维吾尔药材石榴花质量标准研究

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新疆维吾尔自治区药物研究所/新疆维吾尔药重点实验室，新疆　乌鲁木齐　830004

石榴花为石榴科植物石榴PunicagranatumL.的干燥花瓣，是维吾尔族习用药材，维语名为阿娜尔、古丽娜。维医认为其性质二级干寒，具有收敛止泻，止汗止血的作用，常用于腹泻日久；外用于治疗出血不止，口舌生疮，脱肛痔疮，口臭牙疼，皮肤瘙痒[1]。被收载于《卫生部药品标准·维吾尔药分册》(1999年版)，《中华本草·维吾尔药卷》(2005年版)。研究发现，石榴花中含有酚酸类，黄酮类、挥发油、萜类、葡萄糖、果糖等化学成分，其中没食子酸含量相对较高[2-3]，具有抗菌、抗病毒、降压降脂、抗氧化、抗糖尿病、保肝护肝等药理活性[4-5]。在石榴花鉴别项中，仅有《维吾尔药分册》中有关于性状及显微鉴别，而无其他水分、灰分、薄层等鉴别相关项。随着市场对石榴花药材需求量逐年增加，药材的质量控制与评价已成为当务之急。研究通过对不同批次石榴花药材进行薄层，显微定性鉴别，并对药材中水分、总灰分、水溶性及醇溶性浸出物进行检测，根据测定数据，制定相应的限量指标，旨在为维吾尔药材石榴花的质量标准提供科学试验依据。

1　仪器与材料

1.1仪器MS105DU型电子天平(METTLER TOLEDO)；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)；SXZ-4-10型马弗炉(北京市永光明医疗仪器有限公司)；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；CX-31型生物显微镜(日本OLYMPUS)；YOKO-ZS型紫外分析摄影仪(武汉药科新技术开发公司)；CA-1115型冷却水循环装置(上海爱朗仪器有限公司)；UPC-I-10T型优普超纯水器(四川优普超纯科技有限公司)。

1.2材料乙醇(分析纯，批号：20170310，天津市河东区红岩试剂厂)；甲醇(分析纯，批号：20160721，天津永晟精细化工有限公司)；乙酸乙酯(分析纯，批号：20160228，天津市风船化学试剂科技有限公司)；石油醚(分析纯，批号：20160608，天津市河东区红岩试剂厂)；环己烷(分析纯，批号：20100418，天津市福晨化学试剂厂)；甲酸(分析纯，批号：20160926，天津市风船化学试剂科技有限公司)；三氯化铁(分析纯，批号：20130609，天津市化学试剂三厂)；甲苯(分析纯，批号：20150628，天津市风船化学试剂科技有限公司)；盐酸(分析纯，批号：20170926，北京化工厂)；没食子酸对照品(分析纯，批号：110831-200803，中国药品生物制品检定所)；薄层层析硅胶G板(批号20141225，青岛海洋化工有限公司)。石榴花药材实地采集或由药材公司购买，均经新疆维吾尔自治区药物研究所何江副研究员鉴定为石榴的干燥花瓣，凭证样本存放于新疆维吾尔自治区药物研究所标本室。

2　方法

性状通过对该药材外观、质地、断面、臭、味、测量等记录相关数据；水分测定依据《中国药典》2015年版第四部通则0832水分测定法烘干法进行；灰分测定依据《中国药典》2015年版第四部通则2302灰分测定法进行；浸出物测定依据《中国药典》2015年版第四部通则2201浸出物测定法进行；薄层色谱鉴别依据《中国药典》2015年版第四部通则0502薄层色谱法进行；显微鉴别依据《中国药典》2015年版第四部通则2001显微鉴别法进行。

3　结果

3.1性状本品多皱缩，有的破碎，完整者展平后呈卵形或卵圆形或，长20～30 mm，宽20～25 mm。花瓣红色或暗红色，羽状网脉。主脉基部宽至先端渐细，顶端圆形，边缘微波状，具疏而浅的钝锯齿，基部宽碶形或近圆形。薄而质脆，易碎。气微，味苦涩。

