不同处理方法对透骨香种子萌发的影响

刘绍欢 何晶晶 詹云慧 樊天珺 黄哲 王世清

摘要 [目的]采用不同浓度试剂对透骨香种子进行浸种处理，筛选出透骨香种子在此条件下发芽的最佳条件。[方法]采用不同浓度的C2H5OH、NaOH、KMnO4、GA3、NaCl对透骨香种子分别浸种30、60、90、120 min，采用培养皿发芽试验，以发芽势、发芽率以及发芽指数3个指标对不同处理进行评价。[结果]不同处理方法处理后的透骨香种子的发芽率均在80%以上，且发芽势、发芽指数相比对照组明显提高。其中用10 mg/mL NaOH 浸种60 min的种子发芽势、发芽率均最高，分别为85%、96%，发芽指数为184.90，与对照组相比分别提高55.5、31百分点和105.63;而GA3对透骨香种子初期有一定的抑制作用，发芽势均比对照组小。[结论]透骨香种子育苗最佳处理方式为10 mg/mL NaOH浸种60 min。

关键词 透骨香;发芽率;发芽势;发芽指数

中图分类号 S567文献标识码 A文章编号 0517-6611（2018）33-0025-03

透骨香作为贵州常用苗族药之一，为杜鹃花科植物滇白珠Gaultheria yunnanensis（Franch.）Rehd 的干燥全株或根[1-2]，具有清热解毒、活血祛瘀、祛风除湿、降气平喘的功效，在治疗肌肉酸痛及跌打损伤、软组织伤、风湿病、踝扭伤、腰椎骨质增生、腰膝疼痛、风湿痹痛等方面具有显著作用[3-4]。

目前，在贵州以透骨香为主要原料的民族成方制剂有：“痹痛宁胶囊（金骨莲胶囊）”[4]、“复方透骨香药乳” [5]、“清痹通络药酒” [5]等。该药材及制剂为贵州省中药现代化及经济发展带来了效益。但是《贵州省中药材、民族药材质量标准》（2003 年版）及有关透骨香的研究文献中仅见其药性记载、药材鉴定、药理及毒理作用、化学成分与含量测定及临床使用效果等报道。但笔者查阅文献发现国内外罕见有关于透骨香药材人工栽培相关技术的研究，且随着对其化学成分[6-8]、药理及临床研究[9-10]的逐步深入，其临床使用越来越广，该药材的来源也越来越重要，因此，将其由野生变为家种，建立规范化种植，从而更好地控制其药材质量，真正做到“药材好，药才好”。

该试验拟通过研究不同浓度的C2H5OH、NaOH、KMnO4、NaCl、GA3 5种试剂在不同时间处理下[11-16]对透骨香种子发芽势、发芽率、发芽指数的影响，以选出试验所需的最优处理条件，为下一步工作提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试用种子来自贵州省花溪区高坡乡，经笔者鉴定均为杜鹃花科的透骨香[Gaultheria yunnanensis（Franch.）Rehd.]的果实（含种子），连同蒴果自然风干后装袋备用。

1.2 种子选定

随机选定饱满的种子进行试验。

1.3 仪器与试剂

供试仪器：AL204型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器）;供试试剂：95%乙醇（20150202成都金山化学试剂有限公司）、氢氧化钠（080603成都金山化学试剂有限公司）、高锰酸钾（20141213重庆川东化工有限公司）、氯化钠（20151219重庆江川化工（集团）有限公司）、赤霉素（150418上海宇涵生物科技有限公司）。

1.4 试验方法

用不同浓度的C2H5OH（10%、30%、50%、70%、90%）、NaOH（10、30、50、70、90、110 mg/mL）、KMnO4（0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mg/mL）、GA3（100、300、500、700、900、1 100 mg/mL）、NaCl（10、30、50、70、90、110 mg/mL）分别浸种30、60、90、120 min处理透骨香种子。用蒸馏水处理作为对照，每组100粒种子。

发芽床采用直径9 cm的培养皿，内铺一层滤纸，上盖皿盖保湿。置于室温条件下培养。每天定时观察种子发芽情况，并补充相应水分使滤纸保持湿润，种子露白时开始计数，统计不同试剂、浓度、浸种时间下的累计发芽数、发芽势、发芽指数，直到连续3 d不再发出新芽，停止计数，从发芽到不再长出新芽，一共记录43 d数据。

1.5 观测指标

以发芽后第10天作发芽势计算，第34天作发芽率计算，10～34 d作发芽指数计算。所得数据用SPSS 21.0、Excel数据软件分析。其中对照组发芽势为29.5%，发芽率为65%，发芽指数为79.27。发芽势、发芽率、发芽指数的计算公式如下：

n34为发芽第34天的正常发芽的粒数，

Gt为相应各日的正常发芽数，Dt为置床之日的天数。

2 结果与分析

2.1 不同浓度C2H5OH溶液、不同处理时间对透骨香种子发芽率的影响

由表1可知，经C2H5OH溶液处理的透骨香种子，发芽率大多得到提升，在低浓度中，仅10%浸种60 min和30%浸种30 min的发芽率比对照组低，但90%浸种对种子发芽率全呈抑制状态。在用30%浸种60 min，50%、70%浸种90 min，10%浸种120 min时，其发芽势、发芽率、发芽指数均比对照组高，其中50%浸种90 min发芽率最高，其发芽势、发芽率和发芽指数分别为33%、90%、93.66，与对照组相比，分别提高了3.5、25百分点，发芽指数提高14.39。

