宫颈上皮细胞稳定性游离亚铁原卟啉检测在不同年龄段宫颈癌诊断中的意义

赵莹 周训华 陈艳辉

[摘要] 目的 探討宫颈上皮细胞稳定性游离亚铁原卟啉（FH）检测在不同年龄段宫颈癌诊断中的意义。 方法 回顾性分析湖南省脑科医院2014年10月～2017年10月收治的213例宫颈肿瘤患者的临床资料，将其按年龄分为≤30岁、>30～40岁、>40～50岁、>50～60岁、>60～70岁及>70岁6个年龄段，均行手术治疗且均经病理检测明确诊断，另均行上皮细胞稳定性FH检测。对比不同年龄段FH检测结果，分析不同年龄段FH检测的灵敏度、特异度及准确度，并绘制基于上皮稳定性FH的检测结果在不同年龄段宫颈肿瘤患者中的工作曲线（ROC），得出曲线下面积（AUC）。 结果 >40～50岁者与>60～70岁者的总阳性率均明显高于≤30岁、>30～40岁、>50～60岁及>70岁者（P < 0.05），但其他各年龄段两两比较差异无统计学意义（P > 0.05）；宫颈上皮细胞稳定性FH染色检测≤30岁、>30～40岁、>40～50岁、>50～60岁、>60～70岁及>70岁宫颈癌患者分别有10、25、56、9、50例及11例，而病理学诊断则分别有7、21、55、7、49例及8例；不同年龄段宫颈肿瘤患者进行上皮细胞稳定性FH检测均具有较高的灵敏度、特异度及准确度，但>40～50岁与>60～70岁者高于其他年龄段；上皮细胞稳定性FH检测>40～50岁、>60～70岁、>30～40岁、>70岁、>50～60岁及≤30岁的AUC分别为0.956、0.949、0.819、0.763、0.727及0.725。 结论 宫颈上皮细胞稳定性FH检测在不同年龄段宫颈癌诊断中均具有一定的可靠性，但在>40～50岁与>60～70岁者中灵敏度、特异度及准确度相对较高，可用于指导临床宫颈癌筛查及诊断。

[关键词] 宫颈上皮细胞稳定性游离亚铁原卟啉；宫颈癌；年龄段

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）02（c）-0110-05

Significance of detection of cervical epithelial cell stability free ferrous protoporphyrin in the diagnosis of cervical cancer in different ages

ZHAO Ying ZHOU Xunhua CHEN Yanhui

Department of Gynecology and Obstetrics， Hu'nan Brain Hospital， Hu'nan Province， Changsha 410007， China

[Abstract] Objective To investigate the significance of detection of cervical epithelial cell stability free ferrous protoporphyrin （FH） in the diagnosis of cervical cancer in different ages. Methods The clinical data of 213 cases of patients with cervical tumor admitted to Hu'nan Brain Hospital from October 2014 to October 2017 was retrospectively analyzed. They were divided into 6 age groups of ≤30 years old， >30-40 years old， >40-50 years old， >50-60 years old， >60-70 years old， and >70 years old by age， and all the patients were treated with surgical treatment and diagnosed by pathological examination， also they were detected by cervical epithelial cells stability FH. The results of FH detection at different ages were compared， and the sensitivity， specificity and accuracy of FH test in different age groups were analyzed， then the receiver operating curves （ROC） of patients with high-risk cervical cancer in different age groups based on uterine epithelial cells stability FH were made， and the area under curves （AUC） were obtained. Results The total positive rates of people at age of >40-50 years old and >60-70 years old were significantly higher than those of ≤30 years old， >30-40 years old， >50-60 years old and >70 years old （P < 0.05）， but there were no significant differences between the other age groups （P > 0.05）. There were respectively 10， 25， 56， 9， 50 cases and 11 cases of ≤30 years old， >30-40 years old， >40-50 years old， >50-60 years old， >60-70 years old and >70 years old by cervical epithelial cells stability FH， while there were respectively 7， 21， 55， 7， 49 cases and 8 cases of ≤30 years old， >30-40 years old， >40-50 years old， >50-60 years old， >60-70 years old and >70 years old by immunocytochemistry examination. Epithelial cells stability FH detection had higher sensitivity， specificity and accuracy in different age groups， which of >40-50 years old and >60-70 years old were higher than other age groups. The AUC of the uterine epithelial cells stability FH for the detection of people at age of >40-50 years old， >60-70 years old， >30-40 years old， >70 years old， >50-60 years old， and ≤30 years old were 0.956， 0.949， 0.819， 0.763， 0.727 and 0.727 respectively. Conclusion Cervical epithelial cells stability FH staining are reliable in the diagnosis of cervical cancer at different ages， but the sensitivity， specificity and accuracy of >40-50 years old and >60-70 years old are relatively higher other ages， which can be used to guide clinical screening and diagnosis of cervical cancer.

