针刺对胃溃疡模型大鼠CRH、ACTH的影响

关翰宇 马佳佳 李婧婷 付晨露 王旒靖 薛 婷邵一轩 葛东宇 董瑞娟 马惠芳

（北京中医药大学，北京 100029）

机体受到应激性刺激，导致胃、十二指肠出现急性糜烂和溃疡，称之为应激性胃溃疡，其发生和发展的机制尚未完全明了［1]。近年来胃溃疡的发病率呈明显上升趋势，其发病的主要原因是人们的饮食习惯不健康以及生存环境的改变。由于患者常忽视胃溃疡的严重性，对该病的治疗和医嘱依从性差，病程缠绵，故常引发严重疾病如胃癌、上消化道出血等［2]。目前西医仍难以完全根治胃溃疡。有研究表明，HPA轴功能亢进可以导致机体出现损伤甚至疾病［3]。由于下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴负反馈机制失调使促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、肾上腺皮质激素（ACTH）、不断升高，胃蛋白酶和胃酸分泌增加、胃黏液分泌减少，胃肠黏膜屏障功能受损，引起机体胃溃疡［4]。而针刺在保护胃黏膜、减少胃出血等方面作用显著，对治疗胃溃疡有较好疗效［5]。本实验探讨针刺对应激性胃溃疡大鼠血清、脑组织中CRH、ACTH的影响，并探讨其可能的作用机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性清洁级SD大鼠28只，体质量（200±20）g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK（京）2009-0017。实验过程对动物的处置符合《关于善待实验动物的指导性意见》的规定。

1.2 试剂与仪器 ACTH酶联免疫试剂盒。CRH酶联免疫试剂盒。水合氯醛（沈阳市国药化学试剂公司）。奥美拉唑肠溶片（阿斯利康制药有限公司）。Multiskan MK3标准规格酶标仪（Thermo Scientific）。SKP-02.600电热恒温培养箱 （黄石市恒丰医疗器械有限公司）。DEM-3自动洗板机 （北京拓普分析仪器有限公司）。3K18离心机（Sigma）。针具（汉医牌无菌针灸针）。

1.3 干预方法 大鼠适应性饲养1周后，采用随机数字表法将大鼠随机分为模型组、空白组、针刺组、药物组，每组7只。造模后第1日进行干预，针刺组针刺中脘、双侧足三里穴，各组均直刺进针，平补平泻，留针20min，每5分钟行针30 s，连续5 d。所有穴位定位参照化学工业出版社2010年9月出版的 《实验针灸学》（张露芬主编），其中足三里对应后三里。后三里位于膝关节后外侧，在胫骨头下处，直刺7mm。中脘位于脐上约20mm，直刺2mm。药物组采用每日给奥美拉唑肠溶片溶液2mL灌胃，浓度为0.2mg/kg，连续5 d。奥美拉唑肠溶片0.2mg/kg，将药片打碎，用蒸馏水溶解，浓缩成每次2mL用量。

1.4 模型制备 本实验SU模型造模方法采用RWIS应激法［6]的改良办法复制。空白组不做造模处理，针刺组、模型组、药物组大鼠禁食不禁水36 h后造模。将大鼠放入自制固定器（350 mL塑料矿泉水瓶，去瓶盖，剪开距瓶底5 cm处，将大鼠头部朝上从瓶底剪开处放入）中，将装有大鼠的矿泉水瓶直立放入温度约（20±1）℃的水中，浸泡3 h后取出。各治疗组于造模后第1日开始治疗，连续5 d。首次造模后第3日，除空白组外各组重复上述造模过程再次造模。

