低密度脂蛋白受体基因表达与高胆固醇血症的相关性分析

黎运西 冯晨浩 严达尊 谢景齐 杨杰明 蔡雪

低密度脂蛋白受体（LDLR）是一种细胞介导低密度脂蛋白的摄取和代谢的一类跨膜蛋白［1］。迄今共发现有6类LDLR家族成员：LDLR、极低密度脂蛋白受体（VLDLR）、卵细胞卵黄生成受体（OVR）、低密度脂蛋白受体相关蛋白（LRP）、肾炎抗原（Gp330）、Megalin。其中LDLR、VLDLR、OVR和LRP主要结合含有Apo B、Apo E的脂蛋白，参与胆固醇、甘油三酯的代谢，与脂蛋白代谢密切相关，在动物体内蛋白吸收、转运和沉积的代谢中发挥重要功能。本文探讨人LDLR基因表达水平在高胆固醇血症患者中的变化情况及其与血脂水平的相关性，为该病预防和治疗提供理论依据。

1 临床资料

1.1 一般资料 选择2016年1月至12月本院高胆固醇血症患者24例（观察组），男13例，女11例；平均年龄（60±12）岁。纳入标准：血清胆固醇含量＞5.72mmol/L、无免疫性疾病、心肌缺血、肝、肾、甲状腺功能障碍和癌症、无服用激素类、免疫抑制类药物史者。另选择本院体检健康者23例为对照组。男10例，女13例；平均年龄（53±12）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法 （1）生物学检测：用希森美康XN1000血球分析仪检测其白细胞及中性粒细胞。用贝克曼5821全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血清载脂蛋白A1（Apo A1）、血清载脂蛋白B（Apo B）、C反应蛋白（CRP）、血糖（GLU）等。（2）LDLR基因的相对表达量检测：以含EDTA-K2抗凝全血为原料，使用RNAprep Pure血液总RNA提取试剂盒（离心柱型）提取RNA，使用FastQuant cDNA第一链合成试剂盒反转录成cDNA。用实时荧光定量多聚酶链反应（FQ-PCR）检测LDLR基因表达水平，应用中山大学达安基因所提供的核酸扩增仪，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶为内参系统，采用25μl的以下反应体系进行扩增：2×SuperReal PreMix Plus12.5μl、正向引物（10μM）1μl、反向引物（10μM）1μ、lcDNA 模板 2μl、50×ROX Reference Dye 2.5μl、RNanse-free ddH2O 6μl。扩增模式：95℃孵育15min预变性，激活大部分HotStar Taq DNA聚合酶，95℃条件下变性10s、60℃退火20s、72℃延伸31s为一个循环进行40个循环扩增，并在每一个循环72℃延伸末期进行荧光信号采集。40个循环后通过软件分析获取CT值，并用公式算出基因模板的相对表达量。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计数资料采用χ2检验。正态分布计量资料以（x±s）表示，用t检验，非正态分布计量资料以中位数和四分位数表示，用Wilcoxon秩和检验。正态变量用pearson相关分析，非正态变量则用Spearman等级相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组各检测项目比较 与对照组比较，高胆固醇血症患者的白细胞（WBC）计数、中性粒细胞计数（N）、GLU、TC、TG、LDL-C、ApoB、LDLR基因相对表达量显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。见表 1。

表1 两组各检测项目比较（x±s）

2.2 高胆固醇血症患者血脂水平与LDLR水平的相关性 高胆固醇血症患者TG水平、ApoA1水平与LDLR基因的相对表达量呈正相关（P＜0.05）。见表2。

表2 观察组血脂与LDLR水平的相关性

3 讨论

本资料结果表明，高胆固醇血症患者的TC、TG、LDL-C、ApoB升高可能与LDLR基因相对表达量改变有关。有文献报道，新型降血脂药通过作用于LDLR而发挥降血脂作用［2］，提示可通过改变LDLR基因表达水平的方式进行血脂调节。另有文献报道，严重动脉粥样硬化和高胆固醇血症的小鼠缺乏黑皮素4型受体和低密度脂蛋白受体两种物质［3］，表明其可能机制为低密度脂蛋白受体水平的下降负反馈刺激低密度脂蛋白受体基因的表达升高。在俄罗斯，家族性高胆固醇血症由低密度脂蛋白受体的c.1327 T＞C（p.W433R）突变引起［4］，而中国人家族性高胆固醇血症患者的表征是低密度脂蛋白受体基因特有的w483x突变或前蛋白转化酶枯草溶菌素9-resistant r410s基因突变［5-6］。

本资料结果显示，高胆固醇血症患者的白细胞及中性粒细胞水平显著升高，表明高胆固醇血症患者出现与动脉粥样硬化相关的血管炎症状态。高胆固醇血症患者LDLR基因的mRNA水平的上调与TG及ApoA1水平均呈正相关关系。其机制可能为TG水平升高和低密度脂蛋白受体水平的下降负反馈刺激低密度脂蛋白受体基因的mRNA水平的上调，协同ApoA1水平的上调共同调节TC和LDL-C水平。

总之，高胆固醇血症患者LDLR基因的mRNA水平的升高与血脂水平密切相关，LDLR基因表达参与高胆固醇血症降脂作用。

［1］ 李宏,袁施彬.低密度脂蛋白在脂蛋白代谢中的作用及其调控.中国畜牧杂志,2010,46(19):72-76.

［2］ Scharnagl H, M arz W. New lipid-lowering agents acting on LDL receptors.Curr Top Med Chem, 2005, 5 (3):233-242.

［3］ Lede V,Franke C,Meusel A,et al. Severe Atherosclerosis and Hypercholesterolemia in Mice Lacking Both the Melanocortin Type 4 Receptor and Low Density Lipoprotein Receptor. PLoS One, 2016,11(12): e0167888.

［4］ Korneva VA,Kuznetsova TY, Murtazina RZ,et al. The Familial Hypercholesterolemia Caused by a Novel Human Low Density Lipoprotein Receptor Gene Mutation c.1327 T＞C (p.W433R).Kardiologiia, 2017,57(2):12-16.

［5］ Jiang L,Sun LY, Pan XD,et al. Characterization of the unique Chinese W483X mutation in the low-density lipoproteinreceptor gene in young patients with homozygous familial hypercholesterolemia. J Clin Lipidol, 2016,10(3):538-546.

［6］ Susan-Resiga D,Girard E,Kiss RS,et al. The Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9-resistant R410S Low Density Lipoprotein Receptor Mutation. J Biol Chem, 2017,292,(5):1573-1590.