自拟耳复康口服液对小鼠耳廓微循环的影响＊

刘晓斌，郝少君，陈维亮，孙有树，王红宇，郭俊毅，管志江，张正臣

自拟耳复康口服液由人参、红花、酸枣仁、骨碎补、路路通、石菖蒲、枸杞、麦冬等八味药组成；人参：微苦性温，主补五脏气血，正气足，外邪祛也。红花：辛温入肝肾，活血化瘀，瘀行则血活。人参、红花补气、活血化瘀为君；酸枣仁：甘平微酸，入肝脾心脏经，均补五藏中气则耳聪目明，为臣药。骨碎补：味苦性温，入肝肾二经，肝开窍于目，肾寓窍于耳，肝肾足则耳聪目明，路路通：味苦性平，入肝肾，真性大能通行十二经，石菖蒲：辛，微温，出音声，通九窍，九窍通灵故使耳聪目明，骨碎补、路路通、石菖蒲共为佐药；枸杞：甘平微寒，滋补肝肾真阴，强筋骨而壮阳，有滋阴补阳之功，麦冬：微苦，寒，滋养胃阴，脾肾。枸杞、麦冬共为使药。诸药合用具有补气，活血化瘀，通脉养心，通九窍使耳聪目明。用于耳鸣、耳聋等。

根据耳鸣和耳聋病“气虚血瘀”病机，宗“标本兼治”的治则进行组方，该方用药精当，配伍严谨，共奏补气行血、活血化瘀、通脉搜络养心，通九窍之功。与名方补阳还五汤比较，有同“功”异曲之妙。为验证其作用、并探讨其作用特点，笔者观察了耳复康口服液对肾上腺素致急性血瘀症小鼠微循环障碍模型细静脉及细动脉的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 KM雌、雄性小鼠，SPF级，体质量18～22 g，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，动物合格证号：37009200001779。

1.2 实验药品 耳复康口服液，生产厂家：中国人民解放军第371中心医院，生产批号：20150706。脑得生片，生产厂家：广东国医堂制药股份有限公司，生产批号：151101。生理盐水，河南双鹤华利药业有限公司生产，批号：c215123103-2。水合氯醛，天津市光复精细化工研究所，批号：20151014。盐酸肾上腺素注射液，遂成药业股份有限公司，批号：1507252。香柏油，中国上海懿洋仪器有限公司，批号：20150403。

1.3 实验仪器 （1）JM 1000电子秤，余姚记铭称重校验设备有限公司；（2）AL204电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；（3）BI-2000图像分析系统，成都泰盟科学仪器有限公司。

1.4 实验方法

1.4.1 分组及给药［1］取健康小鼠60只按体重大小随机均匀分成5组，即空白组，脑得生片，大、中、小剂量耳复康口服液组，每组12只。空白组给予生理盐水，脑得生片组给予脑得生片（1.35 g/kg，相当于临床剂量的15倍），大剂量耳复康口服液组（30 ml/kg，相当于临床剂量的30倍），中剂量耳复康口服液组（15 ml/kg，相当于临床剂量的15倍）、小剂量耳复康口服液组（7.5 ml/kg，相当于临床剂量的7.5倍），给药1次/d，连续给药7 d，于第7天早上给药1 h（禁食不禁水12 h）后开始实验。

1.4.2 对正常小鼠耳廓微循环的作用 用10%的水合氯醛按0.03 ml/10 g给小鼠腹腔注射麻醉，用小剪刀剪去小鼠耳廓上的细毛，将麻醉好的小鼠腹部向下固定在小鼠观察台上，调节耳托高度，使小鼠的耳廓平整地展开在耳托上，并滴加1～2滴香柏油在其耳廓上，然后将观察台置于显微镜的载物台上，用全自动图像分析仪观察各组小鼠耳廓微动脉（A）、微静脉（V）管径［2］。调节视野范围，使正常小鼠耳壳微循环情况相似。

1.4.3 对急性血瘀症小鼠耳廓微循环的影响 各组小鼠测定给药后小鼠耳廓微动脉、微静脉管径后，尾静脉注射盐酸肾上腺素注射液（10 mg/kg）前后，分别观察各小鼠耳廓微动脉（A）、微静脉（V）管径［3］。