1.5 标本采集与检测 首次造模后第5日，于治疗结束后各组用40mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射，待麻醉后快速取血、取胃、取脑。1）胃黏膜损伤程度测量。结扎幽门和贲门，将10%多聚甲醛固定液10mL注入胃内，将胃取下，按组别放入装有多聚甲醛的带盖广口瓶中。在固定液中放置10 min后，沿胃大弯剪开，使用游标卡尺测量溃疡灶长度及宽度，采用Guth［7]计分法计算胃黏膜损伤程度，用损伤指数（UI）表示：斑点糜烂计1分；糜烂损伤长度＜1mm计2分；糜烂损伤长度1～2mm计3分；糜烂损伤长度2～3mm计4分；糜烂损伤长度3mm计5分；损伤宽度1mm时分值×2。2）血清中CRH、ACTH水平检测。腹主动脉取血5mL，静置30min后以3000 r/min的速度在-4℃离心5 min，离心完毕取血清2mL置于-80℃冰箱冷冻保存。用酶联免疫法（ELISA）方法检测CRH、ACTH水平。3）脑组织中CRH、ACTH水平检测。大鼠去冠后，迅速取出脑组织，剥离出下丘脑和垂体，称质量，匀浆。待组织匀浆之后，放入离心机中，以3000 r/min离心15 min取上清液。全血离心取血清，用酶联免疫法检测下丘脑中CRH水平以及垂体中ACTH水平。

1.6 统计学处理 应用SPSS22.0统计软件。计量资料以（±s）表示。组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠胃黏膜溃疡指数评分比较 见表1，图1。正常组大鼠胃黏膜光滑完整，未见损伤性改变，模型组大鼠胃黏膜充血明显，有大量点状线状出血点和糜烂，损伤程度明显高于正常组，针刺治疗组和药物治疗组胃黏膜充血程度较模型组降低，点状线状出血点和糜烂变少。与空白组相比，模型组胃黏膜溃疡指数显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，针刺组和药物组胃黏膜溃疡指数明显降低（P＜0.05）；针刺治疗组与药物治疗组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组大鼠Guth胃黏膜UI评分比较（分，±s）

表1 各组大鼠Guth胃黏膜UI评分比较（分，±s）

与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

组 别 n 溃疡指数空白组 7模型组 7针刺组 7 0 52.43±19.51 18.00±11.61##药物组 734.71±9.45#

图1 各组大鼠胃黏膜损伤程度比较

2.2 各组大鼠血清中ACTH水平比较 见表2。与空白组相比，模型组血清中ACTH水平显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，针刺组血清中ACTH水平显著降低（P＜0.01），药物组水平降低，但无统计学差异 （P＞0.05）；针刺组与药物组比较，针刺组血清中ACTH水平较低（P＜0.05）。

表2 各组大鼠血清及垂体中ACTH水平比较（ng/L，±s）

表2 各组大鼠血清及垂体中ACTH水平比较（ng/L，±s）

与空白组比较，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与药物组比较，△P＜0.05。 下同。

组 别 n 血清ACTH 垂体ACTH空白组 7模型组 7针刺组 7 30.85±4.86 48.22±8.33 55.92±6.39** 68.75±3.46**34.32±5.45##△ 62.90±6.22#药物组 750.07±10.34# 62.90±11.09#

2.3 各组大鼠垂体中ACTH水平比较 见表2。与空白组相比，模型组垂体中ACTH显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，针刺组、药物组垂体中ACTH水平降低，虽无统计学差异（P＞0.05），但有下降趋势；针刺组与药物组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.4 各组大鼠血清中CRH水平比较 见表3。与空白组相比，模型组血清中CRH水平显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，针刺组血清中CRH水平显著降低（P＜0.01），药物组血清中CRH水平降低，但无统计学差异（P＞0.05）；针刺组与药物组比较，针刺组血清中CRH水平较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表3 各组大鼠血清、下丘脑中CRH水平比较（ng/L，±s）

表3 各组大鼠血清、下丘脑中CRH水平比较（ng/L，±s）

组 别 n 血清CRH 下丘脑CRH空白组 7模型组 7针刺组 7 24.05±1.82 35.17±2.73 33.13±4.71** 45.56±1.80**24.88±2.39##△ 38.46±1.78##药物组 730.89±2.04# 39.01±1.59#

2.5 各组大鼠下丘脑中CRH水平比较 见表3。与空白组相比，模型组下丘脑中CRH水平显著升高 （P＜0.01）；与模型组相比，针刺组下丘脑中CRH水平显著降低（P＜0.01），药物组下丘脑中CRH水平降低（P＜0.05）；针刺组与药物组之间差异无统计学意义 （P＞0.05）。

