仔猪传染性胸膜肺炎母源抗体消长规律的研究

张　艳， 刘海隆， 林哲敏， 曹宗喜， 谭树义

(1.海南省农业科学院畜牧兽医研究所，海南海口 571100；2.海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海南海口 571100)

猪传染性胸膜肺炎(porcie contagious pleuropneum，简称PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae，APP)引起的一种以肺脏出血、坏死及胸膜纤维素性粘连为特征的呼吸道疾病，在世界各地广泛流行，给养猪业带来巨大经济损失，是国际公认的危害现代养猪业的5大疾病之一[1-2]。近些年来，随着规模化、集约化养猪业的兴起，该病的流行呈迅速上升趋势。笔者经血清学调查发现，海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎的抗体阳性率达到37.65%(436/1 286)[3]。因此，该疾病需要引起养猪业的高度关注。

合理接种疫苗是控制该病的有效措施之一，然而仔猪如何才能获得有效的免疫，关键在于排除母源抗体干扰，确定合适的首免日龄。总所周知，如果仔猪的母源抗体水平过高，接种猪传染性胸膜肺炎疫苗后疫苗会被母源抗体中和，使仔猪产生不了抗体，得不到应有的保护；母源抗体过低接种疫苗，仔猪在免疫空白期则易受环境中胸膜肺炎放线杆菌的侵袭。因此，本研究于2015年2月检测了产前接种猪传染性胸膜肺炎疫苗的母猪所产仔猪在不同日龄的猪传染性胸膜肺炎母源抗体水平，旨在为猪场猪传染性胸膜肺炎免疫程序的制定，特别是首免日龄的确定提供依据。

1　材料与方法

1.1　试验动物

以经ApxlV ELISA试剂盒检测为阴性的18头健康经产杜长大三元杂交母猪及其所产18窝仔猪(每窝用4头，共计72头)作为试验动物，由海南澄迈新华达猪场提供。

1.2　疫苗

猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型)(批号140704，武汉科前动物生物制品有限责任公司)，猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型)(批号1410005，中牧实业股份有限公司)。

1.3　主要试剂

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV-ELISA抗体检测试剂盒，购自武汉科前动物生物制品有限责任公司，批号为141004；猪胸膜肺炎放线杆菌(1-9-11型)抗体检测试剂盒，猪胸膜肺炎放线杆菌(4-7型)抗体检测试剂盒，猪胸膜肺炎放线杆菌(Ⅱ型)抗体检测试剂盒，购自法国ID-VET公司。

1.4　试验设计

1.4.1试验分组选取健康经产母猪随机分为3组进行双盲试验，A组(武汉科前猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗组)、B组(中牧猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗组)、C组(非免疫对照组)，每组6头。母猪所产仔猪的组别同母猪，即A组母猪所产的仔猪归为A组，B组母猪所产的仔猪归为B组，以此类推。

1.4.2试验母猪免疫A、B 2个试验组的母猪，分别于产前6周和产前2周按照疫苗厂商提供的免疫途径和剂量免疫接种，C组母猪在产前6周和产前2周颈部肌肉注射2.0 mL生理盐水。

1.4.3试验仔猪采血及抗体检测试验母猪于二免后14 d耳静脉采血分离血清；试验仔猪分别于10、20、28、35、42、50、60和70日龄通过前腔静脉采血并分离血清。

按照ApxIV-ELISA抗体检测试剂盒说明书进行检测，在630 nm处测量和记录样品和对照的吸光度。检测结果的判定标准：S(样品孔D630 nm)≥P(阳性对照孔D630 nm)×0.25，判为阳性；如果S

弃去经ApxIV-ELISA抗体检测为阳性的血清，阴性血清按照猪胸膜肺炎放线杆菌ELISA抗体检测试剂盒说明书进行检测，在450 nm 测量和记录样品和对照的吸光度。检测结果的判定标准为：S/P<0.3为阴性；S/P≥0.4为阳性；0.3≤S/P<0.4为可疑。

1.5　试验结果统计与分析

试验结果以“平均值±标准差”表示，用SPSS 17.0统计软件对试验数据进行方差分析。

2　结果与分析

2.1　试验母猪的猪传染性胸膜肺炎抗体水平

经猪胸膜肺炎放线杆菌抗体检测试剂盒检测后，不同厂家生产的猪传染性胸膜肺炎疫苗在二次免疫后14 d均能产生合格的免疫抗体。

2.2　试验仔猪传染性胸膜肺炎感染情况

经ApxIV-ELISA抗体检测，对照组有3头仔猪血清呈阳性，其余试验猪均呈阴性(表1)。

2.3　试验仔猪传染性胸膜肺炎母源抗体检测结果

由表2、表3可知，试验仔猪在10日龄时均可获得Ⅰ型胸膜肺炎放线杆菌抗体(抗体阳性率均为100.00%)，大部分仔猪可获得Ⅶ型胸膜肺炎放线杆菌抗体(抗体阳性率为91.67%、83.33%)，且抗体均维持在较高水平。但是，随着仔猪日龄的增长，抗体水平和阳性率整体上持续下降。其中，Ⅰ型胸膜肺炎放线杆菌抗体在A组仔猪42日龄、B组仔猪50日龄时，处于抗体保护临界值(40%)，抗体阳性率低于合格率(70%)；至70日龄，所有仔猪的Ⅰ型胸膜肺炎放线杆菌抗体全部转阴。Ⅶ型胸膜肺炎放线杆菌抗体在试验仔猪28日龄时已略低于抗体保护临界值，抗体阳性率低于合格率；至60日龄，所有仔猪的Ⅶ型胸膜肺炎放线杆菌抗体全部转阴。Ⅱ型胸膜肺炎放线杆菌抗体仅在B组的9头10日龄仔猪体内被检测到，抗体阳性率为37.50%，且随着仔猪日龄的增长呈下降趋势，至35日龄所有仔猪的Ⅱ型胸膜肺炎放线杆菌抗体全部转阴。

