微生态制剂“零耗氧活性菌”在水产养殖中的应用试验

田海军

水产动物生活在水环境中，其体内微生物组成除了受自身机体内在因素的影响，还易随着来自外界环境与食物中的微生物入侵而发生改变。为了有效地对水产动物的疾病进行防治，可以采用外界添加益生菌的手段实现改善水产动物生存的环境，平衡体内的微生物群落的组成，增强水产动物对病原菌的抵抗能力，提高养殖成功率的目的。

微生态制剂“零耗氧活性菌”，由酵母细胞壁、生物多糖、生物抗菌肽、生物碱、苷类、蒽醌类及其还原衍生物和多种活性肽组成，具有提高免疫力、提高消化率、杀灭细菌真菌和原虫、抵制病毒侵扰等作用，是生物提高非特异性免疫的不可缺少的重要组成成分。与抗生素相比，具有高效、无耐药性、无污染、无毒副作用等优点，符合绿色环保的要求，是理想的抗生素替代品。“零耗氧活性菌”具有活性高、分子量小、热稳定性好、水溶性好和生物利用度高等特点。实验通过在饲料中添加“零耗氧活性菌”，比较对鲈鱼、鳜鱼、白鲢、草鱼、花鲢和青虾的日平均增重、发病率、死亡率、饵料系数等生产性能影响，为“零耗氧活性菌”在水产养殖中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

试验用“零耗氧活性菌”由无锡华海生物科技有限公司提供，批号苏饲添字（2015）251015，阴凉、干燥处贮藏。

实验用菌株：柱状屈桡杆菌、溶藻弧菌和温和气单胞菌均由中科院水生生物研究所生物制品工程技术研究中心购买。

1.2 时间和地点

试验地点：河南省信阳市燕尾岛某养殖场。

试验时间：2015年3月25日-2015年4月25日。

1.3 “零耗氧活性菌”最小抑菌浓度的测定

采用微量稀释法进行测定。把处于对数生长期OD600≈0.5（细菌计数约106）的指示菌用LB培养液稀释到OD600≈0.05，分别接种到96孔细胞培养板上，每孔90μL。将零耗氧活性菌用pH值6.0的0.1mol/L PBS倍比稀释。各取10μL分别加入培养孔中，混匀，每组重复3个孔。设加LB培养液为阴性对照，接种细菌的为阳性对照。置37℃培养箱孵育12h后取出，用自动酶标仪测量培养液的OD600值，将完全抑制菌体生长的最低蛋白浓度确定为最小抑菌浓度（MIC）。

表1 “零耗氧活性菌”对鲈鱼、鳜鱼生产性能的影响

表2 “零耗氧活性菌”对白鲢、草鱼和花鲢鱼生产性能的影响

1.4 实验动物的选择与养殖

鲈鱼、鳜鱼采用网箱养殖，全冰鲜饲料喂养。实验组按每吨饲料添加零耗氧活性菌1kg，饲养30d，每天抽样检查。对照组饲喂不添加任何添加物的冰鲜饲料。

白鲢、草鱼、花鲢采用池塘养殖方式，水深1.2～1.5m，每亩投入鱼苗10万尾，基础饵料为黄豆浆，实验组按每吨饲料添加“零耗氧活性菌”1kg，饲养25d，每天抽样检查。对照组饲喂不添加任何药物。

青虾苗是由南湾水库直接捕捞的抱仔青虾所繁育的虾苗，放养规格7000尾/kg，每口池放养数量约6万尾，重量为8.6kg。每日喂料2次，基础饲料为：豆粉、鱼粉、皮糠、次粉、贝壳粉、矿物质、螺旋藻混合物。实验组添加抗菌肽，按每吨饲料添加抗菌肽1kg。对照组饲喂不添加任何添加物的基础饲料。

