云南10种花的抗肿瘤活性研究

云南中医学院中药学院，云南 昆明 650500

在《本草纲目》中，花类药物至少在80种以上，约占植物类药物的1/10以上[1]。花类质地轻灵[2]，花类药物药性较为平和，副作用小，是各名家的常用药物[3-11]，在妇科疾病中应用甚广。恶性肿瘤是严重威胁人类健康和生命的疾病，抗肿瘤药物长春花碱由夹竹桃科植物长春花中提取而来。云南鲜花四季盛开，花朵品质高、产量大[12]。笔者对云南常见的花朵进行抗肿瘤活性筛选，为进一步开发利用“云花”、“云药”提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞、试剂和仪器 乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞购自中国科学院昆明动物研究所。所有花朵采集自云南中医学院呈贡校区和昆明医科大学呈贡校区。乙醇(天津市大茂化学试剂厂)，三氧化二砷(云南文山金驰砒霜有限公司)。RPMI1640培养液(美国Hyclone公司)；胎牛血清(兰州百灵生物技术有限公司)；MTS一步法细胞活力检测试剂盒(美国Promega公司)。电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械有限公司)；SK3300LH 型超声清洗机(上海科导超声仪器有限公司)；CO2培养箱(美国Thermo公司)；全自动酶标仪(美国Bio-Rad公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 样品制备 采集茼蒿菊、桂花、凤仙、蜀葵、牵牛、葱莲、百日菊、叶子花、大丽花、杜鹃等云南常见的花朵。50℃烘干，干燥花朵粉碎后浸泡在10倍量的90%乙醇溶液中过夜，过滤后，将滤渣超声提取，重复提取两次，滤液合并后浓缩，得到样品。

1.2.2 活性测试 取对数生长期的细胞接种于96孔板，每孔1×103个细胞。置CO2培养箱中37℃孵育24 h后加入样品。试验组用DMSO溶解，96孔板中DMSO的浓度为千分之一；阴性对照组加入含百分之一DMSO的培养液10 μL，DMSO终浓度为千分之一；阳性对照组加入5 μL五十分之一DMSO的培养液与5 μL三氧化二砷溶液，三氧化二砷溶液终浓度为0.5 mg/L；每组设6复孔，每个实验分别重复3次。放入37℃ CO2培养箱中。48 h后加入20 μL MTS溶液，37℃ CO2培养箱中继续孵育2 h，用全自动酶标仪在490 nm测定吸光度(A)。在测试十种花对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用的过程中，试验组花朵提取物的浓度均为20 mg/L。进一步测试葱莲花对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制作用时，试验组葱莲提取物的浓度为20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L。

2 结果

2.1 10种花对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用 采集了云南常见的10种花朵，分别为茼蒿菊、桂花、凤仙、蜀葵、牵牛、葱莲、百日菊、叶子花、大丽花、杜鹃等。将这10种花朵的提取物作为试验组，测试其对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制活性(图1)。其中，葱莲的抑制率(43.07±4.52%)与阳性对照的抑制率(47.62±3.24%)相近。

2.2 葱莲对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制作用 为了进一步探索葱莲的抗肿瘤活性，考察了葱莲提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制作用(图2)。试验结果显示，葱莲提取物的浓度为20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制率分别为(43.06±1.59)%、(30.20±3.93)%、(2.29±2.12)%；对肺癌A549细胞的抑制率分别为(56.96±0.48)%、(13.85±1.52)%、(0.36±2.71)%;增殖抑制作用呈现量效关系。

3 讨论

药物是治疗恶性肿瘤的重要方法之一，抗肿瘤药物的研究与开发已进入一个崭新的时代[13]。目前应用的很多抗肿瘤药物的副作用较大，而花类药物药性较为平和[2]，从花中可能筛选到副作用较小的抗肿瘤药物。笔者采集了云南常见的10种花朵，将其提取物进行抗肿瘤活性筛选。大部分花朵对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖无抑制作用，而令人欣喜的是其中葱莲花的提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制活性较好，与阳性对照三氧化二砷抑制率相当，并且呈剂量效应关系。

葱莲(Zephyranthescandida(Lindl.)Herb.)，又名玉帘、葱兰等，多年生草本植物，在云南各处有种植。有平肝熄风、散热解毒的功能；用于小儿急惊风、癫痫；外用于痈疮红肿[14]。杨简赛等从葱莲鳞茎中分离得到6个化合物[15]，Zengwei Luo等[16]从葱莲整株植物中提取分离到具有抗肿瘤活性的生物碱，尚无对葱莲的花朵进行化学成分及药理活性的相关报道。笔者对葱莲花朵进行抗肿瘤活性测试，提取物浓度为4 mg/L即显示出显著的抗肿瘤活性，并有剂量效应关系。为葱莲在抗肿瘤药物的开发提供了依据。

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