盐酸林可霉素原料药稳定性研究

刘学威，王灵灵，薛 娟，李贵文，王留国，秦宝福

(1.西北农林科技大学，陕西 西安 712100；2.天方药业有限公司，河南 驻马店 463000)

盐酸林可霉素是一种高效的抗革兰阳性菌的抗生素，在体内分布广。可进入骨髓和骨组织，临床广泛用于呼吸系统骨髓炎及软组织感染等病症的治疗,尤其适用于对青霉素和红霉素过敏的病人[1]。本研究采用极限试验法加快盐酸林可霉素中组分的分解变化，以高效液相色谱(HPLC)法测定其含量变化，考察盐酸林可霉素产品在运输过程中产品的稳定性。

1 仪器和材料

1.1 仪器

HWS-250智能型恒温恒湿箱(宁波海曙赛福试验仪器厂)，仪器CP225D天平(北京赛多利斯有限公司)，DK-S22型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设备有限公司)，KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DL31卡尔菲休氏水分滴定仪(瑞士梅特列公司),Agilent1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)。

1.2 试剂

乙腈，甲醇，氨水，超纯水，盐酸林可霉素标准品批号n○3，杂质鉴别标准品n○1(来源EDQM)，盐酸林可霉素样品批号A1、A2、A3(天方药业有限公司)。

2 方法和结果

2.1 稳定性考察指标

2.1.1 色谱条件

色谱柱：250 mm×4.6 mm×5μm，SUPELCOSIL LC-8-DB，顶端封尾碱基去活的辛烷基甲硅烷基硅胶为填充剂；柱温：50℃；检测波长：210 nm；流速：1 mL/min；进样量：20μL；

pH值6.1缓冲液：(取34g的浓磷酸溶解于900mL的色谱级纯化水中，用浓氨水调pH值至6.1，再用色谱级纯化水稀释至1000 mL)；

流动相∶甲醇∶乙腈∶缓冲液=8∶17∶75(V∶V∶V)，混匀后用微孔滤膜(φ0.45μm)过滤备用。

2.1.2 对照品制备

取25.0 mg的盐酸林可霉素对照品，精密称定，置于10.0 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。

2.1.3 供试品溶液制备

取25.0 mg的盐酸林可霉素样品，精密称定，置于10.0 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。

2.1.4 线性关系考察

取对照品100 mg，精密称定，置于20 mL容量瓶中，用流动相溶解定容摇匀，制成相对标准浓度200%的对照品贮备液，然后用流动相分别配制成0.1、0.4、0.8、1.0、1.2倍对照品溶液，每个样进样3次，记录峰面积。取每个样品平均值，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y=7.0×10-5X-0.0199，相关系数R2=0.99983，r=0.9991。结果表明盐酸林可霉素在0.0003～3.0 mg/mL的范围内有良好的线性关系。

2.1.5 精密度试验

取上述1.0倍浓度盐酸林可霉素对照液，连续进样6针，峰面积RSD值为0.07%，进样精密度高，重复性好

2.1.6 定量限与检测限试验

将对照液逐步稀释，信噪比约大于等于10的浓度为定量限浓度，信噪比约大于等于3的浓度为检测限浓度。定量限要低于忽略限度。经过确认该方法的定量限浓度为0.0003 mg/mL，相对标准浓度0.03%；检测限浓度为0.00009 mg/mL，相对标准浓度0.009%。

2.1.7 溶液稳定性试验

将供试样品溶液每小时进样一次，考察24h内溶液的稳定性，主成分盐酸林可霉素的峰面积以RSD值计算(RSD不得大于0.85%)，林可霉素B和其他有关物质的含量的绝对值在±0.1%，并不得检查出新的杂质，否则认为溶液不稳定，需要在溶液变化发生之前进样。对24次进样结果分析后，主成分盐酸林可霉素RSD为0.23%，杂质A绝对值0.0%，杂质B绝对值0.0%，总杂质绝对值0.0%，林可霉素B绝对值0.0%。说明盐酸林可霉素供试液在24 h内是稳定的。液相色谱图如图1。

图1 液相色谱图

方法学考察结果表明，该方法专属性强，精密度高，定量限与检测限低于忽略限度，线性关系良好，浓度范围宽，溶液在24 h内稳定性良好，适合本试验对盐酸林可霉素含量与有关物质的检测。