3.2显微鉴别本品粉末红棕色。花冠表皮细胞表面呈类多角形或不规则形。壁波状弯曲，表面有细密弯曲的角质纹理。侧面观外壁向外隆起，呈乳突状，边缘微波状。螺纹导管常见，直径10～20 μm；网纹导管、梯纹导管偶见。花粉粒呈类圆形或椭圆形，淡黄色或近无色，直径14～22 μm ，具3孔沟。薄壁细胞类圆形或长圆形。花丝细胞类长方形，壁薄，表面有纹理。

3.3水分、灰分、浸出物测定通过对10批次维吾尔药材石榴花进行测定，水分测定结果最高为9.36%，最低为6.64%，平均为7.46%，暂定水分不得超过10%。总灰分测定结果最高为14.14%，最低为6.34%，平均为8.54%，暂定总灰分不得超过15%。浸出物测定结果浸出物量最高为65.07%，最低为61%，平均为62.91%，暂定浸出物不得低于55%。

表1　维吾尔药材石榴花水分、灰分、浸出物测定(%)

3.4薄层鉴别取本品粉末2 g，加无水乙醇30 mL，超声处理60 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使之溶解，即为供试品溶液。取没食子酸[3，6-7]作为对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4　讨论

在浸出物条件筛选过程中，选取1批次维吾尔药材石榴花，采用水和醇分别进行冷浸法和热浸法测定，测定结果显示水溶性浸出物浸提过程中热浸大于冷浸，醇溶性浸出物量远大于水溶性浸出物量。设置乙醇浓度30%、50%、70%、90%、100%五个浓度梯度，在醇溶性浸出物浸提过程中随着乙醇浓度的增加其浸出物量反而减少，当乙醇浓度为30%时，其浸出物量最大。冷醇浸提过程中浸出物量在26.1%～55.19%之间，热醇浸提过程中浸出物量在41.77%～63.04%之间，所以采用30%乙醇对10批次维吾尔药材石榴花进行热醇浸提。

薄层鉴别条件筛选过程中，根据文献选取了绿原酸[8-11]和没食子酸作为鉴别的对照品溶液，以绿原酸为对照品溶液，以不同的展开剂进行试验，结果不是很理想，目的斑块区分较为困难或是模糊不清，分离度较差。以没食子酸作为对照品溶液，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸与环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂时，对展开剂的比例进行适当的调整，供试品能基本上都能鉴别出来，与对照品在相应的位置能显示出相同颜色的斑块。根据实验结果，后者作为展开剂时，效果最为理想，所以试验决定采用没食子酸作为对照品溶液，环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶6∶1)为展开剂，以1%三氯化铁乙醇溶液作为显色剂，结果可以满足实验的要求。最终，以此薄层条件对10批次维吾尔药材石榴花进行薄层鉴别研究。

研究对维吾尔药材石榴花进行了质量标准研究，其水分、灰分、浸出物限量测定，薄层色谱及显微结构相关定性鉴别研究，其试验相关数据为维吾尔药材石榴花的质量标准及评价提供科学试验依据。

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[3]李丽蓉, 金晨, 廖辉,等. HPLC法同时测定维药古丽娜中3个主要活性成分的含量[J]. 药物分析杂志, 2016(4):611-616.

[4]李海霞, 王钊, 刘延泽. 石榴科植物化学成分及药理活性研究进展[J]. 中草药, 2002, 33(8):765-766.

[5]张立华, 孙晓飞, 张艳侠,等. 石榴花化学成分及生物活性研究进展[J]. 山东农业科学, 2009(3):33-35.

[6]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [M]. 北京：中国医药科技出版社，2015：93-94.

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[11]张敏捷, 朱萍, 李玎,等. 苹果花粉中异鼠李素和绿原酸鉴别及总黄酮测定[J]. 药物分析杂志, 2016(4):617-623.