[Key words] Cells free ferrous protoporphyrin in cervical epithelial cell stability； Cervical carcinoma； Age group

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤，其病死率占女性癌症病死率第2位，严重威胁女性生命安全[1-2]。采用有效的宫颈癌筛查方法，使宫颈癌前病变及宫颈癌得以早期发现，并及时给予有效的治疗，可降低宫颈癌患者的发病率与病死率[3-4]。细胞游离亚铁原卟啉（cells free ferrous protoporphyrin，FH）是恶性肿瘤发生发展过程中产生的一种生物标志因子，具有可连续测量性，与细胞癌变程度具有密切正相关性[5]。上皮细胞稳定性FH检测是近年来临床筛查宫颈癌前病变及宫颈癌的一种新型方法，对宫颈癌的早期诊断具有重要意义，但关于其在不同年龄段宫颈癌患者诊断中的应用鲜有报道，鉴于此，本研究特将213例高危宫颈癌者按年龄进行分组，均进行上皮细胞稳定性FH检测，以探讨其在不同年龄段宫颈癌患者中的诊断价值，详情如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析湖南省脑科医院2014年10月～2017年10月收治的213例宫颈肿瘤患者的临床资料。所有患者均行手术治疗，且均经病理检查明确诊断，均行宫颈上皮细胞稳定性FH检测，保留有完整的病例资料，各项数据可查。其中≤30岁者18例，>30～40岁者36例，>40～50岁者64例，>50～60岁者16例，>60～70岁者59例，>70岁者20例。患者或家属均签署知情同意书，且本研究获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 病理诊断 手术切除取病变组织标本，用10%甲醛溶液进行固定，酒精脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋标本组织，行病理切片，厚度约为4 μm，脱蜡至水，行苏木精-伊红染色，脱水透明，封片，在电子显微镜下观察组织病理形态。

1.2.2 宫颈上皮细胞稳定性FH检测 ①检测试剂与材料：细胞保存液购自深圳市廖氏原生物医学科技有限公司，细胞刷购自常州洛克曼医疗器械有限公司，上皮细胞FH检测试剂盒购自青岛东孚美伦生物科技有限公司；②检测方法：持宫颈渗液采样器从阴道徐徐插入至子宫颈部位，按照右上、右下、左下、左上及宫颈管口顺序进行擦拭，获得带有细胞的渗液，并将细胞渗液与细胞保存液进行充分混匀，然后送检。严格按照上皮细胞FH检测试剂盒操作步骤进行，乳白色滴管管口两翼部按顺时针方向给予折断，并将试剂滴进测试池中，且用此管吸取样本液1 mL，然后将样本液滴进测试池中，之后旋转折断橘红色滴管，将试剂滴进测试池内，在2 min内同比色板对比显色情况。

1.2.3 灵敏度、特異度及准确度计算方法 以病理学诊断结果作为金标准，将宫颈上皮细胞稳定性FH检测结果与金标准结果进行对比，FH检测结果与病理诊断相符合的为真阳性或真阴性，反之为假阳性或假阴性，其中灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%，特异度=真阴性/（假阳性+真阴性）×100%，准确度=（真阳性+真阴性）/总例数×100%。

1.3 判定标准

1.3.1 组织病理学诊断 正常或炎性反应；宫颈上皮细胞内瘤变：基底膜上方上皮细胞形态及结构出现异变；原位癌：癌细胞占据上皮全层，基底膜完整，无间质浸润；浸润癌：癌细胞穿破基底膜侵入间质。

1.3.2 宫颈上皮细胞稳定性FH检测 显示灰白色或微蓝色为阴性，提示子宫上皮细胞稳定性良好；显示蓝色为阳性，提示子宫上皮细胞不稳定；显示深蓝色为强阳性，提示子宫上皮细胞极不稳定，而深蓝色后即刻转为棕红色或深黄色提示标本内可能混有血液。总阳性率=（阳性+强阳性）/总人数×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理，两样本和多样本计数资料用百分比表示，采用χ2检验，等级资料比较采用非参秩和检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄段子宫上皮细胞稳定性游离亚铁原卟啉检测结果比较

不同年龄段等级分布比较差异有统计学意义（P < 0.05），总阳性率比较差异有统计学意义（P < 0.05）；>40～50岁者与>60～70岁者的总阳性率均明显高于 ≤30岁、>30～40岁、>50～60岁及>70岁者（P < 0.05），但其他各年龄段两两比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 子宫上皮细胞稳定性FH检测结果与病理学诊断结果比较

两种方法检测宫颈癌结果见表2，上皮细胞稳定性FH检测方法与病理学诊断结果对比见表3，可见不同年龄段宫颈癌者进行上皮细胞稳定性FH检测均具有较高的灵敏度、特异度及准确度，但>40～50岁者与>60～70岁者高于其他年龄段。上皮细胞稳定性FH检测对不同年龄段宫颈癌检查的ROC如图1所示，可知>40～50岁、>60～70岁、>30～40岁、>70岁、>50～60岁及≤30岁的AUC分别为0.956、0.949、0.819、0.763、0.727、0.725。