3 讨 论

针灸治疗胃溃疡具有远期疗效好、复发率低、副作用小、操作便捷等优势［8]。 有研究表明［9-10]，针刺干预能够促进大鼠胃溃疡的愈合。本实验选取足三里、中脘两穴。足三里为胃经合穴和胃腑的下合穴，有健脾益胃、生化气血、调畅气机的功效。中脘为胃经募穴有疏利气机，理气和胃的功效。两穴为合募配穴，皆可调节脾胃，合用可加强治疗效果［11]。针刺足三里可以调节胃运动和胃分泌功能，改善胃黏膜损伤，促进胃黏膜修复，从而起到治疗胃溃疡的作用［12]，还可以通过影响神经-免疫-内分泌网络发挥对胃的调节作用［13]。奥美拉唑有抑酸作用，可缓解炎症反应，为典型的质子泵抑制剂，且较其他药物不良反应更小，是治疗胃溃疡的常用药物，故选择奥美拉唑为本实验治疗药物［14-15]。

有研究表明，在机体受到应激性刺激后，起到核心作用的是下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴［16]，HPA 轴功能持续亢进，会使机体对外源性应激因子的易感性增加，从而引起胃肠道损伤［17]，而 CRH、ACTH 是构成和调节HPA轴的重要物质。机体受到的应激性刺激经中枢整合传入HPA轴，通过HPA轴对胃肠的调节功能，再将调控信息传送到肠神经或直接作用于胃肠效应细胞，使胃的运动功能受到抑制，胃酸过多分泌，从而使胃黏膜损伤加剧［18]。HPA轴被应激性刺激激活的同时，下丘脑中的CRH大量分泌，在CRH的作用下，ACTH水平升高，胃酸、胃酶分泌增加，黏膜屏障的保护作用受损，胃黏膜表皮细胞更新受到抑制，最终导致胃黏膜受到损伤继而产生应激性胃溃疡［19]。应激性刺激对通过HPA轴影响胃肠的表现方式为：机体受到应激性刺激后异常激活了HPA轴、导致CRH分泌增加、在CRH的作用下ACTH水平升高、消化系统受到影响、引发应激性胃溃疡［20]。

本实验通过束缚-浸水应激法复制大鼠应激性溃疡模型，以胃黏膜损伤指数（UI）评估大鼠胃黏膜损伤程度，造模后针刺组采用针刺中脘、足三里穴干预，药物组采用奥美拉唑药物干预，研究针刺对胃溃疡模型大鼠血清、脑组织中CRH、ACTH的影响。实验结果表明模型组大鼠胃黏膜损伤指数显著高于正常组；针刺组和药物组损伤指数较模型组明显降低；提示胃黏膜UI与胃黏膜损伤程度呈正相关。模型组大鼠血清、脑组织中CRH、ACTH水平较空白组均升高（P＜0.05）；提示应激性胃溃疡的发生可能与CRH、ACTH的升高有关。与模型组相比针刺组大鼠血清中CRH、ACTH、下丘脑中CRH水平均降低；垂体中ACTH水平有下降趋势；提示针刺治疗可以有效降低CRH、ACTH水平，从而治疗胃溃疡，其机制可能是通过抑制中枢和外周CRH、ACTH的大量分泌，使HPA轴得到调节，降低机体应激反应，减少胃酸分泌，恢复黏膜屏障保护作用，从而达到治疗应激性胃溃疡。针刺组、药物组两组与模型组相比CRH、ACTH水平均有不同程度降低（P＜0.05），观察针刺、药物两组实验结果，针刺组血清中CRH、ACTH水平较药物组均降低（P＜0.05）；提示针刺治疗可能优于奥美拉唑治疗；脑组织中针刺组与药物组CRH、ACTH水平无明显差异，但针刺治疗无副作用，故相较之下，针刺为更好的治疗方法。本实验为临床针刺治疗应激性胃溃疡提供了一定的实验依据。然而对于针刺与药物干预应激性胃溃疡作用于HPA轴的机制尚需进一步研究。

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