表1　试验猪PCP的情况统计

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

表2　不同日龄试验仔猪胸膜肺炎放线杆菌抗体水平

注：同日龄同型抗体不同组间标有不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。

表3　不同日龄试验仔猪胸膜肺炎放线杆菌抗体阳性率

3　讨论与结论

由于猪传染性胸膜肺炎的治疗难度较大，多数情况难以完全治愈，目前最为有效的办法就是进行免疫预防[4]。研究发现，仔猪首次免疫时间的确定除了要考虑疫病的流行情况外，主要取决于仔猪的母源抗体水平[5-6]。母源抗体的被动免疫对新生动物十分重要，既能保护幼龄动物免受病原菌侵袭，又具有干扰疫苗免疫的副作用。当母源抗体过高时进行接种，中和疫苗抗原，使抗体上升不明显，不能产生免疫效果，甚至会引起免疫失败[7-8]。因此，在首免前对仔猪进行母源抗体检测尤为重要。

本试验发现，免疫合格的试验母猪所产仔猪在10日龄时均可获得较高水平的Ⅰ型胸膜肺炎放线杆菌抗体，绝大部分仔猪可获得Ⅶ型胸膜肺炎放线杆菌抗体，少数仔猪可获得Ⅱ型胸膜肺炎放线杆菌抗体。但是，试验仔猪所产生的各型胸膜肺炎放线杆菌母源抗体的水平和消长规律存在差异。如Ⅰ型猪胸膜肺炎放线杆菌抗体在42～50日龄时，处于抗体保护临界值，抗体阳性率低于合格率，故仔猪的首免时间应确定在42～50日龄。Ⅶ型胸膜肺炎放线杆菌抗体在试验仔猪28日龄时已略低于抗体保护临界值，抗体阳性率低于合格率，故仔猪的首免时间应确定在28日龄左右。虽然仔猪中有检测到Ⅱ型胸膜肺炎放线杆菌抗体，但其水平较低，不能对仔猪起到较好的保护作用，还须深入研究以获得免疫效果较好的Ⅱ型猪胸膜肺炎疫苗。

由于目前市场上常售的猪传染性胸膜肺炎疫苗一般多为二价和三价疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型或Ⅰ、Ⅶ型)，且猪场猪传染性胸膜肺炎常为多血清型胸膜肺炎放线杆菌感染，故需针对性地同时免疫多价猪传染性胸膜肺炎疫苗。但从试验结果可以看出，Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型猪传染性胸膜肺炎疫苗适宜的首免时间并不相同，且不同厂家的疫苗免疫母猪后，仔猪获得的母源抗体水平和消长也存在差异。这就要求养猪者必须了解其猪场猪传染性胸膜肺炎的血清型及仔猪的母源抗体水平，根据猪场的实际情况来选择适宜的疫苗和免疫程序，才能减少免疫失败，有效防控猪传染性胸膜肺炎。而试验结果也提示我们现有疫苗还存在一些不足，如多价疫苗的首免时间如何统一以获得最佳的免疫效果，有待进一步研究。

参考文献：

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[2]Tobias T J，Klinkenberg D，Bouma A，et al. A cohort study onActinobacilluspleuropneumoniaecolonisation in suckling piglets[J]. Preventive Veterinary Medicine，2014，114(3/4)：223-230.

[3]张艳，刘海隆，林哲敏，等. 海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎的血清学调查[J]. 动物医学进展，2016，37(1)：129-132.

[4]Shin M K，Kang M L，Jung M H，et al. Induction of protective immune responses against challenge ofActinobacilluspleuropneumoniaeby oral administration withSaccharomycescerevisiaeexpressing Apx toxins in pigs[J]. Veterinary Immunology and Immunopathology，2013，151(1/2)：132-139.

[5]姚俊庸，吉艺宽，郑仲华.仔猪猪瘟母源抗体的消长规律及免疫程序制定[J]. 广东畜牧兽医科技，2016，41(2)：23-25，34.

[6]原霖，顾小雪，张硕，等. 规模化猪场猪瘟免疫失败调查及免疫程序优化[J]. 中国兽医杂志，2013，49(7)：27-29.

[7]刘建奇，齐欢欢，刘玉梅，等. 口蹄疫O型灭活疫苗对不同母源抗体仔猪血清中抗体及细胞因子水平的影响[J]. 中国兽药杂志，2016，50(5)：11-14.

[8]赵先萍. 免疫失败的原因分析[J]. 中国畜牧兽医文摘，2016，32(3)：110.