疫病预防控制中心，广西贺州 542800；2.贺州市动物卫生监督所，广西贺州 542800)

猪O型口蹄疫是严重危害我国养猪业健康发展的疫病,是世界动物卫生组织(OIE)规定必须报告的传染病之一，我国规定为一类动物疫病[1-2]。目前，国内外预防和控制该病的主要措施是给易感动物接种疫苗，在我国属于强制免疫病种[3-4]。由于O型口蹄疫流行毒株在不断的变化中，从2010年开始，O型口蹄疫的流行以O/MYA98/BY/2010毒株为主，在韩国、越南、日本等地先后报道出现过疫情[5-6]。目前我国猪口蹄疫的强制免疫选用的疫苗毒株以猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)为主，但在生产实践中由于受多种因素的影响，一些接种过疫苗的易感动物不能达到预期的免疫效果，免疫失败也时有发生，甚至可能发生疫情[7-9]。因此，通过对免疫后的猪进行抗体水平检测，分析评估免疫效果，切实掌握本地生猪O型口蹄疫免疫情况，为更好制定合理的免疫程序提供科学依据，确保不发生区域性猪O型口蹄疫疫情有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗与试验用猪 猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)，中农威特生物科技股份有限公司生产，政府采购苗，批号为H160307J，由贺州市动物疫病预防控制中心供应。选择品种一致，在35日龄～38日龄、体重相近，临床观察1周后确认健康，经检测O型口蹄疫母源抗体在5log2以下(表1)，未经免疫口蹄疫O型灭活疫苗的健康仔猪150头。

1.1.2 免疫剂量与诊断液 按照说明书要求每头每次肌肉注射2 mL。本次试验务必要求操作规范，无失误。操作时由助手保定猪，然后注射者抓住猪耳，根据猪的大小在猪耳根后2 cm～5 cm处垂直入针注射。口蹄疫O型液相阻断ELISA试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号 20160830101-8。

1.1.3 主要仪器 酶标仪由帝肯上海贸易有限公司生产；单道移液器、多道移液器均由德国Tranferspette公司生产。

1.2 方法

1.2.1 免疫分组和方法 在某一规模猪场(存栏母猪在100头以上)选择90头35日龄～38日龄的试验猪随机分成A、D、G 3组，每组30头；另一规模猪场(存栏母猪50头)选择30头35日龄～38日龄的试验猪随机分成B、E、H 3组，每组10头；某村选择5户散养户，选择35日龄～38日龄的猪各6头，共30头试验猪分成C、F、I 3组(3组中每户2头)，每组10头。标记饲养。

A、B、C 3组为1次免疫组，即在35日龄～38日龄注射2 mL猪口蹄疫O型灭活疫苗进行第1次免疫接种。D、E、H 3组为2次免疫组，即在第1次免疫后间隔28 d，进行2次免疫，免疫剂量和方法同第1次免疫。C、F、I 3组为3次免疫组，即在第2次免疫后间隔28 d，进行第3次免疫，免疫剂量和方法同第1次免疫。

1.2.2 采血日龄 A、B、C 3组分别于第1次免疫后的28、56、84 d前腔静脉采血，收集血清，存于-20℃备检。D、E、H 3组在第1次免疫后28 d前腔静脉采血采血，收集血清，存于-20℃备检。当天进行第2次免疫,在距第1次免疫后的56 d、84 d分别前腔静脉采血，收集血清，存于-20℃备检。C、F、I 3组在第1次免疫后28 d前腔静脉采血，收集血清，存于-20℃备检；当天进行第2次免疫，距第1次免疫后56 d前腔静脉采血，当天进行第3次免疫，距第1次免疫后84 d前腔静脉采血。收集血清，存于-20℃备检。

1.2.3 检测方法与结果判定 采用液相阻断ELISA方法检测，每块板检测按10头份设计，具体操作参照试剂盒说明书。判定标准为：当抗体效价≥6log2，被检血清的免疫抗体为合格；抗体效价<6log2，被检血清的免疫抗体为不合格。

2 结果

试验猪均未观察到有食欲减退、跛行等不良反应。第1次免疫后免疫抗体产生情况(表2)和不同免疫次数仔猪产生的口蹄疫抗体效价及合格率(表3)表明，第1次免疫后28 d检测，免疫抗体效价较低，免疫抗体总合格率仅为12.7%，规模养猪场为13.3%，略高于农村散养户的10%；距离第1次免疫后56 d和84 d检测，免疫抗体效价较低，免疫抗体总合格率为26%，规模养猪场为30%，略高于农村散养户的10%。

