猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒和大肠杆菌混合感染的诊断

丁尊俄，周碧君，王开功，胡兴义，张 海，张 旭

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

2017年1月贵州省某猪场的新生仔猪出现精神沉郁、消瘦、水样腹泻、呕吐等临床症状。为了解该猪场的疫病感染状况，根据剖检病理变化、实验室诊断等方法，确诊为猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒和大肠杆菌混合感染。笔者就本病例诊治过程做出总结与分析，以期为类似病例诊断做出一定的实践参考。

1　发病情况

该猪场存栏猪约1500头，2016年12月下旬3日龄左右哺乳仔猪约20%发生水样腹泻，10日龄哺乳仔猪约50%发生水样腹泻和呕吐，部分哺乳仔猪已经死亡，另外母猪也有水样腹泻发生。母猪产前使用过腹泻疫苗进行跟胎免疫，但效果不佳。

2　临床症状

发病仔猪大都出现消瘦、水样腹泻、四肢无力、皮肤苍白、精神萎靡、被毛粗乱、甚至食欲废绝。根据临床症状初步怀疑是猪病毒性腹泻、细菌和伪狂犬病毒感染。

3　病理剖检变化

通过对2头1月龄内的仔猪进行剖检发现：猪只的腹股沟淋巴结充血（见图1）；肝脏坏死（见图2）；肺脏坏死（图见3）；肾脏针尖状出血点；肠段充气肿胀（见图4）。

图1　腹股沟淋巴结充血

图2　肝脏坏死

图3　肺脏坏死

图4　肠段充气、肿胀

图5　细菌在血平板培养结果

图6　细菌在麦康凯培养基上菌落形态

4　实验室诊断

4.1 细菌分离培养及鉴定

将送检的2头仔猪的肝脏混合物接种于鲜血琼脂平板，37 ℃培养16 h，见圆形隆起，边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、灰白色小菌落（见图5），在鉴别性培养基（麦康凯琼脂培养基）上形成粉红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐的小菌落（见图6）；将纯化后细菌进行革兰氏染色后镜检，为革兰氏阴性、两端钝圆的短小杆菌（见图7）；取经纯培养的细菌在无菌条件下进行三糖铁试验，同时接种生化管。三糖铁试验结果出现产气现象，生化试验结果与典型大肠杆菌一致。

图74　×100倍革兰氏阴性杆菌

图8　部分药敏试验结果

表1　分离细菌药敏试验结果

图9　猪流行性腹泻病毒RT-PCR 扩增结果

图10　伪狂犬病毒RT-PCR扩增结果

4.2 药物敏感试验

将纯化的革兰氏阴性杆菌（大肠杆菌）接种于普通琼脂平板进行药物敏感试验，结果（见图8、表1）显示，猪病速治穿心莲、复方磺胺和氟苯尼考等药物可作为本菌的敏感药物使用。

4.3 病原核酸检测

取送检的2头1月龄内的仔猪小肠和胃内容物加入适量的DEPC水研磨成匀浆，分别离心取上清，采用北京世纪元亨RNA试剂盒提取总RNA，分别针对猪流行性腹泻病毒(目的片段964 bp)、猪轮状病毒（目的片段270 bp）和猪传染性胃肠炎（目的片段859 bp）进行RT-PCR扩增；同时用北京世纪元亨DNA试剂盒提取总DNA，针对伪狂犬病毒（目的片段217 bp）进行PCR扩增。其扩增产物均通过1.2%琼脂糖凝胶电泳检测，结果见图9、图10。送检的2 头1月龄内仔猪均检出猪流行性腹泻病毒特异性片段，其中1头检出了伪狂犬病毒特异性片段，猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒未检出。

5　结果与讨论

通过对送检病猪进行猪流行腹泻、猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒、伪狂犬病原核酸检测和细菌分离鉴定。结果显示，送检的2头1月龄内仔猪中，猪流行性腹泻病毒和伪狂犬病毒为阳性，且有大肠杆菌感染；猪传染性胃肠炎病毒为阴性和猪轮状病毒为阴性。猪流行性腹泻和伪狂犬疫病因尚无特效药进行治疗，只能通过目前可行的疫苗免疫接种来预防该病的发生[1]；对于猪致病性大肠杆菌，它被认为是养猪业最常见的疫病，可引起仔猪黄、白痢和水肿病等[2]，可以选择对其敏感性高的药物，如：氟苯尼考、复方磺胺等交替使用。同一猪场感染多种病原也来越常见，养猪人不容忽视[3-4]。因此，在做好生物安全措施，加强饲养管理的同时，也要注重疫苗免疫接种和选择合理的免疫程序，必要时进行紧急免疫接种，加强保温，给猪群一个干净又舒适的环境，减少疫病的发生，从而获得最大效益。

[1] 陶长城，朱保权，李波. PEDV、PR V和PCV2混合感染引起新生仔猪腹泻的诊治与分析[J].湖北畜牧兽医 ，2015，36(5)：15-16.

[2] 周华林，熊江林，王长义，等. 猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J].中国畜牧兽医 ，2009，36(1)：109-111.

[3] 刘洋，库旭钢，刘晓丽，等.猪流行性腹泻病和猪圆环病毒病混合感染的诊治[J].中国畜牧兽医 ，2015，42(10)：2753-2761.

[4] 宋春莲.PRV和PCV2混合感染仔猪致病特点及猪伪狂犬病防控技术研究[D].扬州：扬州大学，2016.