血清葡萄糖-6-磷酸异构酶测定在类风湿关节炎活动性判断中的应用价值

肖 莉

(新乡市中心医院检验科,河南 新乡 453000)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis ,RA)是一种以主要累及外周关节及慢性对称性、侵蚀性滑膜炎为特点的系统性炎性疾病，表现为关节受累、肿胀、免疫功能紊乱，常呈反复、持续性发作特征[1]。RA的早期诊断多依据患者临床症状及类风湿因子(rheumatoid factor，RF)水平的变化，但张新刚等[2]研究发现，RA、其他类风湿病变及部分健康老年人群血清中均可检出RF，因此，认为其特异性较低。另外，有报道指出，RA患者体内存在的多种自身抗原、抗体均与RA发病及进展有紧密联系[3-4]。葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase，GPI)是与自身免疫性疾病发病有关的糖酵解酶，封昱辰等[5]研究发现，在T细胞受体转基因小鼠模型中，GPI可诱导关节炎症发生。也有研究报道，RA患者的血清、关节液内均可检出GPI抗原高表达[6]。基于此，本研究对RA、其他风湿病患者及正常健康人血清GPI水平进行检测，探讨血清GPI在RA活动性评估中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2015年1月至2017年1月新乡市中心医院收治的80例RA患者(RA组)，均符合美国风湿病学会制定的RA诊断标准[7]；其中男33例，女47例；年龄21～79(52.6±10.5)岁；处于活动期48例，非活动期32例。选择同期收治的20例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)、10例强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)患者作为风湿病对照组，其中男11例，女19例；年龄22～76(49.9±11.6)岁；均符合美国风湿病学会修订的SLE、AS分类标准[8]。选择同期体检健康者30例作为正常对照组，均无慢性关节炎病史，心、肝、肾、肺功能正常；其中男12例，女18例；年龄21～78(50.1±10.9)岁。3组受试者的性别、年龄比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2RA活动度评价标准(1)关节肿胀数目超过6个；(2)关节压痛数目超过6个；(3)红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)≥30 mm·h-1；(4)晨僵时间超过45 min；(5)C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)超过正常上限的1.5倍。RA活动期判断标准：存在(1)+(2)，同时伴(3)、(4)、(5)中的任意2项；活动度低或不活动(非活动期)判断标准：不同时满足(1)+(2)或仅伴(3)、(4)、(5)中任1项。

1.3主要试剂及仪器GPI酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，GPI抗原标准品购自上海加北试剂公司；Multiskan FC型酶标仪购自赛默飞巨尔上海仪器有限公司，水平离心机购自上海医疗仪器三厂。

1.4血清GPI水平检测入院次日采集所有对象空腹肘静脉血4 mL，室温静置2 h，3 000 r·min-1离心15 min，分离血清，-70 ℃低温保存待测，采用ELISA法检测GPI水平，严格参照试剂盒使用说明进行操作。CPI测定：孔板设GPI标准品5孔，其余加血清样本100 μL，37 ℃室温静置1 h，洗涤液洗涤5次，干燥，加标记抗体100 μL，37 ℃静置，持续 1 h，洗涤液洗涤5次，干燥，加显色液100 μL，室温避光孵育 15 min，加终止液50 μL，采用酶标仪测各孔吸光度值。

2 结果

2.1各组受试者血清GPI水平比较结果见表1。RA组患者血清GPI水平高于风湿病对照组与正常对照组，风湿病对照组患者血清GPI高于正常对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。RA组活动期患者GPI水平高于RA组非活动期患者、正常对照组与风湿病对照组(包括SLE和AS患者)(P<0.05);RA组非活动期患者GPI高于正常对照组和风湿病对照组(包括SLE和AS患者)(P<0.05)。

表1各组受试者血清GPI水平比较

组别nGPI/(mg·L-1)正常对照组300.41±0.13ab风湿病对照组300.56±0.17ab SLE200.63±0.15ab AS100.45±0.19abRA组802.08±0.41 活动期483.11±0.36 非活动期320.91±0.25b

