白茄根中绿原酸的含量测定

刘亭 李梅 胡贺佳

摘要[目的]建立白茄根中绿原酸的含量测定方法。[方法]采用HPLC建立白茄根中指标成分绿原酸的含量测定方法，对所建立的方法进行了专属性、线性关系考察、精密度、准确度和耐用性等试验。[结果]该研究建立的白茄根中绿原酸含量测定的方法的专属性、线性关系、精密度、准确度和耐用性均符合要求，并成功用于3个批次不同产地白茄根中绿原酸的含量测定，其中绿原酸的含量为0.026%～0.031%。[结论]该方法准确，可用于白茄根的质量控制。

關键词白茄根;绿原酸;含量测定;方法学

中图分类号R284文献标识码A文章编号0517-6611（2018）25-0164-04

Content Determination of Chlorogenic Acid in Solanum melongena Roots

LIU Ting1， LI Mei1，2，HU Hejia1，2 et al

（1.Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics， State Key Laboratory of Functions and Applications of Medicinal Plants， Guizhou Medical University， Guiyang，Guizhou 550004;2.School of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang，Guizhou 550004）

Abstract[Objective] The research aimed to establish a method for determination of chlorogenic acid in Solanum melongena roots. [Method] The method for the determination of the content of chlorogenic acid was established by HPLC. Through the tests of system suitability test， linearity， precision， repeatability， recovery rate and durability， all the requirements were met. [Result]The specificity， linearity， precision， accuracy and durability of the method for determination of chlorogenic acid in Solanum melongena roots of this study were all in accordance with the requirements， and successfully used in three batches of white roots in different origins of Solanum melongena roots. The content of chlorogenic acid was determined， wherein the content of chlorogenic acid was 0.026%-0.031%.[Conclusion]This method is accurate and can be used for quality control of Solanum melongena roots.

Key wordsSolanum melongena root;Chlorogenic acid;Content determination;Method research

白茄根为茄科植物茄（Solanum melongena L.）的干燥根及茎基，具有清热利湿、收敛止血的功效，主要用于久痢便血、水肿、带下、骨节疼痛等症[1]，是贵州省少数民族用药，分布广泛，在全省各地均有栽培;收载于《贵州省中药民族药材质量标准》（2003版）[2]，但其仅记录性状和薄层鉴别，标准中无检查及含量测定等内容。

绿原酸为白茄根中的有效成分，虽然国内外对其他中药材中绿原酸的含量测定研究已有报道[3-10]，但关于白茄根中绿原酸的含量测定方法鲜见报道。笔者以贵州省民间草药白茄根为研究对象，进行绿原酸的含量测定，并在此基础上建立符合中药现代化要求的药材质量标准，建立针对白茄根中绿原酸系统的、合理的HPLC法含量测定，旨在促进中药材及相关产品的质量标准。

1材料与方法

1.1试材

绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110753-201415，纯度≥96.2%）;甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯）。白茄根药材由贵州医科大学药学院药用植物学与生药学教研室张旭副教授采集，并鉴定为茄科植物茄（Solanum melongena L.）的干燥根及茎基。

1.2仪器

Ultimate-3000型高效液相色谱系统（美国赛默-飞世尔公司）;KQ-300DE超声波清洗机（贵州中润四通科技有限公司）;WP-UP-II-20分析型超纯水机（四川沃特尔科技发展有限公司）;EL204万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

1.3方法

1.3.1

色谱条件与系统适用性试验。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%磷酸水溶液（16∶84）为流动相;检测波长为327 nm。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于1 000。

1.3.2

供试品溶液的制备。取本品粉末（过3号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇水25 mL，密筛，称定重量，浸泡12 h后，用70%甲醇补足减失的重量，超声处理（50 kHz，50 ℃）1 h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.3.3

对照品溶液的制备。取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.994 mg的溶液，即得（10 ℃下保存）。

