活血宁心解毒方对急性心肌缺血模型大鼠心电图、血流动力学及氧化应激指标的影响*

万晓露

（浙江中医药大学附属第三医院，浙江 杭州 310003）

心肌缺血为心肌细胞缺血缺氧引起其代谢的紊乱，心肌收缩功能减弱，舒张功能障碍，引起血流阻力增加，使血液流速减慢，心肌细胞膜中不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，直接影响冠脉供血，威胁患者的生命健康［1-3]。活血宁心解毒方具有益气养心、活血解毒的功效，作为本院治疗急性心肌缺血的院内协定方，对于心肌缺血（心气不足、瘀血麻痹证）患者具有良好的临床疗效，且无明显毒副反应，但其作用机制尚不明确。因此，本研究以结扎冠状动脉前降支法制备急性心肌缺血模型，旨在探讨活血宁心解毒方对急性心肌缺血模型大鼠心电图、血流动力学及氧化应激指标的影响，为临床治疗提供新思考。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 实验动物：50只健康清洁级Wiatar大鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供［SCXK（京）2011-0011]，雌雄各半，体质量（250±20） g。自然光线下，以标准饲料和无菌蒸馏水喂养。

1.2 试药与仪器 活血宁心解毒方（组成为三七10 g，丹参 10 g，黄芪 15 g，刺五加 10 g，麦冬 10 g，甘松10 g，黄连 10 g，鹿衔草 10 g，酸枣仁 15 g，柴胡 10 g，水蛭10 g，甘草10 g），临床每人用量为每日130 g生药，药材均由本院中药房提供，加水煎煮，浓缩至质量浓度1 g/mL，4℃冰箱保存备用。水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司），肝素钠（天津生物化学制药有限公司）。超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化物（LPO）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）试剂盒购自武汉博士德公司。XD-7100型心电图仪（上海医疗电子仪器厂生产），Bioteka Quant型酶标仪 （上海坤肯生物化工有限公司），13R离心机（力康集团力新仪器（上海）有限公司），MPG-3E血液凝聚仪 （上海斯隆医电设备有限公司生产），OLYMPUSAU5400全自动生化分析仪（日本奥林巴斯有限公司），SOUTH990BZ血液黏度分析仪（重庆南方数控设备有限责任公司）。

1.3 模型制备 50只Wiatar大鼠，随机取10只为空白对照组，剩余40只Wiatar大鼠水合氯醛麻醉后，自左侧肋间开胸，暴露心脏，肺动脉圆锥及左房间找出冠状动脉左前降支，在距起点3 mm处穿“0”号线结扎，将心脏送回胸腔，挤出胸腔内血液，缝合胸壁，建立急性心肌缺血模型大鼠［4-5]。

1.4 分组与给药 将造模成功的大鼠随机分为模型对照组，活血宁心解毒方低、中、高剂量组。空白对照组和模型对照组给予蒸馏水2.0mL/kg灌胃，活血宁心解毒方低、中、高剂量组分别给予0.5、1.0、2.0mL/kg的活血宁心解毒方提取溶液。每天灌胃1次，连续灌胃2周。

1.5 标本采集与检测 灌胃给药2周后，采用心电图仪观察各组大鼠的心电图变化。心导管测定左房平均压（mLAP），彩色多普勒超声心动图测定血流动力学的平均二尖瓣压力差（mMPG）、肺动脉平均压（mPAP）等指标。处死各组大鼠，取同一位置的心室肌组织，固定24 h后，经酒精脱水和二甲苯透明后，石蜡包埋，连续切片，切片间距5 mm，苏木素-伊红染色，树胶封片后，光学显微镜观察视网膜结构。颈总动脉取血，取抗凝血1 mL，血黏度分析仪检测全血黏度（WBV）、血浆黏度（PV）、红细胞压积（RCPP）及红细胞聚集指数（RCAI）等血液流变学指标。采用ELISA检测血清SOD、LPO和GSH-PX水平，试剂盒购自武汉博士德公司，严格按照说明书操作。