3 讨论

宫颈癌在女性生殖系统恶性肿瘤中较多见，高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌发病的主要危险因素，且性生活、孕产年龄及次数等也与宫颈癌的发生密切相关[6-7]。宫颈癌早期常无明显体征及症状，宫颈可光滑或难与宫颈柱状上皮异位区别，且颈管型患者常因宫颈外观正常易漏诊或误诊，因此，需寻找有效的检测方法，以促进宫颈癌的早期发现与诊断，便于及时给予有效的治疗措施[8-9]。近年来，宫颈上皮细胞稳定性FH检测筛查得以普遍应用，极大地促进了宫颈癌及宫颈癌变的早发现、早诊断及早治疗，明显降低了宫颈癌发病率及病死率，但其在不同年龄段宫颈癌患者诊断中的意义尚未有明确报道，因此，需进一步深入研究，探讨其是否可为提高临床宫颈癌筛查力度提供理论依据。

本研究结果发现，>40～50岁者与>60～70岁者的总阳性率均明显高于≤30岁、>30～40岁、>50～60岁及>70岁者（P < 0.05），但其他各年龄段两两比较差异无统计学意义（P > 0.05），提示子宫上皮细胞稳定性FH检测对宫颈癌具有一定的诊断价值，但在>40～50岁与>60～70岁年龄段中宫颈癌发病率较高。有研究表明[10]，宫颈上皮细胞稳定性FH检测在宫颈癌患者的筛查及诊断中具有较高的应用价值。FH主要存在于线粒体中，当致癌因子出现时，细胞内抑癌基因发生突变或缺失，丧失对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的抑制作用，使细胞内稳态失调及能量代谢异常，且蛋白质的构象发生改变，导致亚铁原卟啉从细胞蛋白中析出，成为FH[11]。游离的FH是一种活性基团，它能够催生亚硝基自由基、氧自由基、羟自由基等，但自由基中含未配对的电子，具有极不稳定性，可从邻近的脂肪、蛋白质及DNA上夺取电子，使自己处于一种稳定状态，然而邻近的分子则变成新的自由基，再去从别的分子上夺取电子，此种连锁反应引起脂蛋白、细胞膜脂质、细胞骨架及DNA等的氧化损伤，导致细胞自身调控出现紊乱，使组织细胞发生癌变[12-13]。随着组织器官及细胞氧化损伤的加重，FH渗出增多，且FH渗出量与上皮细胞恶性程度呈正相关[14]。因此，宫颈上皮细胞稳定性FH检测对宫颈癌的筛查与诊断具有极其重要的作用。而宫颈上皮细胞稳定性FH在>40～50岁者与>60～70岁者中阳性率较高，可指导临床工作者重视此两个年龄段女性的宫颈癌筛查工作，督促该年龄段女性定期至医院进行体检，加大健康教育力度，增强她们自我预防意识，积极主动至医院进行宫颈癌筛查，以利于及时发现宫颈癌变，及时给予积极治疗，降低宫颈癌发病率及病死率。

本研究结果还发现，不同年龄段宫颈癌患者进行上皮细胞稳定性FH检测均有较高的灵敏度、特异度和准确度，但>40～50岁者与>60～70岁者高于其他年龄段者，且上皮细胞稳定性FH检测>40～50岁、>60～70岁、>30～40岁、>70岁、>50～60岁及≤30岁的AUC分别为0.956、0.949、0.819、0.763、0.727及0.725，提示子宫上皮细胞稳定性FH检测诊断宫颈癌结果可靠，但在>40～50岁者与>60～70岁者可靠性相对较高。宫颈上皮细胞稳定性FH可作为宫颈癌生物标志物，通过染色可对宫颈癌患者进行筛查与诊断。有研究表明[15]，子宫上皮细胞稳定性FH检测对诊断宫颈癌具有较高的敏感度。另有研究报道[16]，子宫上皮细胞稳定性FH检测对>40～50岁宫颈癌患者具有较高的灵敏度与准确度。30～40岁妇女性生活较活跃，感染上HPV的概率较高，且可能存在反复感染的情况，而HPV持续感染是宫颈上皮恶化的最重要危险因素，感染超过半年者易发生癌变，且HPV感染后演变成宫頸癌需10～20年，因此，从宫颈癌的发生和演变过程来看，40～50岁形成一个宫颈癌发病的高峰，宫颈上皮发生癌变，则FH渗出增多[17-18]。此外，老年患者的卵巢功能减退及雌激素水平降低，阴道壁萎缩及黏膜变薄，且宫颈上皮与子宫内膜呈萎缩状态，使局部微循环发生改变，患者抵抗力下降，易感染病原微生物，导致子宫颈发生癌变，增加FH渗出含量[19-20]。结合上述研究结果，则宫颈上皮细胞稳定性FH检测在不同年龄段检测结果及其灵敏度、特异度与准确度的不同可能与患者感染HPV的概率及机体功能状态有关。

综上所述，宫颈上皮细胞稳定性FH检测在不同年龄段宫颈癌患者中均具有较高的诊断价值及可靠性，但在>40～50岁与>60～70岁患者中灵敏度、特异度、准确度均较高，可指导临床宫颈癌筛查工作。但患者存在个体差异性，且受宫颈上皮细胞稳定性FH检测技术水平的影响，此研究结果可能存在一定的偏差，尚需结合大量临床资料进行统计分析，并进一步深入探讨年龄与FH表达的关系，以指导诊断和治疗。

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