不同植物提取物对番茄花叶病毒病的防治效果研究

庞梓辰，穆淑媛，张灿刚

（1.山东省泰安第一中学，山东泰安 271018；2.泰安市泰山林业科学研究院，山东泰安 271000；3.泰安市植物源农药工程技术研究中心，山东泰安 271033）

植物中蕴藏着丰富的抗病毒天然活性物质，是开发抗植物病毒制剂的重要资源[1]。鱼腥草、马齿苋、商陆的次生代谢产物中有抗病毒、抗菌的活性成分，鱼腥草的主要化学成分中含有癸酰乙醛（也叫鱼腥草素）、黄酮类等活性物质[2]；马齿苋的主要成分包括酸类、花色苷类、挥发油、生物碱、蛋白质、氨基酸、多糖和黄酮类等活性物质[3]；商陆主要化学成分有商陆多糖、商陆蛋白、三萜皂甙等活性物质[4]，这些活性成分无毒、无残留、不污染环境、不杀伤天敌、对人畜安全，具有广谱抗菌作用。

番茄花叶病毒病主要表现为叶片花叶，严重时凹凸不平；新叶较小且细长，皱缩、畸形，病株易矮化，花芽分化下降，花、蕾大量脱落，果实少且小，花脸，极大影响产量，减产可达30%以上[5,6]。有研究发现，植物源抗病毒制剂对防治植物病毒病有明显效果[2]，本研究通过超声波高效提取鱼腥草、马齿苋、商陆中次生代谢产物，研制出植物源抗病毒制剂，用于防控番茄花叶病毒病。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器设备

JYT-LC型超声波提取浓缩机组（该机组包括100L超声波提取、夹层蒸汽发生罐、60L芳香油收集罐、60L负压蒸发罐、60L浓缩罐、160L溶剂回收罐组合而成），济宁双和超声设备有限公司生产。

1.1.2 材料

鱼腥草，购于泰安市宏康药店；马齿苋全草、商陆根，采自泰安市徂徕山林场，切片（段），80℃烘干，粉碎过孔径为0.38mm的筛备用。20%病毒A（生产常用抗病毒化学药剂），齐齐哈尔华丰化工有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 植物粗提物的三种提取方法

超声波提取法：将鱼腥草粉、马齿苋全草粉、商陆根，按重量比 1∶1∶1混合均匀，称取混合粉 20kg，进行超声波室温提取，提取条件为超声波频率30kHz、80%乙醇、料液比为1∶15、提取时间15min。提取液过滤，共提取2次，合并滤液，浓缩，定容至3000mL，摇匀备用，定为A提取液。

煎煮法：称取鱼腥草、马齿苋全草、商陆根混合粉20kg，加水 300L，浸泡 30min，水沸后煎 80min，过滤，共煎煮两次，合并滤液，浓缩，定容至3000mL，摇匀备用，定为B提取液。

连续回流提取法：称取鱼腥草、马齿苋全草、商陆根混合粉20kg，加80%乙醇300L，沸后回流80min，过滤，共提取两次，合并滤液，浓缩，定容至3000mL，摇匀备用，定为C提取液。

1.2.2 接种用病毒制备方法

病毒的制备方法是：采感染病毒病的番茄鲜叶，按鲜病叶∶缓冲液 =1∶3（g∶mL）加缓冲液，缓冲液种类为 OPBS，缓冲液的酸碱度pH7。将上述混合体用石英砂碾磨成匀浆，用纱布过滤，摩擦接种。

1.3 防治番茄花叶病毒病试验

1.3.1 田间预防效果试验

2016年5月在泰安市岱岳区房村镇番茄种植园进行试验。当番茄苗出现第一片真叶（破心）时，喷施药剂，每个处理喷施番茄苗100株。之后间隔7d喷一次，连喷3次。药剂处理为A提取液、B提取液、C提取液、20%病毒A（生产常用抗病毒化学药剂）对照、清水对照，共5个处理，药剂使用浓度均为50μg/mL，每个处理3次重复，随机排列。药剂喷施完毕后，接种病毒。接种10d后调查病情。计算病情指数及预防效果。

1.3.2 田间治疗效果试验

当番茄苗第一花序现蕾，接种病毒，接种方法同上。接种48h后喷施药剂，药剂处理和喷施方法同上。每次喷药前以及第3次喷药后第7d后调查病情。

1.4 测量指标与方法

1.4.1 病毒病分级标准

0级—无病症；1级—叶片明显呈花叶或黄化，有疮斑；3级—叶片凹凸不平，变小且畸形；5级—植株形成丛枝，大量落花落蕾；7级—整个植株矮化、果小质劣，果实花脸。

1.4.2 计算方法

式中：CK0—对照区用药前病情指数；

CK1—对照区用药后病情指数；

CL0—处理区用药前病情指数；

CL1—处理区用药后病情指数。

2 结果与分析

2.1 田间预防效果

表1 抗病毒制剂对番茄花叶病毒病的预防效果Table 1 Preventive effect of antiviral agents on tomato virus disease

由表1可以看出，三种提取液对番茄花叶病毒病均有一定的预防效果。A提取液预防效果为87.01%，C提取液次之，预防效果为77.78%，均高于常用抗病毒化学药剂20%病毒A；B提取液的预防效果最差，仅为55.06%，低于20%病毒A。综合分析，超声波提取的A提取液，其成本低、抗病毒效果好，较为理想。

2.2 田间治疗效果

由表2可以看出，三种提取液通过3次使用后，均取得了一定的治疗效果。A提取液具有较好的治疗效果，相对防效为74.36%，显著高于相对防效为50.32%的C提取液，相对防效为43.03%的B提取液，及相对防效为50.36%的对照20%病毒A的治疗效果。综合分析，A提取液使用浓度50μg/mL具有较好的治疗效果。

表2 抗病毒制剂对番茄花叶病毒病的治疗效果Table 2 Treatment effect of antiviral agents on tomato virus disease

3 讨论

植物活性物质提取方法已有许多报道，如煎煮法、酶解法、浸渍法、连续回流法、微波提取法和超声波提取法等[7]，其中，超声波提取法的效率最高。本研究运用三种方法提取鱼腥草、马齿苋、商陆混合提取物，通过提取物对番茄花叶病毒病防治效果的田间对比试验发现，超声波提取液对番茄花叶病毒病具有较好的预防和治疗效果，分别达到87.01%和74.36%，均高于煎煮法提取物、连续回流提取物和常用抗病毒化学药剂20%病毒A的防治效果。说明三种植物的超声波混合提取物均具有较高的抗病毒活性，是天然的抗病毒剂，为植物病毒病的生物防控，以及果蔬的安全生产开辟新的途径。

[1] 张丰强.临床大本草[M].北京∶华夏出版社,2002.

[2] 孙谦,胡中海,孙志高,等.鱼腥草的生物活性及其机理研究进展[J].食品科学,2014,35(23)∶354-358.

[3] 牛广财,朱丹.马齿苋化学成分及其药理作用研究进展[J].安徽农业科学,2005,33(6)∶1090.

[4] 王鹏程,王秋红,赵珊,等.商陆化学成分及药理作用和临床应用研究进展[J].中草药,2014,45(18)∶2722-2731.

[5] 赵璇.番茄病毒病的发生规律及无公害综合治理 [J].河北农业科学,2008,(02)∶71-72.

[6] 郑旭东,许伟东,方振兴,等.露地番茄病毒病无公害综合防治技术[J].农业科技通讯,2011,(06)∶209-211.

[7] 夏日照,廖晓兰.农用植物活性成分提取技术研究进展[J].生物技术通报,2015,31(03)∶49-56.