2.1.8 样品的测定

分别将对照品溶液与供试品溶液按上述色谱条件测定，记录峰面积，计算含量与有关物质。

2.2 方法

极限试验：取市售批号A1、A2、A3三批，按照模拟市售包装成小桶状，将样品在60℃±2℃，RH75±5%的条件下放置2个月，分别于第一个月末和第二个月末取样检测，如果检测结果不合格停止试验，如果试验正常放入25℃±2℃，RH60±5%智能恒温恒湿箱中继续考察。

长期试验：将样品放在25℃±2℃，RH60±5%智能恒温恒湿箱中，以极限试验结束时间为0个月，每年检测一次至48个月，按时取样考察。如果不合格停止试验。

3 结果与讨论

3.1 极限试验结果

在进行两个月极限试验后，盐酸林可霉素的性状与外观均未发生变化，把水分和液相的检测结果输入Minitab处理后如图2。

图2 水分、林可霉素B、含量、总杂质与时间的散点图

通过统计表可知在极限试验2个月后，水分有轻微的升高。盐酸林可霉素主成分RSD值变化分别为0.27%、0.35%、0.25%；林可霉素B和有关物质变化均在±0.1%以内。在目前使用的包装样式下，盐酸林可霉素具有较好的稳定性。把水分和总含量结果分别用Minitabe稳定性考察工具进行处理，结果如图3和图4。

图3 所有批次的稳定性(水分)

图4 所有批次的稳定性(含量)

根据结果分析，盐酸林可霉素在极限试验中水分合格方程为：水分=0.0407+0.000833月，在极限条件下推测约3.8月水分将不合格。

Minitab计算含量回归方程如下：

批次

A1 含量 = 0.99317 - 0.002167 月

A2 含量 = 0.99317 - 0.002167 月

A3 含量 = 0.99750 - 0.002167 月

估计稳定期

规格下限 = 0.96 规格上限 = 1.02

稳定期 = 以 95% 确信至少 50% 的响应在规格限内的时间期间

批次 稳定期(月)

A1 8.8686

A2 8.8686

A3 9.9833

整体 8.8686

经过分析，在极限条件下约8.9月盐酸林可霉素含量能够符合质量要求。

盐酸林可霉素的极限稳定性结果说明本包装在高温高湿复杂环境中2个月能够保证产品质量。经过极限试验后对盐酸林可霉素长期稳定性是否影响，需要进行长期稳定性试验。

3.2 长期试验结果

以极限试验结束时间为0个月，把上述样品置于25℃±2℃、RH60±5%智能恒温恒湿培养箱中，分别于第12、24、36、48个月取样分析，并与0月结果比较，判断本品的稳定性。

把所有批次试验结果输入Minitab后进行处理分析结果如图5和图6。

图5 水分、林可霉素B、含量、总杂质与月的散点图

在长期试验中，水分有较好的稳定性无显著变化(P>0.05)；林可霉素B呈现下降趋势，降解趋势方程 林可霉素B = 0.0236 - 0.000042 月，含量有下降趋势，总杂质变化不大。

图6 杂质A、杂质B、任一杂质、总杂质与月的散点图

在杂质检测中，特定杂质与非特定杂质变化不大，体现出盐酸林可霉素当前包装在常温中具有较好的稳定性。

图7 所有批次的稳定性

使用Minitabe稳定性试验工具分析含量结果后(图7)，得出含量拟合线方程：含量=0.989-0.000147月，稳定期=141.41月。

盐酸林可霉素原料药经模拟包装稳定性试验考察，其试验结果经数理统计表明：水分和含量在极限条件下2个月能够保证产品质量，在极限条件下有关物质也变化甚微。在长期稳定性试验48个月中，盐酸林可霉素的各项指标均变化不大，说明该品种在当前包装条件下性质较为稳定。在试验中空气中湿度对水分测定有直接影响，因此在检定过程中，应注意容器的密封，操作时应尽量减少样品、容器在空气中暴露的时间，以免吸潮影响样品真实值测定。

[1]童 婷.林可霉素发酵培养基优化实验研究[J].江西化工,2006,12(4):173.

[2]刘雅华,史 蕙,黄 蓓,等盐酸林可霉素胶囊稳定性考察[J].贵阳医学院学报，2000，25(1):47.

[3]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)[M]. 北京：中国医药科技出版社，2015.

(本文文献格式：刘学威，王灵灵，薛娟，等.盐酸林可霉素原料药稳定性研究[J].山东化工,2018,47(7):22-25.)