注：与RA组比较aP<0.05；与RA活动期比较bP<0.05；与RA非活动期比较dP<0.05。

2.2GPI诊断RA最佳临界值及ROC曲线分析GPI诊断RA ROC曲线下面积为0.735，最佳临界值为0.73 mg·L-1，当GPI为0.73 mg·L-1时，GPI诊断RA的敏感度为79.0%，特异度为64.5%，见图1。

图1GPI诊断RAROC曲线

Fig.1ROCcurveofGPIinthediagnosisofRA

2.3GPI与RA活动性相关性分析GPI与RA活动性呈正相关(r=0.723，P<0.05)。

3 讨论

RA是由免疫功能紊乱诱导的自身免疫性疾病，其致残率与病死率高。有报道显示，未进行干预的RA患者2 a内即可出现不可逆骨关节破坏，严重影响其生活质量[9]。目前尚未完全明确其发病机制，既往研究认为，自身抗原引起的促炎性辅助性T细胞1(helper T cell,Th1)活化是引起RA发病的主要原因[10]。沈宝岩等[11]研究发现，RF多种自身抗原及抗体均在RA发病中起重要作用。抗原进入人体后被巨噬细胞吞噬，经消化后与细胞膜结合形成复合物，被T细胞受体识别、活化后，分泌大量生长因子、细胞因子，活化B淋巴细胞，导致免疫球蛋白水平上调，引起RF及其他部分抗体浓度上升，诱导关节产生炎症反应，造成关节功能破坏。

但是，目前尚未明确引起RA发病的初始抗原，对RA活动度的诊断多依靠血清学指标、影像学指标及临床症状等，但对RA严重程度及预后评估均存在一定的缺陷[12]。GPI属磷酸葡萄糖异构酶，是关节腔内催化6-磷酸葡萄糖转化为6-磷酸果糖的关键酶，可诱导髓样细胞分化为单核细胞，促进B细胞分化为浆细胞[13]。近年来发现其与自身免疫性疾病的发病存在一定的联系[14]。首先，可溶性GPI可与GPI抗体结合，沉积于血管内皮细胞壁，经由Fc受体介导，激活补体诱导关节炎症；其次，GPI与抗GPI抗体结合，直接附着于内皮细胞表层，促使炎症细胞迁移至关节局部，同时，二者形成的免疫复合物可诱导大量炎症因子分泌，加重关节炎症反应。姜国平等[15]发现，GPI可调控基质金属蛋白酶表达，导致血管样滑膜增殖，引起软骨降解，导致骨破坏。有研究者发现，在T细胞受体转基因小鼠中，被动转移抗GPI自身抗体可引起关节炎，同时GPI与抗GPI自身抗体结合可形成免疫复合物，加重关节炎症[16]。也有临床研究显示，RA高活动性患者血清GPI水平高于低活动性患者，认为GPI水平与RA活动性呈正相关[17]。但对其他风湿病与类风湿关节炎GPI水平的差异及GPI与RA病情进展的关系尚少见报道。本研究选取其他风湿病、正常健康人作为对照，结果发现，RA患者血清GPI水平明显高于其他风湿病患者及正常健康人；同时，RA活动期患者GPI水平高于非活动期RA患者。同时进行ROC曲线分析发现，当GPI为0.73 mg·L-1时，GPI诊断RA的敏感度为79.0%，特异度为64.5%，明显高于王梦涛等[18]报道的常规血清学指标诊断结果，提示GPI对RA诊断有较高的价值。此外，相关性分析结果显示，CPI水平与RA活动度呈正相关，动态监测GPI有助于RA病情评估。另外，GPI诊断RA有较高的敏感度及特异性，表明GPI抗原检测可能成为RA诊断的新标志物。

综上所述，RA患者血清GPI水平高，且其水平变化与疾病活动度呈正相关，可作为疾病严重程度的预测依据。

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