实时荧光PCR监测非洲猪瘟病毒

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(四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041)

0 引言

非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)又称非洲猪瘟疫、疣猪病，是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)感染引起的一种猪急性、热性、高度接触性传染病。临床症状以高热、高死亡率、内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能改变为主要特征[1]。该病是世界动物卫生组织的法定报告动物疫病(OIE，2004)，我国农业部将其列为一类动物疫病，是《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》中明确规定须重点防范的外来动物疫病之一[2]，世界尚缺乏有效疫苗进行免疫预防。

近年来，ASF疫情从非洲、欧洲逐步扩散至亚洲地区，对疫情国家的养猪业造成严重危害。非洲猪瘟近10年来已成为俄罗斯养猪业的主要威胁，俄罗斯46个地区都曾出现过疫情，造成的直接经济损失达到50亿卢布，间接经济损失更高达数百亿卢布。2017年3月，俄罗斯伊尔库茨克州爆发非洲猪瘟疫情，疫情发生地距离我国较近，是与我国贸易和人员往来频繁的交通和商贸枢纽。对此，农业部发布了《农业部办公厅关于进一步加强非洲猪瘟风险防范工作的紧急通知》，通知要求各地要高度警惕疫情风险，切实做好风险防范工作，切实加强境外疫情信息的收集、分析和报告，深入开展非洲猪瘟病毒病原学研究，加强快速诊断等技术研究储备，加强监测排查，加大高风险地区猪群的采样监测工作。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品采集

样品来源于四川省的规模场及散养户的猪组织病料，症状表现为皮肤发绀或淋巴结、脾、肾、胃肠黏膜明显出血。样品共计51份见表1。

表1 猪组织病料采集情况

1.1.2 检测试剂

非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒，批号：ASF20170428P，购自北京世纪元亨公司。

1.2 检测方法

参照非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒说明书进行。

2 结果判定

2.1 结果有效性

阳性对照Cq值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照Cq值≥37并且无特定的扩增曲线，实验结果成立。

2.2 结果

所有样本Cq值均为“无”，结果表明实验中所有被试样品均为ASFV抗原阴性。检测结果见图1。

图1 检测结果

3 讨论

对于非洲猪瘟，世界范围尚未研制出有效疫苗。在非免疫状态下，使用实时荧光PCR进行非洲猪瘟病毒检测，是目前灵敏度及准确度最高的方法。本研究选取51份临床及病理特征与非洲猪瘟相似的病料进行检测，未发现非洲猪瘟阳性的病例。

非洲猪瘟属于外来病，边境地区、生猪养殖贸易活跃区是重点防范地区。此前,四川省已针对高危的5个边境市(州)开展调查，印证了四川省尚未发现非洲猪瘟感染的现状[4,5]。此次研究中，取样地区进一步扩大，增加边境市(州)数量，并加入四川省内地的贸易活跃区，提髙了调查的合理性。

目前，我国境内尚无非洲猪瘟发生的报道，但国际及周边国家疫情形势严峻，本实验延续以往探索的实时荧光PCR病原检测与ELISA抗体检测相结合、高危边境地区抽样的监测模式，为严控非洲猪瘟传入提供了技术储备支撑。未来将继续密切关注各国非洲猪瘟疫情发展态势，根据防控形势变化针对性地加强防控监测，切实做好非洲猪瘟风险防范工作。

[1] 王华,王君玮,徐天刚,等.非洲猪瘟流行病学和诊断方法的研究进展[J].中国兽医科学,2008(6):544-548.

[2] 李洪利,曹金山,王君玮,等.非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].中国畜牧兽医,2012,39(6):37-40.

[3] 张永强,吴晓东,张志亮.非洲猪瘟的流行历史与现状[J].中国动物检疫,2015,32(9):11-15.

[4] 邓飞.阻断ELISA法检测非洲猪瘟抗体[J].四川畜牧兽医，2016(6):22-23.

[5] 张睿,裴超信,张毅,等.实时荧光PCR检测非洲猪瘟病毒[J]. 猪业科学, 2017, 34(5):48-49.