1.5 饲养管理

坚持每天2次巡池，检查实验鱼虾摄食情况，及时调整日投饵量，严格检查排水过滤设施是否破损，及时捞出残饵杂物、多余水草，捕捉蛙、蛇等敌害生物。保证微流水畅通、有充足的氧气。定期使用生石灰进行全池泼洒消毒，生石灰用量为每口池每次7.5 kg。

1.6 生产性能指标测定

每天采集数据至实验结束，统计成活率、亩平均产量、平均个体重，计算饵料报酬等，并对发病率进行λ2卡方显著性分析。

表3 “零耗氧活性菌”对青虾生产性能的影响

2 结果

2.1 “零耗氧活性菌”的最小抑菌浓度

通过微量稀释法测得“零耗氧活性菌”对柱状屈桡杆菌、溶藻弧菌和温和气单胞菌的MIC分别为0.78、3.12和6.25μg/mL。

2.2 鲈鱼和鳜鱼养殖结果

饲养30d，“零耗氧活性菌”实验组鱼苗色泽鲜艳，大小均一。鲈鱼实验组的发病率为15.1%，对照组为26.3%，下降了11.2%。鳜鱼实验组的发病率为17.6%，对照组为20.4%，下降了2.8%。可见“零耗氧活性菌”显著或极显著降低鳜鱼和鲈鱼的发病率（P〈0.05或P〈0.01）。实验组鲈鱼的日增重比对照组高0.14g/d，鳜鱼的日增重比对照组高0.17g/d，表现出较好的生产性能（表1）。

2.3 白鲢、草鱼和花鲢鱼养殖结果

表2可以看出应用“零耗氧活性菌”后，白鲢的成活率由40%提高至48.77%，草鱼的成活率由16.8%提高至22.75%，花鲢的成活率由53.5%提高至68.01%。各实验组和对照组比较分别提高了21.93%、35.42%和24.12%。λ2卡方分析表明，“零耗氧活性菌”极显著提高白鲢、草鱼和花鲢的成活率（P〈0.01）。草鱼和花鲢的饵料系数分别降低18.7%和22.9%，每亩平均产量也明显提高18.42%、19.98%、23.23%。

2.4 青虾养殖结果

由表3可知，至实验期结束，实验组青虾平均增长了2.3cm，对照组为1.4 cm。实验组的平均增长是对照组的1.64 倍，比对照组提高了64.29%。实验组平均产量101 kg/亩，对照组平均产量58.5 kg/亩，实验组平均产量是对照组的1.73 倍，比对照组提高72.65%。

3 讨论

微生态制剂“零耗氧活性菌”可以使细菌的细胞膜去极化或者形成“孔洞”，造成细胞内容物外流或者肽分子进入细胞内部与DNA、RNA等形成靶向作用，进而杀死细菌。

体外抑菌实验结果显示，“零耗氧活性菌”对水产养殖中常见的病原菌如柱状屈桡杆菌、溶藻弧菌和温和气单胞菌敏感，最小抑菌菌浓度分别为0.78、3.12和6.25μg/mL。添加到饲料中“零耗氧活性菌”仍具有显著的抗菌活性，可以显著提高鱼苗的抗病能力。将“零耗氧活性菌”用于鱼苗培育阶段，平均成活率可以提高10%以上。同时也发现，“零耗氧活性菌”也能明显提高鱼、虾的生长速度及饲料利用效率，日增重明显增加，饵料报酬亦增加。

“零耗氧活性菌” 除具有抗菌、杀菌作用，对病毒、真菌、寄生虫等其他病原微生物具有较强的抑制作用，还能与宿主体内某些阳离子蛋白、溶菌酶协同作用，增强其抗菌效应。另外，“零耗氧活性菌”生物学活性稳定，在高离子强度和酸、碱环境中或100℃加热10min时仍具有杀菌抑菌作用。实验用“零耗氧活性菌”可耐高温（150℃以上），能耐受饲料制粒时的高温。同时，“零耗氧活性菌”是一种无毒、无害、绿色环保的产品，还具有不易出现耐药性突变、分子量小、热稳定性好、水溶性好、作用迅速等特点。