醋炙法对商陆毒性和药效影响的实验研究

钦建伟 陈 琳

（苏州大学附属第一医院，江苏苏州215006）

醋炙法对商陆毒性和药效影响的实验研究

钦建伟 陈 琳

（苏州大学附属第一医院，江苏苏州215006）

目的：研究商陆醋炙前后毒性和药效的变化情况。方法：按照2010版《中国药典》商陆项下炮制方法——醋炙法对商陆进行炮制，得炮制品醋商陆。给予小鼠单次不同剂量生、醋商陆煎液灌胃，3h后检测小鼠消化系统脏器改变情况。给予家兔不同浓度生商陆混悬液和15.0%醋商陆混悬液滴眼，检测药物对家兔眼结膜的刺激性强度。大鼠制作盐水负荷模型，分别给予同体积生理盐水、氢氯噻嗪和生商陆、醋商陆煎液灌胃后，比较各组5h总尿量。小鼠随机分组后分别灌胃同体积加入墨汁的生理盐水、10%芒硝溶液和生商陆、醋商陆煎液，15min后检测墨汁推进率。结果：单次30倍日用量（35.1g/kg）灌胃生商陆后，小鼠消化系统脏器病变率为66.7%，而醋商陆各剂量组未见明显病变。各剂量生商陆混悬液滴眼后，家兔均表现出充血、水肿、分泌物等眼结膜刺激性，有确切量效关系；等剂量生、醋商陆混悬液滴眼后，生商陆组眼结膜刺激性强于醋商陆组。大鼠灌胃生、醋商陆后，尿量均增加，高剂量醋商陆组尿量显著高于高剂量生商陆组。小鼠灌胃生、醋商陆后小肠墨汁推进率均明显高于生理盐水组，生商陆组明显高于醋商陆组。结论：醋炙法能够降低商陆对黏膜的刺激性，增强利尿功效，缓和泻下作用。

商陆 醋炙 药理学 毒性

商陆系商陆科植物商陆 Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陆Phytolacca americana L.的干燥根，为历版《中国药典》收载品种，具有逐水消肿、通利二便的功效。但由于其药性峻猛、毒副作用较大，故须经严格炮制后方可入药。商陆的炮制工艺以醋炙为主[1]，本研究对商陆醋炙前后的黏膜刺激性以及利尿、泻下作用的变化情况进行了对比研究，以期验证该炮制方法的科学性。

1 实验材料

1.1 药材 生商陆购自安徽省亳州市永刚饮片有限公司（山西产，批号20100122），经南京中医药大学王春根教授鉴定为商陆科植物商陆Phytolacca acinosa Roxb.的干燥块根。取生商陆饮片适量，按2010年版《中国药典》“醋炙法”项下炮制：加入30%醋拌匀，闷润至醋被吸尽，置炒制容器内，120℃炒制30min，取出放凉，得醋商陆[2]。

分别取生商陆、醋商陆饮片100g，加水800mL煎煮30min，过滤。滤渣再加水600mL煎煮30min，过滤。合并滤液，浓缩至100mL，得1g/mL水煎液，作为原液。家兔眼刺激性试验中将生商陆、醋商陆饮片真空干燥并粉碎过200目筛，备用。

1.2 动物 ICR雄性小鼠，体重（20±2）g，SPF级；SD雄性大鼠，体重（200±20）g，SPF级。大鼠小鼠均由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号SCXK（沪）2007-0005。大耳白种家兔，雌雄不限，体重（1.5±0.2）kg，健康，双眼清亮无红肿，由南京市青龙山动物繁殖场提供，许可证号SCXK（苏）2007-0008。