1.3.4

方法學考察。

1.3.4.1

专属性试验。以拟定好的色谱条件，采用紫外-可见光检测器，分别进样供试品溶液、对照品溶液，获得色谱图和光谱图。

1.3.4.2

线性关系考察。精密量取对照品溶液储备液1 mL于50 mL棕色容量瓶中，用25%甲醇水溶液稀释至刻度，得母液，按照1.3、1.5、2.0、2.0、2.5倍梯度稀释配制相应浓度，获得绿原酸的线性方程。

1.3.4.3

精密度试验。

（1）重复性试验。精密称取供试品溶液制备方法中规定的取样量0.50、0.25、0.75 g各3份，分别按“1.3.2”“1.3.3”方法制备供试品溶液和对照品溶液，分别进样对照品溶液和供试品溶液，并计算含量测定结果和各水平的RSD值。

（2）中间精密度试验。在与重复性不同的试验时间（不是同一天），称取供试品溶液制备中规定的取样量（约0.5 g）3份，分别按“1.3.2”“1.3.3”方法制备供试品溶液和对照品溶液，分别进样对照品溶液和供试品溶液，并计算含量测定结果和RSD值。

（3）准确度（回收率）试验。精密称取供试品溶液制备方法中规定的取样量0.25 g 9份，分别按称量样品被测定成分的本底值加入50%（3份）、100%（3份）、150%（3份）的对照品，分别按“1.3.2”“1.3.3”方法制备供试品溶液和对照品溶液，分别进样对照品溶液和供试品溶液。计算含量测定结果、各自的回收率以及RSD值。

1.3.5耐用性。

1.3.5.1

供试品溶液稳定性试验。取1批供试品溶液，于供试品溶液制备好后，根据HPLC分析时间，在0、1、2、4、8 h分别进样5次，以被测定化合物峰面积的RSD考察稳定性。

1.3.5.2

不同流动相比例。考察3个流动相比例，按专属性试验、精密度、回收率试验中色谱条件，以同一支色谱柱，只改变流动相比例，制备3份供试品溶液，每个流动相比例分别进样对照品溶液和供试品溶液，计算含量测定结果以及RSD值。

1.3.5.3

不同pH。考察3种pH，按专属性试验、精密度、回收率试验中色谱条件，以同一支色谱柱，只改变pH，制备3份供试品溶液，每个pH分别进样对照品溶液和供试品溶液，计算含量测定结果以及RSD值。

1.3.5.4

不同流速。考察3种流速，按专属性试验、精密度、回收率试验中色谱条件，以同一支色谱柱，只改变流速，制备3份供试品溶液，每种流速分别进样对照品溶液和供试品溶液，计算含量测定结果以及RSD值。

1.3.5.5

不同色谱柱比较。考察3个厂家的色谱柱，按专属性试验、精密度、回收率试验中色谱条件，只改变色谱柱（再另外选择2个厂家的色谱柱），制备3份供试品溶液，每支色谱柱条件下分别进样对照品溶液和供试品溶液，计算含量测定结果以及RSD值。

1.3.5.6

不同检测波长。考察3个检测波长，按专属性试验、精密度、回收率试验中色谱条件，以同一支色谱柱，只改变检测波长，制备3份供试品溶液，每个检测波长分别进样对照品溶液和供试品溶液，计算含量测定结果以及RSD值。

1.3.5.7

不同色谱柱温度。考察3个色谱柱温度（同一支色谱柱），按专属性试验、精密度、回收率试验中色谱条件，以同一支色谱柱，只改变色谱柱温度，制备3份供试品溶液，每个色谱柱温度分别进样对照品溶液和供试品溶液，计算含量测定结果以及RSD值。

1.3.5.8

不同型号仪器。考察2个不同厂家、不同型号的HPLC仪，按专属性试验、精密度、回收率试验中色谱条件，以同一支色谱柱在2台不同仪器进行测试，制备3份供试品溶液，每台仪器分别进样对照品溶液和供试品溶液，计算含量测定结果以及RSD值。

1.3.6

样品测定。将获得的3批样品（分别是BQG1、BQG2、BQG3）进行测定，每批样品平行称取3份，按照“132”方法制备样品，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在327 nm处进行平行测试。