1.6 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用方差分析，组间两两比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠心肌组织病理学变化 见图1。空白对照组肌束排列整齐，无炎性细胞浸润和血管扩张；模型对照组肌束排列不整齐，肌纤维断裂，炎性细胞浸润和血管扩张，心肌纤维化及间质水肿；活血宁心解毒方低剂量组肌束排列不整齐，炎性细胞浸润、血管扩张，心肌纤维化水肿减轻；活血宁心解毒方中剂量组炎性细胞浸润、血管扩张，心肌纤维化水肿明显减轻；活血宁心解毒方高剂量组肌束排列整齐，无炎性细胞浸润，轻度血管扩张，轻度心肌纤维化。

图1 各组大鼠心肌组织病理学变化（HE染色，400倍）

2.2 各组大鼠心电图比较 见表1。与空白对照组比较，模型对照组大鼠ST段明显抬高（P＜0.05）；与模型对照组比较，活血宁心解毒方组大鼠心电图ST段抬高值明显减少，且不同组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。

表1 各组大鼠心电图ST段比较（mV，±s）

表1 各组大鼠心电图ST段比较（mV，±s）

空白对照组比较，*P＜0.05；与模型对照组比较，△P＜0.05；与活血宁心解毒方低剂量组比较，#P＜0.05；与活血宁心解毒方中剂量组比较，◇P＜0.05。 下同。

组 别 n 1周 2周空白对照组 10 0.12±0.04 0.13±0.04模型对照组 10 0.27±0.08* 0.25±0.10*活血宁心解毒方低剂量组 10 0.21±0.07*△ 0.20±0.07*△活血宁心解毒方中剂量组 10 0.18±0.06*△# 0.17±0.06*△#活血宁心解毒方高剂量组 10 0.14±0.05△#◇ 0.12±0.05△#◇

2.3 各组大鼠血流动力学指标比较 见表2。与空白对照组比较，模型对照组mLAP、mMPG和mPAP均显著升高（P＜0.05）；与模型对照组比较，活血宁心解毒方组mLAP、mMPG和mPAP显著降低，且活血宁心解毒方剂量越高，mLAP、mMPG 和 mPAP 越低（P＜0.05）。

表2 各组大鼠血流动力学指标比较（kPa，±s）

表2 各组大鼠血流动力学指标比较（kPa，±s）

组 别 n mLAP空白对照组 10 1.34±0.18模型对照组 10 4.46±0.32*活血宁心解毒方低剂量组 10 3.75±0.27*△活血宁心解毒方中剂量组 10 2.64±0.25*△#活血宁心解毒方高剂量组 10 1.81±0.21△#◇mMPG mPAP 0.97±0.17 2.26±0.51 2.61±0.24* 7.12±0.76*2.09±0.22*△ 5.71±0.65*△1.60±0.21*△# 4.82±0.56*△#1.23±0.19△#◇ 3.01±0.57△#◇

2.4 各组大鼠凝血功能指标比较 见表3。与空白对照组比较，模型对照组大鼠的PV、RCPP及RCAI变化不明显（P＞0.05），WBV 显著升高（P＜0.05）；与模型对照组比较，活血宁心解毒方组大鼠全血黏度显著降低（P＜0.05）。

表3 各组大鼠凝血功能指标比较（±s）

表3 各组大鼠凝血功能指标比较（±s）

组 别 n WBV（mPa·s）空白对照组 10 3.22±0.38模型对照组 10 5.72±0.62*活血宁心解毒方低剂量组 10 4.86±0.57*△活血宁心解毒方中剂量组 10 3.94±0.55*△#活血宁心解毒方高剂量组 10 3.34±0.51△#◇PV（mPa·s）0.97±0.17 1.02±0.21 1.05±0.22 1.03±0.23 1.01±0.20 RCPP（L/L） RCAI（%）3.24±0.75 43.15±2.65 3.41±0.79 48.41±3.24 3.37±0.77 45.17±3.27 3.34±0.76 44.28±2.96 3.21±0.78 45.13±2.57