1.3 试剂 生理盐水 （南京小营药业集团有限公司，批号2010031702）；甲醛（分析纯，上海久亿化学试剂有限公司，批号20100301）。

1.4 仪器 BP211D电子天平 （德国Sartorius公司），注射器，兔笼，大鼠代谢笼。

2 实验方法

2.1 生商陆和醋商陆单次不同剂量给药后对小鼠消化道黏膜的刺激作用 ICR小鼠实验前禁食（不禁水）12h，按体重随机分为9组，每组6只，分别为生理盐水组、生商陆水煎液（1.17、11.7、23.4、35.1g/kg，分别相当于临床日用剂量的1、10、20、30倍）组和醋商陆水煎液（1.17、11.7、23.4、35.1g/kg，分别相当于临床日用剂量的1、10、20、30倍）组。各组小鼠灌胃给药1次，生理盐水组灌胃等容量生理盐水，3h后采集各组小鼠食管、胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠等消化系统脏器，生理盐水冲洗，并立即浸泡在4%甲醛溶液中，固定3d。常规取材，脱水，石蜡包埋，制片，HE染色，光学显微镜下阅片，检查有无毒性作用引起上述脏器病变。

2.2 生商陆和醋商陆对家兔眼结膜刺激作用 取生商陆饮片适量，粉碎后过200目筛，用生理盐水分别配成7.5%、10%、12.5%和15%浓度的混悬液，调节pH值至中性，备用。取醋商陆饮片适量，粉碎后过200目筛，用生理盐水配成15%浓度的混悬液，调节pH值至中性，备用。

家兔随机分为生理盐水组、各浓度生品组、15%醋商陆组，每组6只。将兔固定于兔笼内，试验时撩起上下眼睑，使成杯状，将药液分别滴加到兔眼中，每只眼给药50μL，生理盐水组予生理盐水滴眼。给药后，轻轻使上下眼睑被动闭合10s，使药液和眼充分接触，10min后用20mL左右生理盐水冲洗眼睛至眼中无任何异物，随后观察3h内兔眼情况，拍照记录家兔眼的刺激反应情况并打分评定眼刺激性强度，家兔眼结膜刺激性试验评分标准见表1。

2.3 生商陆和醋商陆的利尿作用 将雄性SD大鼠称重后，随即放入已标号的代谢笼中（1只/笼），喂养1～2d，自由饮水，观察大鼠尿量是否稳定。实验前18h禁食，自由饮水。用药前以2.5mL/100g蒸馏水灌胃，收集2h尿量，尿量超过蒸馏水灌胃量40%者为合格动物。

表1 家兔眼结膜刺激试验评分标准

合格的SD大鼠按体重随机分为6组，每组8只，分别为生理盐水组、阳性药组（0.009g/kg氢氯噻嗪）、生商陆和醋商陆低剂量组（相当于临床日用剂量，即0.8g/kg）、生商陆和醋商陆高剂量组（相当于临床日用剂量的2倍，即1.6g/kg）。实验前将各组动物禁食不禁水24h，每组按2.5mL/100g生理盐水灌胃，形成盐水负荷模型。30min后，各给药组均按1mL/100g体重给药，生理盐水组给予同等体积的生理盐水。给药后，立即将大鼠放入代谢笼中，每隔1h计1次尿量，共计5h，收集5h总尿量。[3]335

2.4 生商陆和醋商陆的泻下作用 ICR小鼠按体重随机分为4组，每组10只，分别为生理盐水组、阳性药组（10%芒硝）、生商陆和醋商陆组（相当于临床日用剂量，即0.8g/kg）。实验前将各组药液中均滴入数滴墨汁起指示作用，实验小鼠禁食不禁水24h，每组按0.2mL/10g体重灌胃给药，生理盐水组给予同等体积的生理盐水。15min后脱颈处死，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门、下端至回盲部的肠管，置于托盘上轻轻摆成直线，测量所取肠管首尾长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁在肠内推进距离”。用公式计算墨汁推进百分率，并注意观察各组小鼠小肠容积膨胀程度差异。[3]326

