BIOSYSTEM BA400全自动特定蛋白仪检测尿微量白蛋白的性能测定

刘斌，王勇，张炳昌，栾芳

山东大学附属省立医院 a.医学工程部；b.临床医学检验部，山东 济南 250021

引言

尿微量白蛋白是由肝脏产合成的带负电荷的中分子蛋白质，分子量约为69 kD，正常生理情况下仅有很少量白蛋白通过肾小球滤过屏障，其中95%会被近曲小管重吸收入血。健康人每升尿液中白蛋白含量不超过20 mg，24 h尿液中白蛋白含量不超过30 mg，因此得名“尿微量白蛋白”。任何能够引起肾小球基膜通透性增高的疾病，均可导致白蛋白通过肾小球进入尿液中，尿中出现微量白蛋白预示肾小球的早期病变[1]。因此，尿微量白蛋白是肾脏早期损害的标志蛋白，是肾脏病早期筛查和诊断的重要指标[2-3]。尿微量白蛋白病理性增高常见于糖尿病肾病、高血压肾病、妊娠子痫前期等[4-6]；也可见于全身性或局部炎症反应导致的肾功能异常患者，如尿路感染引起的肾脏早期病变、类风湿性关节炎的并发症[3,7]，以及服用对肾功能有影响的药物患者[8-10]。因此，尿微量白蛋白可用于（小儿）肾内科、（小儿）内分泌科、心内科、产科等对早期肾脏疾病的筛查，筛查对象包括成人、儿童及孕妇。

分析尿液中的微量白蛋白在临床已经得到广泛应用。随着全自动特定蛋白仪的发展和应用，尿微量白蛋白的快速定量检测也进入了一个新阶段，能为临床医师辅助诊断提供快速、准确的检测结果。我院自2017年4月引入一台BIOSYSTEM BA400全自动特定蛋白仪（以下简称“BA400特定蛋白仪”），可定量检测尿液中的微量白蛋白和其他生化指标。本文对BA400特定蛋白仪检测尿微量白蛋白的准确度、精密度、线性范围、可报告范围、参考区间和携带污染率做了研究评价，取得了良好效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本

病人标本来自本院2017年4月份肾内科住院患者，20例健康人标本来自本院2017年4月份在健康体检中心体检的健康人，排除高血压、肾病、糖尿病等疾病。标本均为清晨中段尿10 mL，离心后取上清于2 h内在BA400特定蛋白仪上检测。

1.2 仪器及试剂

BA400特定蛋白仪（Spain Biostec），重庆市博士泰生物技术有限公司生产的尿微量白蛋白试剂盒及配套质控品、校准品，免疫比浊法检测。

1.3 方法

1.3.1 准确度验证

依据WS/T420-2013，检测尿微量白蛋白试剂盒配套校准品（校准品可溯源至ERM-DA470K/IFCC）10次，计算10次连续测定结果的均值，与理论值的偏差应小于实际说明书范围10%。

1.3.2 精密度验证

（1）批内精密度：依据WS/T420-2013和CLSI EP5-A2文件[11-12]，取尿微量白蛋白试剂盒配套高、低值质控品各1份，连续检测20次，计算均数±标准差（M±SD）及变异系数（Coefficient of Variation，CV)。与说明书参考值≤7%作对照。

（2）批间精密度：依据WS/T 420-2013和CLSI EP5-A2文件[11-12]，取尿微量白蛋白试剂盒配套高、低值质控品各1份，连续检测20天，计算M±SD及CV。与说明书参考值≤10%作对照。

1.3.3 线性范围验证

依据WS/T420-2013和CLSI EP6-A文件[11,13]，选取浓度为865.2 mg/L的高值标本（H）、浓度为0 mg/L的低值标本（L）各一份，按高低比例1:4、2:3、3:2、4:1混匀，测定每份标本分析物浓度2次取平均值作为实测值，利用统计分析软件以实测值为y、理论值为x拟合方程，评估尿微量白蛋白在5.0～800.0 mg/L范围内的检测是否呈线性。结果判断：曲线回归系数R2＞0.995。

1.3.4 可报告范围验证

选取浓度在接近线性的标本按照1:5、1:10、1:15、1:20、1:25的比例稀释，每个浓度检测2次，统计均值与理论值比较，以80%≤R≤120%定位可接受范围。

1.3.5 参考区间验证

从本院健康体检中心收集健康人尿液标本20例，其中男性11例，女性9例，年龄范围18～57岁，平均年龄（36.55±11.20）岁。检测结果需在厂家说明书规定的参考值范围＜20 mg/L的符合率应大于95%。

1.3.6 携带污染率

取高值标本（H）和低值标本（L），连续检测3次高值H1、H2、H3，再连续检测3次低值L1、L2、L3，计算携带污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

1.4 统计学分析

采用Graphpad Prism 5软件对数据进行统计学分析和作图。均数采用M±SD表示，两变量相关性作直线相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 准确度