1.4.4 统计学方法 数据分析用SPSS 17.0医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差（x±s）表示，以 P＜005 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 耳复康口服液对正常小鼠耳廓微循环的影响从表1可看出，与空白组相比，大、中剂量耳复康口服液组及脑得生组对正常小鼠耳廓微静脉管径有不同程度地扩张，而小剂量耳复康口服液组对正常小鼠耳廓微静脉管径及大中小剂量耳复康口服液组及脑得生组对正常小鼠耳廓微动脉管径有不同程度的收缩，但均无统计学意义（P＞0.05）。说明耳复康口服液对小鼠耳廓微循环无影响。

2.2 耳复康口服液对急性血瘀症小鼠耳廓微循环的影响 从表2可知，与肾上腺素前相比，空白组小鼠耳廓微静脉管径、微动脉管径的减少，抑制血液流速的减慢，说明急性血瘀症小鼠耳廓微循环造模成功。与模型组相比，大剂量耳复康口服液组可显著对抗肾上腺素所致小鼠耳壳细静脉管径的收缩（P＜0.01），中剂量耳复康口服液组和脑得生组可明显对抗肾上腺素所致小鼠耳壳细静脉管径的收缩（P＜0.05）；大、中、小剂量耳复康口服液组和脑得生组均可显著对抗肾上腺素所致小鼠耳廓细动脉管径的收缩（P＜0.01）。

表1 耳复康口服液对正常小鼠微循环障碍模型细静脉的影响

3 讨论

血瘀症现代临床病理学表现主要为体循环和微循环障碍，该文主要观察微循环。研究微循环的意义在于可从微观角度更加深入地了解生命活动，可进一步地认识到发病的机制，开展疾病防、诊、治的研究具有重要意义，同时可全面分析病情、预后估计、提高临床疗效等。而微循环是维持组织正常功能及组织代谢的保证也在机体局部血液供应中起重要的作用［4］。评价微循环可通过观察微循环的3个指标，即微血管管径、毛细管网交点计数、微血管流速［5］的变化。实验观察了微血管管径，即微静脉和微动脉管径。

肾上腺素兼有α受体和β受体激动作用，皮肤、黏膜及腹腔内脏血管尤其是微动脉和微静脉分布着大量的 α 受体［6，7］。 注射肾上腺素后，可与其结合后，激活了与磷脂酶相连的鸟苷酸调节蛋白，形成α-鸟苷三磷酸，激活磷脂酶C，水解膜磷脂中的磷脂酰肌醇二磷酸，生成肌醇三磷酸和二酰甘油。促使细胞内贮存钙释放为游离钙，胞质钙浓度增加，激活钙依赖性蛋白激酶，使得底物磷酸化，进而产生缩血管的作用，即微循环障碍模型［8，9］。 该实验中小鼠尾静脉注射肾上腺素后，局部微血管舒缩功能紊乱导致微循环障碍。实验结果表明，耳复康口服液对正常正常小鼠微静脉、微动脉管径无明显作用，说明耳复康口服液对小鼠耳廓微循环实验无影响。耳复康能抑制急性血瘀症小鼠耳廓微静脉、微动脉管径的缩小，抑制血液流速的减慢，能有效缓解肾上腺素导致的急性血瘀症小鼠耳廓微循环障碍。

耳复康口服液临床主要用于耳鸣、耳聋及气虚血瘀性中风等症，疗效较好，耳鸣和耳聋是耳鼻咽喉—头颈外科常见疾病和症状，耳鸣和耳聋的病因主要和病毒感染，微循环障碍，神经本身发生疾病等有关［10］。治宜活血化瘀、祛风除湿、温经通络之法。耳复康口服液能改善急性血瘀症小鼠耳廓微循环障碍，提示了耳复康口服液具有活血化淤，改善微循环障碍的作用，是耳复康口服液治疗耳鸣、耳聋的机制之一，从而为其临床治疗耳鸣、耳聋进一步提供了实验依据。

（志谢 本实验在河南中医药大学苗明三教授指导下完成，特此致谢！）

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［2017－11－30 收稿，2017－12－27 修回］