3 实验结果

3.1 生商陆和醋商陆单次不同剂量给药后对小鼠消化道黏膜的刺激性比较 病理切片结果显示，单次大剂量给药后商陆会造成的病变主要位于胃。生商陆35.1g/kg组 （相当于临床日用剂量的 30倍）有4只小鼠出现局部胃黏膜上皮细胞坏死、脱落，可见小灶状出血，病变率为66.7%；生商陆23.4g/kg组（相当于临床日用剂量的 20倍）有 2只小鼠出现局部胃黏膜上皮细胞坏死、脱落，病变率为33.3%；生商陆11.7、1.17g/kg组（分别相当于临床日用剂量的10倍、1倍）未见明显病变。而醋商陆各剂量组均未见明显病变，表明商陆经醋炙后对小鼠胃黏膜的刺激性显著减弱。见图1。

图1 各组大鼠胃组织改变情况（HE染色，×200倍）

3.2 生商陆和醋商陆对家兔眼结膜的刺激性比较 见表2。结果显示，在一定浓度范围内，生商陆混悬液的浓度和对家兔的眼刺激性强度呈现确切的量-效关系，即浓度越高，对兔眼的刺激性越强。浓度达到15%时，对兔眼结膜具有重度刺激性；与15%浓度生商陆混悬液比较，15%浓度醋商陆混悬液对兔眼的刺激性强度显著减弱（P＜0.01）。

3.3 生商陆和醋商陆的利尿作用比较 见表3。结果显示，生商陆和醋商陆低剂量组排尿量未见显著差异，生商陆和醋商陆高剂量组在给药3h后排尿量差异显著（P＜0.05），醋商陆组排尿量显著高于生商陆组，表明商陆经醋炙后其利尿功效增强。

3.4 生商陆和醋商陆泻下作用比较 见表4。结果显示，与生商陆比较，醋商陆对小鼠小肠的推动作用减弱（P＜0.01），即商陆经醋炙后泻下作用缓和。

4 讨论

商陆临床中毒症状主要表现为胃肠道反应，如恶心呕吐、腹痛腹泻，严重者可出现胃肠道糜烂、溃疡及出血等[4]。本研究通过小鼠单次大剂量给药后消化系统脏器病理切片检查可知，这种急性刺激性作用主要作用于胃。本研究结果亦表明，商陆经醋炙后，对动物胃黏膜的刺激性显著减弱。

除了传统的口服中毒外，商陆粉末与眼、鼻和口腔黏膜接触会出现红肿疼痛等局部刺激性反应。本研究亦通过家兔眼结膜刺激性试验考察了商陆醋炙前后的刺激性作用变化，结果表明，商陆经醋炙后，对家兔眼结膜的刺激性显著减弱。

商陆为一味峻下逐水药，功能逐水消肿、通利二便。本研究用大鼠代谢笼试验对同一品种商陆高低剂量组、同一剂量生品商陆和醋炙商陆的利尿作用进行了对比研究，采用小鼠小肠墨汁推进试验对商陆醋炙前后的泻下作用进行了对比研究。结果显示，商陆在一定范围内剂量越高，利尿作用越强，表明商陆的功效之一是利尿。商陆经醋炙后泻下作用有所缓和，利尿作用有所增强。

表2 各组家兔眼结膜刺激性评分比较（±s）

表2 各组家兔眼结膜刺激性评分比较（±s）

注：与生理盐水组比较，**P＜0.01；与7.5%生商陆组比较，▲▲P＜0.01；与15.0%生商陆组比较，##P＜0.01。

得分 平均得分（x ± s）组别 动物数（只）生理盐水组 6 7 . 5 %生商陆组 6 1 0 . 0 %生商陆组 6充血 水肿 分泌物0 0 0 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 3 3 4 1 . 6 7 ± 0 . 4 9**8 1 0 6 4 . 0 0 ± 0 . 1 6**▲▲1 2 . 5 %生商陆组 6 1 5 . 0 %生商陆组 6 1 0 2 0 1 2 7 . 0 0 ± 0 . 0 9**▲▲1 3 3 0 1 2 9 . 1 7 ± 0 . 0 8**▲▲1 5 . 0 %醋商陆组 6 1 0 1 5 7 5 . 3 3 ± 0 . 1 0**##

表3 各组大鼠给药后不同时段尿量比较（±s）

表3 各组大鼠给药后不同时段尿量比较（±s）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与等剂量生商陆组比较，▲P＜0.05；与同一品种低剂量组比较，●P＜0.05，●●P＜0.01。

