浙南地区血液核酸集中化检测筛查数据回顾性分析

黄国永 张锋 林碧 蔡淑锋 朱紫苗 刘燕飞 叶峥嵘

325001 温州市中心血站

血液核酸检测(nucleic acid test, NAT)作为一种新的血液筛查技术，能有效弥补血清学检测窗口期长、病毒变异、隐匿性感染、免疫静默等造成的漏检问题。有资料显示[1-3]，在目前ELISA检测的水平下，通过增加核酸检测，可以将乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV-1，HIV-2)平均窗口期由50、72、22 d缩短至25、59、11 d。因此，核酸扩增检测技术是保障血液安全的有效措施，是推进血液筛查技术不断完善的有效手段。欧美等发达国家于上世纪末就将核酸检测纳入到常规血液筛查中并率先实现了集中化检测。浙江省于2016年在全国率先开展血液核酸区域集中化检测，温州市中心血站承担了温州、台州和丽水3地(浙南地区)的血液核酸检测工作。本文通过对浙南地区179 369人次无偿献血者血液标本血清学和核酸筛查数据的回顾性分析，探讨核酸检测是否能有效弥补血清学检测的漏检，保障血液的安全。

1 材料与方法

1.1标本来源选取温州、台州、丽水2016年1～12月自愿无偿献血179 369人次，献血前经健康征询、一般检查以及初筛检测合格。留取样本于带分离胶的EDTA-K2抗凝真空采血管中，用于核酸检测。

1.2仪器和试剂

1.2.1 仪器：HAMILTON Microlab STAR自动混样仪、Cobas Ampliprep核酸分离纯化提取仪、Cobas TaqMan扩增检测仪(罗氏诊断产品有限公司)；ChiTaS BSS1200核酸提取分析仪(上海浩源生物科技有限公司)、ABI 7500基因扩增仪(美国ABI公司)。

1.2.2 核酸检测试剂：罗氏诊断产品有限公司，批号193607、203640、210761、219656；上海浩源生物科技有限公司，批号 MF20160101、MF20160103。

1.3方法

1.3.1 筛查策略：HIV、HBV、HCV感染性标志物采用2遍血清学检测和1遍核酸检测，采用血清学、核酸检测同步进行以及先进行血清学检测，剔除血清学阳性样本，再进行核酸检测两种筛查策略相结合的方式。

1.3.2 血清学检测：采用2种不同厂家试剂进行检测，2种试剂均有反应性，报告血清学检测双试剂阳性；2种试剂均无反应性，报告血清学检测阴性；任一试剂有反应性，进行双孔复试，双孔复试均有反应性或单孔有反应性均报告血清学检测单试剂阳性。

1.3.3 核酸检测：先进行6或8人份联合HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA混样检测，混样检测无反应性，报告核酸检测阴性；混样检测有反应性，进行单人份拆分检测，拆分检测无反应性，报告核酸检测阴性，拆分检测有反应性，报告核酸检测阳性，给出阳性项目及CT值。罗氏核酸检测分析系统为常规检测，浩源核酸检测分析系统为应急检测。

2 结果

2.1标本检测量完成核酸标本检测179 369人次，其中温州地区92 962人次，台州地区52 280人次，丽水地区34 127人次。其中罗氏分析系统检测数162 209人次，浩源分析系统检测数17 160人次(仅于2016年1～3月应急检测)，各月标本检测量详见图1。

图1 浙南地区2016年各月核酸标本检测量Fig.1 Numbers of nucleic acid specimens each month in 2016 in south Zhejiang province

2.2NAT阳性率全年共检出259例ELISA-/NAT+样本，阳性率为0.14%。其中HBV-DNA+255例，HCV-RNA+5例，其中1例HBV-DNA重HCV-RNA+。各地区NAT阳性率见图2。

图2 浙南地区2016年核酸检测检测阳性率Fig.2 The positive rate of the nucleicacid tests in south Zhejiang province

2.3混检阳性率罗氏核酸检测分析系统全年完成有效pooling数27 445个，387个pooling混检阳性，混检阳性率为1.40%。浩源核酸检测分析系统全年完成有效pooling数2 210个，36个pooling混检阳性，混检阳性率为1.63%。

2.4拆分阳性率罗氏核酸检测分析系统全年混检阳性pooling数387个，拆分阳性数235个，拆分阳性率为60.72%。浩源核酸检测分析系统全年混检阳性pooling数36个，拆分阳性数15个，拆分阳性率为41.67%。

3 讨论

NAT已成为避免血清学漏检的有效手段[4-5]，但是NAT设备价格昂贵、试剂成本高、实验室环境和人员要求苛刻，制约了该项技术在基层血站的推广。通过区域性集中化检测模式，在全省范围内设立几个有能力开展集中化检测的实验室委托其检测，可有效提升血液筛查效率、提高血站管理水平、提升血液检测质量，同时有利于促进血液检测新技术的引进[6]。

血清学检测由于方法学本身的局限，已不能满足人们对血液安全的要求。核酸扩增检测技术可以弥补血清学检测的不足，有效降低输血相关传染性疾病的传播风险，在采供血机构正逐步推广并体现优势。从浙南地区全年179 369人次血清学、核酸联合筛查数据看，采供血机构在现有的2遍ELISA检测过程中，如果不开展NAT检测，将会使这部分病毒阳性血液发往临床，这对用血安全带来了极大的负面影响，也充分说明NAT是提高输血安全的有效手段。总体NAT阳性率为0.144%，高于西安地区的0. 066%[7]和乌鲁木齐地区的0. 11%[8],低于襄阳地区的0. 155%[9]和南昌地区的0.24%[10]。台州地区在血清学检测过程中未对灰区进行设置，部分ELISA处于灰区而NAT阳性标本计算入内，这可能是其阳性率高于温州、丽水地区的原因之一。混样阳性率、拆分阳性率是监控分析系统运行状况是否良好的质量监控指标。一旦指标出现异常，需从实验室人员、环境、检测系统、试剂等方面查找原因，及时消除异常因素干扰，保证检测结果的准确可靠。总体而言，全年NAT检测系统运行平稳。

浙南地区核酸集中化检测模式运行平稳，有效降低了输血风险，保障了地区的血液安全。各血站可针对本地区疾病流行特点、经济发展水平、血站规模、交通条件等因素，选择适合自身的血液筛查方式或委托检测方式，因地制宜，更好的保障血液的安全，促进无偿献血事业的健康发展。

利益冲突：无

参考文献

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[8] 周丽君, 张洪斌, 毕新红, 等. 乌鲁木齐市血液中心受委托集中化核酸检测结果分析[J].中国输血杂志, 2015, 28(1): 108-110. DOI:10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2016.09.030.

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