UPLC-MS/MS法测定多潘立酮口腔崩解片的含量

谢 君，吕玲燕，冯星月，蒋志涛，余 辉，陈晓峰

0 引言

多潘立酮(Domperidone，DP)，又称吗丁啉，化学名为5-氯-1-{1-[3-(2，3-二氢-2-氧代-1H-苯并咪唑-1-基)丙基]哌啶-4-基}-1，3-二氢-2H-苯并咪唑-2-酮，是一种合成的苯并咪唑类化合物[1-3]。DP为选择性的外周多巴胺受体拮抗剂，通过阻断胃壁细胞上的多巴胺受体增强胃蠕动，并产生较强的止吐作用，临床上主要用于消化不良、腹胀、嗳气、恶心、呕吐、腹部胀痛[4-6]。

DP口服后存在明显的首过效应，导致其生物利用度低，仅为12.7%～17.6%[7]。口腔崩解片(Orally disintegrating tablets，简称ODT)是一种新型的口服固体剂型，该类制剂在无水或少量水存在的情况下于口腔中迅速崩解，随吞咽动作进入消化道吸收，可以减少首过效应对药物的破坏。将多潘立酮制成口腔崩解片，一方面可以提高其生物利用度，另一方面可以提高患者的用药依从性，尤其适用于老年、吞咽困难患者和儿童等[4]。目前，多潘立酮口腔崩解片的含量测定多采用高效液相色谱法，故本研究采用UPLC-MS/MS法来测定多潘立酮口腔崩解片的含量，旨在快速、灵敏、准确地实现定量的要求。

1 仪器与试药

1.1 试药 多潘立酮对照品，纯度99.7%(批号：100304-201103)，购于中国食品药品检定研究院。多潘立酮口腔崩解片购自R药业有限公司(规格：10 mg，批号：20170202、20170302、20170321)。甲醇(色谱纯，德国Merck公司)，水为超纯水，乙酸铵为分析纯。

1.2 仪器 ACQUITY型UPLC系统(包括自动进样器，在线脱气机和四元泵溶剂系统，Xevo TQ检测器，MassLynxTM质谱工作站软件，Waters公司)；MS105电子天平(上海梅特勒-托利多有限公司)；SCQ-250超声波清洗器(上海盛普机械制造有限公司)；Drict-Q5超纯水机(法国Millipore公司)。

2 方法与结果

2.1 检测条件 色谱条件：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)；流动相：甲醇-2 mmol/L乙酸铵水溶液(80∶20，V/V)；流速：200 μL/min；柱温：35 ℃；进样量：2 μL。

质谱条件：离子源：ESI；离子化模式：正离子；检测电压：3.25 kV；离子源温度：120 ℃；脱溶剂气流量500 L/h；脱溶剂气温度：350 ℃；锥孔电压50 V，碰撞能量30 V。定量模式：多离子反应监测模式(MRM)；用于定量分析的离子反应为多潘立酮m/z426.32→m/z175.21。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 称取干燥至恒重的多潘立酮对照品适量，精密称定后用甲醇溶液溶解并稀释至浓度为12.4 μg/mL的对照品储备液。所有对照品溶液在4 ℃下储存。

2.2.2 供试品溶液的制备 取20片药片研碎，称取相当于1片的重量，置于100 mL的容量瓶中，加甲醇溶解，超声15 min，稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液100 μL置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 分别吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2 μL注入液相色谱仪，结果见图1。

2.3.2 线性范围考察 精密量取“2.2.1”项下储备液适量，用甲醇溶液稀释至系列浓度为0.006 2、0.062、0.31、1.65、3.1、6.2 μg/mL的标准溶液。分别进样2 μL，记录峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，多潘立酮对照品的浓度(X，μg/mL)为横坐标进行线性回归，结果表明在0.006 2～6.2 μg/mL范围内，多潘立酮的峰面积与浓度具有良好的线性关系，标准曲线方程为Y=926 410 X+28 730,相关系数r=0.996 3，最低定量限为6.2 ng/mL。

2.3.3 精密度试验 取“2.2.1”项下浓度为0.062、0.31、3.1 μg/mL的多潘立酮对照品溶液分别作为低、中、高3种浓度水平，同日内分别进行测定，重复进样6次，连续测定3 d，记录峰面积，计算日内精密度的相对标准偏差RSD值，分别为0.93%、1.02%、0.98%，日间精密度的RSD值分别为1.23%、1.15%、1.18%，结果表明，日内、日间精密度的相对标准偏差RSD值均小于2%，说明本方法的精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 取“2.2.2”项下的供试品溶液于0、2、4、6、8、10、12、24 h分别进行测定，重复进样5次，记录峰面积，结果峰面积之间基本无变化，RSD为0.42%(n=6)，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 重复性试验 精密称取同一批号的样品6份，按试验方法中供试品溶液配制，分别进样，记录峰面积，结果6份供试品溶液的平均标示含量为99.21%，RSD为0.25%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品细粉适量(约相当于多潘立酮10 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入多潘立酮对照品约10 mg，加甲醇溶解，超声15 min，取出，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm的微孔滤膜过滤，平行制备5份。

图1 对照品和样品中多潘立酮的MRM色谱

取2 μL注入液相色谱仪，测定并计算，多潘立酮的平均回收率为100.23%(n=6)，RSD为1.78%。

2.4 样品含量测定 分别取3个批号的多潘立酮口腔崩解片后精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱与质谱条件依法测定，利用已建立的标准曲线，计算3个批号的多潘立酮口腔崩解片中多潘立酮的含量，结果含量分别为标示量的100.22%、100.26%、100.15%(n=3)。结果表明，该厂所生产的多潘立酮口腔崩解片含量符合要求，含量均在标示量的90.0%～110.0%范围内。

3 讨论

本研究比较了不同规格的色谱柱，结果显示，ACQUITYTM UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)色谱柱的保留及分离效能更好。试验中分别尝试采用正、负2种离子模式，发现正离子模式下的离子化效率明显高于负离子模式。同时，考察了不同的流动相体系及比例，发现甲醇与2 mmol/L乙酸铵水溶液的比例为80∶20时出峰时间合适，峰形较好。

目前已有文献报道可采用HPLC法[8-10]测定多潘立酮原料及制剂的方法，为考察多潘立酮口腔崩解片的疗效，本文采用灵敏度更高的UPLC-MS/MS法测定样品中多潘立酮的含量，在0.006 2～6.2 μg/mL范围内线性关系良好，最低定量限可达6.2 ng/mL，精密度、稳定性、重复性、回收率均符合要求，进一步提高了多潘立酮含量测定的标准。

参考文献：

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