2结果与分析

2.1HPLC含量测定方法学验证

2.1.1

专属性试验。由图1和图2可知，定量测定供试品和对照品溶液绿原酸的色谱峰和紫外光谱图均一致，说明具有良好的专属性。

2.1.2

线性关系试验。通过HPLC测定对照品的浓度，绘制标准曲线，数据经过回归处理，得绿原酸对照品的回归方程为y=0.438x-0.004 9（r=0.999 9），表明进样浓度在0.944～14.910 μg/mL线性关系较好。

安徽农业科学2018年

2.1.3精密度试验。

2.1.3.1

重复性试验。从表1可以看出，各水平含量的平均值为0.316 2 mg/g，RSD值为0.50%，说明重复性较好。

2.1.3.2

中间精密度试验。从表2可以看出，各水平含量的平均值为0.311 3 mg/g，RSD值为0.63%，说明中间精密度试验符合要求。

2.1.3.3

准确度（回收率）试验。从表3可以看出，3个水平的平均回收率在96.13%～98.36%，RSD在1.07%～3.24%，表明该方法准确。

2.1.4耐用性。

2.1.4.1

供试品溶液稳定性试验。从表4可以看出，不同时间测定的绿原酸的峰面积的平均值为2.727 2，RSD值为1.59%。

2.1.4.2

不同流动相比例。从表5可以看出，不同流动相比例的测定结果平均值在0.308 2～0.310 7 mg/g，RSD值在0.65%～0.80%。

2.1.4.3

不同pH。从表6可以看出，不同pH的测定结果的平均值在0.307 0～0.316 6 mg/g，RSD值在0.65%～108%。

2.1.4.4不同流速。表7显示，不同流速的测定结果的平均值在0.308 2～0.325 6 mg/g，RSD值在0.65%～2.10%。

2.1.4.5

不同色谱柱比较。表8显示，不同色谱柱的测定结果平均值在0.308 2～0.316 3 mg/g，RSD值在0.31%～132%。

2.1.4.6

不同检测波长。表9显示，不同检测波长的测定结果的平均值在0.308 2～0.309 8 mg/g，RSD值在0.65%～0.90%。

2.1.4.7

不同色谱柱温度。表10显示，不同检测波长的测定结果的平均值在0.308 2～0.314 3 mg/g，RSD值在0.65%～2.43%。

2.1.4.8

不同型号仪器。2个不同厂家、不同型号的HPLC仪测定结果见表11。结果表明，不同型号仪器的测定结果的平均值分别为0.294 0、0.305 9 mg/g，RSD值分别为0.71%和0.65%。

2.2样品测定

3批样品的绿原酸的含量测定结果见表12，由结果可知，白茄根中绿原酸的平均含量在0.026%～0031%。

3结论与讨论

白茄根为贵州省少数民族所用药物，分布广泛，在全省各地均有栽培;但是有關其质量标准的研究仅记录性状和薄层鉴别，无有效成分的含量测定内容，大大降低了其质量控制的水平和准确性，不利于白茄根药物用价值的进一步开发和利用。针对上述白茄根质量控制存在的不足，该研究首先建立了白茄根药材中有效成分绿原酸的含量测定方法，包括专属性考察、线性关系考察、精密度考察、准确度考察和耐用性考察。

该研究所建立的白茄根中绿原酸含量测定的方法准确可靠，精密度中重复性试验的RSD值为0.50%，中间精密度试验结果为0.63%，说明该试验重复性好，中间精密度高;定量测定供试品和对照品溶液绿原酸色谱峰和光谱峰紫外光谱图一致，说明具有良好的专属性;线性方程符合标准规定，线性关系好;3个水平的回收率在96.13%～98.36%，RSD在1.07%～3.24%，表明方法准确，并将该方法成功地用于3批白茄根药材中绿原酸的含量测定。结果表明，白茄根药材中绿原酸的平均含量在0.026%～0.031%，该研究结果为白茄根质量标准的制定提供一定的参考。

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