由SPSS分析发现，各处理组对发芽势、發芽率、发芽指数影响Sig.值均为0.00，极具显著性差异影响;发芽势、发芽率、发芽指数变化呈近似正相关，整齐度好。

2.2 不同浓度NaOH溶液、不同处理时间对透骨香种子发芽率的影响

由表2可知，经NaOH溶液处理的透骨香种子，低浓度（10、30 mg/mL）对种子萌发具明显促进作用，用10 mg/mL浸种60、90、120 min，30 mg/mL浸种30、60、90 min，50 mg/mL浸种30 min时，发芽势、发芽率、发芽指数均明显增大，其中以10 mg/mL浸种60 min发芽最好，发芽势、发芽率、发芽指数分别为85%、96%、184.90，与对照组相比，分别提高了55.5、31百分点，发芽指数提高105.63。但随着NaOH溶液浓度增大，出现抑制萌发的情况，如在浓度50 mg/mL浸种90 min时，发芽率才4%，且幼苗后期有死亡现象。

SPSS数据分析可见，浓度对发芽势、发芽率、发芽指数极具显著性差异影响，浸种时间对发芽率极具显著性差异影响，对发芽势、发芽指数没有明显差异影响;种子发芽率、发芽势、发芽指数在NaOH处理下变化呈正相关，整齐度好。

2.3 不同浓度KMnO4溶液、不同处理时间对透骨香种子发芽率的影响

由表3可知，经KMnO4溶液处理的透骨香种子，发芽率总体比对照组高，仅3组发芽率比对照组低，幼苗死亡情况不明显，且在高浓度时发芽率相对低浓度要好，其用0.50 mg/mL浸种30 min，0.70 mg/mL浸种90 min，1.10 mg/mL浸种60 min时，发芽势、发芽率、发芽指数相比对照组均明显提高;在0.50 mg/mL浸种30 min时，发芽率最好，发芽势、发芽率、发芽指数分别为51%、87%、112.93，与对照组相比，分别提高了21.5、22百分点，发芽指数提高33.66。

由SPSS进行分析发现，浓度对发芽势、发芽率、发芽指数及浸种时间对发芽势、发芽指数均不具显著性差异影响，浸种时间对发芽率极具显著性差异影响;种子发芽率、发芽势、发芽指数变化成近似正相关，整齐度较好。

2.4 不同浓度NaCl溶液、不同处理时间对透骨香种子发芽率的影响

由表4可知，经NaCl溶液处理的透骨香种子，发芽率大多得到提高，在30 mg/mL浸种30 min时，发芽率最高，发芽率、发芽指数为84%、96.04，与对照组相比，发芽率提高了19百分点，发芽指数提高16.77，但发芽势降低为26%。

由SPSS进行分析可知，浓度对发芽势、发芽率、发芽指数具显著性差異影响，浸种时间对发芽势、发芽率、发芽指数没有明显差异影响;种子发芽率、发芽势、发芽指数变化成近似正相关，整齐度较好。

2.5 不同浓度GA3溶液、不同处理时间对透骨香种子发芽率的影响

由表5可知，经GA3溶液处理的透骨香种子，发芽势均比对照组低，但发芽率、发芽指数大多得到提高，在100 mg/mL浸种30 min时，发芽势、发芽率、发芽指数均为最高，分别为24%、90%、93.19，与对照组相比，发芽势降低了5.5百分点，发芽率、发芽指数分别升高了25百分点、13.92。

由SPSS处理可知，浓度和浸种时间对发芽势、发芽率、发芽指数均不具显著性差异影响;种子发芽势、发芽率、发芽指数变化成近似正相关，整齐度较好。

3 结论与讨论

（1）不同试剂处理后的种子与对照组相比，发芽率大多能够得到提升，如10 mg/mL NaOH浸种30、60 min等;其中用10% C2H5OH浸种120 min，50%浸种90 min，10、30 mg/mL NaOH分别浸种60、90 min，0.50 mg/mL KMnO4浸种30 min、0.70 mg/mL浸种90 min、1.10 mg/mL浸种60 min，10 mg/mL NaCl浸种30 min，超声浸种90 min后，发芽率均在80%以上，且发芽势、发芽指数相比对照组明显提高;其中用10 mg/mL NaOH浸种60 min发芽率、发芽势均最高，发芽指

数第二，分别为96%、85%、184.90。

（2）透骨香种子种皮硬、厚，胚小，发芽率不高（由对照组可知），造成种子发芽率不高的原因很多，如种皮的蜡质层、油脂层，种皮细胞内的果胶质、种子霉变等;透骨香种子过小，数种过程可能混杂不够成熟饱满的种子，同样可能影响试验结果。

（3）种子发芽势、发芽率、发芽指数作为测定种子萌发的指标，发芽势高，种子发芽快;发芽率高，种子发芽多，存活率高;而在发芽指数也高时，才能保证种子发芽快且存活率好。在不同试剂、浓度、浸种时间处理中NaOH处理组发芽情况最好，整体发芽较快，即使有幼苗死亡情况，但幼苗存活率依然很高，其中以10 mg/mL浸种60 min处理最好，综合三因素，下一步试验时建议选用10 mg/mL NaOH溶液对透骨香种子浸种60 min。

参考文献

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