2.5 各组大鼠氧化应激指标比较 见表4。与空白对照组比较，模型对照组大鼠的SOD和GSH-PX水平明显升高，LPO水平明显降低（P＞0.05）；与模型对照组比较，活血宁心解毒方组大鼠SOD和GSH-PX升高，LPO 降低，且呈剂量依赖性（P＜0.05）。

表4 各组大鼠氧化应激指标比较（±s）

表4 各组大鼠氧化应激指标比较（±s）

组 别 n SOD（IU/mL）空白对照组 10 16.24±5.37模型对照组 10 34.51±6.31*活血宁心解毒方低剂量组 10 41.28±6.42*△活血宁心解毒方中剂量组 10 49.14±6.57*△#活血宁心解毒方高剂量组 10 65.22±7.27△#◇LPO（mmol/L）GSH-PX（μg/L）7.67±0.75 1.21±0.17 5.14±0.63* 0.52±0.13*4.19±0.59*△ 0.65±0.15*△3.71±0.51*△# 0.74±0.16*△#2.32±0.49△#◇ 0.87±0.17△#◇

3 讨 论

缺血性心脏病主要病因是冠状动脉病变，冠状动脉粥样硬化和冠状动脉痉挛导致冠脉血流量突然下降，心肌急性缺血、缺氧而产生心绞痛或心肌梗死，心电图表现出ST段改变［6-7]。中医学认为急性心肌缺相当于“胸痹心痛”，是由正气亏虚、痰浊瘀血、气滞寒凝而引起心脉痹阻不畅，以膻中或左胸部疼痛为主，治宜益气养心、活血解毒［8]。结扎左冠状动脉前降支建立的急性心肌缺血模型大鼠，是评价抗心肌缺血药物疗效最常用模型［9-10]。本研究发现活血宁心解毒方组可减轻炎性细胞浸润、血管扩张，心肌纤维化水肿，心电图ST段抬高值明显减少，说明活血宁心解毒方各药物能够改善大鼠心肌病理改变，显著抑制ST段的异常抬高。

模型大鼠给予不同剂量的活血宁心解毒方灌胃治疗，活血宁心解毒方组mLAP、mMPG和mPAP显著降低，且活血宁心解毒方剂量越高，mLAP、mMPG和mPAP越低，活血宁心解毒方组大鼠全血黏度显著降低，活血宁心解毒方组大鼠SOD和GSH-PX升高，LPO降低，且呈剂量依赖性。大鼠血流动力学和心肌代谢改变与急性心肌缺血密切相关，心肌损伤细胞内酶扩散入血浆，可反映缺血心肌病变，缺氧导致乳酸生成，催化自由基的生成和脂质过氧化反应，加剧缺血心肌的组织损伤及功能障碍。活血宁心解毒方方中三七止血散瘀、消肿定痛，以畅达元气之道路，丹参活血化瘀，芪益气托毒外出，刺五加益气健脾、补肾安神改善植物神经功能紊乱，麦冬养阴清心除烦、益胃生津，甘松开郁理气醒脾；酸枣仁宁心安神、补中益肝，黄连清热解毒、清心除烦，鹿衔草祛风除湿、活血调经，柴胡疏散退热、疏肝解郁、升阳举陷，水蛭活血化瘀，甘草补脾益气，调和药性［11-12]。方中三七、当归、水蛭稳定心肌细胞膜，改善心肌微循环，增加心肌营养及血量，刺五加改善神经系统的功能，有增加心脑血流量，甘松、酸枣仁增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量，改善心肌缺血、提高心肌耐氧能力，黄连抗心律失常，改善心肌缺血，增强心肌收缩力和减慢心率［13-15]。活血宁心解毒全方益气养心、活血解毒，以达心气渐充，心阴得养，气血流畅。

综上所述，活血宁心解毒方可减轻急性心肌缺血模型大鼠炎性细胞浸润、血管扩张、心肌纤维化水肿，逆转心电图、血流动力学、凝血及氧化应激指标，改善急性心肌缺血。

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