可溯源至ERM-DA470K/IFCC的校准品连续测定10次，测试值分别为 14.3、13.6、12.3、13.4、11.7、12.0、12.2、13.0、11.2 、12.3 mg/L，计算均值为12.6 mg/L，理论值为12.0 mg/L，偏差＜10%，符合要求。

2.2 精密度

2.2.1 批内精密度

试剂盒配套高、低值质控品分别连续检测20次，变异系数CV分别为4.0%和2.0%，均小于7%，符合要求，具体见图1和表1。

图1 BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白的批内精密度结果展示

表1 BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白的批内精密度数据分析

2.2.2 批间精密度

每日测试试剂盒配套高、低值质控品，连续检测20天，变异系数CV分别为4.8%和3.5%，均小于10%，符合要求，具体见图2和表2。

2.3 线性范围

以尿微量白蛋白理论值（不同稀释度）为x轴，实测均值为y轴，得出回归方程为y=1.007x+18.19（R2=0.9973），显示线性良好，估算线性范围在0～800.0 mg/L范围内，大于试剂盒说明书规定的5.0～800.0 mg/L，符合要求。线性检测情况见图3和表3。

图2 BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白的批间精密度数据展示

表2 BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白的批间精密度结果分析

图3 BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白的线性范围验证

表3 BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白的线性范围验证（mg/L）

2.4 可报告范围

通过验证，1:25的比例稀释标本时超过可接受范围80%≤R≤120%，故尿微量白蛋白的最大稀释倍数为1:20。由于尿微量白蛋白的检测线性范围是5.0～800.0 mg/L，所以尿微量白蛋白的临床可报告范围为5.0～16000 mg/L（表4）。

2.5 参考区间

20例健康人尿微量白蛋白的检测结果分别为： 5.0、9.1、2.1、2.0、1.0、2.8、10.2、4.0、11.8、1.1、1.0、9.3、12.9、2.1、9.6、1.9、2.7、13.6、5.0、6.8 mg/L，均 ＜20 mg/L，符合率100%。

2.6 携带污染

3次高值标本连续检测结果分别为944.8、930.0、951.4 mg/L，3次低值标本连续检测结果分别为1.0、2.0、2.1 mg/L。携带污染率为0.12%。

3 讨论

传统的尿微量白蛋白检测采用试纸条定性检测法，BIOSYSTEM BA400全自动特定蛋白仪是西班牙BioSystem公司继BA15、BA25推出的改良型全自动特定蛋白仪，可以对尿微量白蛋白及尿液其他生化指标进行定量检测。与同类蛋白分析仪比较，其检测优势包括以下几方面：第一，检测速度可达400测试/小时，是目前国内出现的检测速度最快的特定蛋白分析仪；第二，采用专为免疫比浊检测设计和改良的光学系统（专利号ZL201080017510.X），极大提升检测灵敏度；第三，主、副光路同时检测，提高了检测系统的稳定性，使小分子、低浓度物质的检测结果更准确；第四，对浓度过高和过低的样本，可自定义浓缩和稀释倍数进行自动稀释。

本文研究显示，BA400特定蛋白仪检测尿微量白蛋白批内、批间检测精密度CV均在5%以内，检测结果符合相关规定要求。线性范围分析显示，BA400特定蛋白仪尿微量白蛋白检测线性范围为0～800.0 mg/L，基本上能满足日常检测需要。经验证尿微量白蛋白的最大稀释倍数为1:20，临床可报告范围为5.0～16000 mg/L。对于内分泌科等较高浓度尿液标本，BA400特定蛋白仪会自动稀释20倍进行检测，满足高浓度标本检测需要。健康人尿液标本检测尿微量白蛋白验证显示均符合＜20 mg/L的正常值范围。携带污染率检测结果显示，BA400特定蛋白仪完全能满足临床要求。

目前，很多医院检验科在生化分析仪上进行特定蛋白项目检测。由于特定蛋白项目常规检测原理为抗原—抗体反应的免疫比浊方法，极易产生钩状效应和交叉污染，所以生化仪检测特定蛋白效果很不理想，而且其他生化项目的检测也会受到干扰[14-17]；特定蛋白检测试剂成分中的抗原、抗体极易附着于比色杯，很难彻底清洗，相比生化仪价格高昂的比色杯，BA400特定蛋白仪可以定期更换比色盘；此外，配套试剂为国内生产。权衡检测成本和准确性，BA400特定蛋白仪对特定蛋白的检测要优于生化分析仪。

表4 BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白的可报告范围验证

本研究结束后，我们后续将对反映肾小球病变的尿转铁蛋白和尿免疫球蛋白G、反映肾小管病变的尿视黄醇结合蛋白、尿β2微球蛋白、尿胱抑素等其他生化指标在BIOSYSTEM BA400全自动特定蛋白仪上进行检测性能评价，使其更好地满足临床检测需求。

4 结论

BA400特定蛋白仪测定尿微量白蛋白，具有快速简便、重复性好、携带污染率低等优点，适合临床大批量尿微量白蛋白标本的检测。适合（小儿）肾内科、（小儿）内分泌科、心内科、产科等科室对成人、儿童及孕妇早期肾脏疾病的筛查。

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