0～5 h剂量（g / k g）组别 动物数（只）生理盐水组 8氢氯噻嗪组 8给药后尿量（m L）0～2 h 0～3 h 0～4 h 0 . 0 0 9 3 . 8 5 ± 0 . 9 7**0～1 h - 1 . 7 8 ± 0 . 3 7 2 . 8 3 ± 0 . 5 0 3 . 1 0 ± 0 . 3 4 3 . 2 0 ± 0 . 4 0 3 . 2 3 ± 0 . 3 9 5 . 0 8 ± 0 . 8 6**6 . 0 3 ± 0 . 7 8**6 . 9 0 ± 1 . 3 4**7 . 0 5 ± 1 . 3 4**生商陆低剂量组 8生商陆高剂量组 8 0 . 8 2 . 3 2 ± 0 . 4 3*3 . 4 8 ± 0 . 4 1*4 . 0 8 ± 0 . 3 4**4 . 2 7 ± 0 . 3 0**4 . 2 7 ± 0 . 3 0**1 . 6 2 . 7 5 ± 0 . 4 8**4 . 2 2 ± 0 . 4 4**●4 . 7 0 ± 0 . 2 8**●4 . 9 5 ± 0 . 3 0**●5 . 0 3 ± 0 . 2 4**●醋商陆低剂量组 8醋商陆高剂量组 8 0 . 8 2 . 2 3 ± 0 . 4 0 3 . 5 2 ± 0 . 4 0*4 . 0 7 ± 0 . 3 2**4 . 1 5 ± 0 . 2 7**4 . 1 8 ± 0 . 2 8**1 . 6 2 . 9 7 ± 0 . 3 7**●4 . 3 8 ± 0 . 3 7**●5 . 0 3 ± 0 . 1 9**▲●●5 . 3 3 ± 0 . 2 4**▲●●5 . 3 5 ± 0 . 2 2**▲●●

表4 各组小鼠小肠墨汁推进运动情况与肠容积变化情况比较（±s）

表4 各组小鼠小肠墨汁推进运动情况与肠容积变化情况比较（±s）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与生商陆组比较，▲▲P＜0.01。

组别 动物数（只）生理盐水组 1 0 1 0 %芒硝组 1 0生商陆组 1 0醋商陆组 1 0小肠总长度（c m）4 4 . 0 8 ± 1 . 9 8墨汁推进距离（c m） 墨汁推进率（%）肠容积变化2 5 . 7 9 ± 1 . 1 1 5 8 . 6 2 ± 3 . 6 6无变化4 3 . 8 6 ± 2 . 4 7 4 4 . 7 0 ± 2 . 3 0 3 2 . 4 6 ± 2 . 0 3 7 2 . 6 1 ± 2 . 6 9**稍膨胀4 3 . 6 9 ± 2 . 8 8 2 7 . 7 0 ± 2 . 7 1 6 3 . 3 6 ± 3 . 9 5*▲▲稍膨胀3 1 . 8 9 ± 2 . 1 7 7 2 . 7 2 ± 3 . 0 8**膨胀

综上，醋炙法是商陆的传统炮制方法，本研究结果表明，商陆经醋炙后刺激性降低，泻下作用缓和，逐水作用增强，即达到了减毒增效的目的，此结论验证了商陆传统炮制法的科学性。

[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：中国医药科技出版社，2010：304

[2] 陈琳，吴皓，王媚，等.醋商陆饮片的炮制工艺研究.中草药，2011，42（6）：1101

[3] 陈奇.中药药理研究方法学.2版.北京：人民卫生出版社，2006

[4] 李一飞，姚广涛.商陆药理作用及毒性研究进展.中国实验方剂学杂志，2011，17（13）：248

编辑：吴 宁

R282.71

A

1672-397X（2015）01-0077-03

钦建伟（1975-），男，本科学历，主管中药师，主要从事中药药理研究。qinjianwei8@126.com

2014-09-15