表1 免疫前试验仔猪母源抗体检测情况

表2 1次免疫免疫抗体检测情况

第2次免疫后免疫抗体产生情况(表4)和不同免疫次数仔猪产生的口蹄疫抗体效价及合格率(表3)表明，经过第2次免疫接种猪口蹄疫O型灭活疫苗后，距离第1次免疫后56 d检测，免疫抗体总合格率达45%，规模养猪场为47.5%，略高于农村散养户的35%；距离第1次免疫后84 d检测，免疫抗体总合格率达56%，规模养猪场为57.5%，略高于农村散养户的50%。

第3次免疫后免疫抗体产生情况(表5)和不同免疫次数仔猪产生的口蹄疫抗体效价及合格率(表3)表明，经过3次免疫接种猪口蹄疫O型灭活疫苗后，距离第1次免疫后84 d检测，免疫抗体合格率达98%，规模场和散养户免疫抗体总合格率都达90%以上。

3 讨论

3.1 母源抗体效价的高低对仔猪免疫后免疫抗体的产生有影响

未免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗的断奶仔猪体内O型口蹄疫抗体效价与母猪的免疫情况有关，在母猪配种前，加强免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗的断奶仔猪免疫抗体合格率高、持速时间长，到49日龄时，免疫抗体合格率依然可达80%[10-11]。因此，本试验通过母源抗体效价检测，选用母源抗体效价都在5log2以下的试验仔猪。根据当地实际情况，母猪的免疫一般都是间隔4个多月补针，多数未在母猪怀孕前加强免疫。因此，本试验结果在指导生产实践中更具有指导作用，更接近当地的实际情况。

表3 不同免疫次数仔猪的口蹄疫抗体水平及合格率

表4 2次免疫免疫抗体检测情况

表5 3次免疫免疫抗体检测情况

3.2 同样的免疫程序，猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)与猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)不同

按薛新梅等[12]报道的口蹄疫母源抗体对仔猪疫苗免疫的影响看：二次免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)后一个月，检测到的免疫抗体合格率达85%，平均抗体效价在7.65log2，与我们在2010年至2011年上半年期间(使用OZK / 93 株)的灭活疫苗)检测到的免疫抗体合格率84.17%基本相合；2011年下半年开始使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)后，在2011年下半年至2012年日常监测到的二次免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的断奶仔猪免疫抗体合格率43.67%，抗体滴度不高，离散度较大。本次试验在2次免疫后28 d时，检测结果显示免疫抗体合格率在45%，2次免疫后56 d时，检测结果显示免疫抗体合格率达56%，仍达不到农业部要求的免疫抗体合格率达70%以上的要求。说明猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)毒株比以前口蹄疫O型毒株(如OZK/93株)更能降低猪对这种毒株的应答能力，对猪的危害性就更大。

3.3 3次免疫后免疫抗体合格率较高

3次免疫后28 d时，检测结果显示免疫抗体合格率达98%，且免疫抗体滴度保持较高状态，抗体效价达到9 log2，超过农业部要求的免疫抗体合格率达70%以上的要求。且3次免疫后抗体滴度标准差为1.05 log2，变异系数为13.125%，表明群体抗体均衡度高、离散度低，则疫苗的免疫效果就好。

本次试验包括大型养猪场、中小养殖场和散养户，试验结果表明，大型养猪场由于科学养殖水平高，比中小养猪场的免疫情况要好，但差距不是非常明显，农村散养户的免疫抗体合格率与大型养猪场和中小养猪场的100%免疫抗体合格率相比差距较小，3次免疫后免疫抗体合格率达90%，说明3次免疫后，规范操作，不论是大型养猪场、中小养殖场还是散养户，猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)灭活苗的免疫抗体合格率都能达到农业部要求的70%以上。

猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)毒株毒力强，1次、2次免疫后，猪产生的免疫抗体滴度不高、免疫抗体合格率未能达到农业部要求的70%以上，3次免疫后，免疫抗体合格率可达到80%以上，免疫抗体滴度整齐、离散度低，达到国家要求，若能进行3次免疫，免疫效果将更好，在规模养殖场应大力提倡。由于当前养猪业，要免疫猪瘟、高致病性猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒等疫苗，本试验是在不影响其他病种免疫的情况下进行。因此，对猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)灭活苗的免疫效果或有影响，但更接近生猪生产的实际情况，对一些不具备检测口蹄疫O型免疫抗体的养殖户制定猪O型口蹄疫(O/MYA98/BY/2010株)的免疫程序具有重要的指导作用。

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