猕猴桃皮中黄酮的提取及优化

(枣庄学院　山东　枣庄　277000)

一、前言

(一)猕猴桃简介

猕猴桃是山茶亚目，猕猴桃中蕴含比较多的肽形式存在的活性物质，主要为抗氧化物质、抗突变成分谷胱甘肽、精氨酸、天然糖醇类物质肌醇、VC、VE、VK多种维生素、叶酸、叶黄素等多种化学成分。尤其以黄酮类物质蕴含丰富。而且Vc储量高以外，被称为果中之王。具有降低两高，降低血压，降低血糖，延缓衰老，抗氧化，延缓炎症引起的疼痛，抗肿瘤等作用。

1.黄酮介绍。黄酮类化合物又称生物类或植物类黄酮，属植物次级代谢产物，于各种植物和庞大真菌中广泛存在,是天然植物成分.属于低分子类。黄酮化合物具有多种药理作用因其特别的理化特性如抵抗癌症，抵抗肿瘤、抵抗衰老、抵抗心脑血管疾病、美容养颜等较多功效,而在当前医学方面，它在人类体内系统循环，防治心脑血管疾病如降低血管脆性、提高通透性，抗肿瘤方面的作用日益明显。并且有的已经作为药品治疗改善人体健康状况。

2.国内外研究黄酮。近年来，国内外研究者对猕猴桃叶、根和果实中的黄酮研讨较多，如王倩等研究超声波辅助提取法对狗枣猕猴桃叶黄酮的提取，采用了乙醇作为提取剂，获得了黄铜提取最优工艺，黄酮得率达9.996%；王菲等利用黄酮体外抗氧化活性得出了黄酮具有较强革除DPPH自由基的能力和还原力，可有效抑制脂质过氧化，而他们研究的正是软枣猕猴桃的总黄酮。Ercan Bursal等更是以总酚和总黄酮的含量研究了猕猴桃的水提取物，并且研究了他们的抗氧化能力。大量实践表明，猕猴桃水提取物对DPPH、ABTS、DMPD和自由基有很好的清除作用，这主要和含有的多酚物质及黄酮有关。Miyuki SHIROSAKI等对小鼠的降血糖功能的研究也是以猕猴桃叶为原料，研究表明，能显著降低小鼠口服淀粉或蔗糖后的血糖水平和猕猴桃叶甲醇提取物有密切联系，其作用机制可能与提取物对淀粉酶和葡萄糖苷酶的抑制作用有关。研究猕猴桃皮中黄酮提取和优化也是在很多前辈的基础上更上一步。

(二)研究目的及意义

作者认为猕猴桃皮作为猕猴桃的副产物也是对于研究具有重大意义。一方面随着人们生活水平的提高，人们对于保健更加重视，致力于提高生活品质，黄酮类化合物作为天然生物活性成分具有很大的潜力与价值。另一方面猕猴桃作为一种资源物质可以让人们更加认识到资源的生物科技利用价值。对于鲜有报道的猕猴桃皮提取黄酮的最佳工艺，采用了单因素和正交试验来优化了总黄酮的提取工艺，开创了猕猴桃活性黄酮物质的提取也具有进步意义。

二、试验方法

(一)工艺流程和操作要点

1.标准曲线的建立。精确称取20mg芦丁标准品，以50% 乙醇定容至100ml。摇匀，制得 0.2mg/ml芦丁标准溶液.分别取3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5、0ml芦丁标准溶液于25ml比色管内。再加入30%乙醇定容至10ml，加入1ml质量浓度为5%的NaNO2，摇匀，静置6min。加入1ml质量浓度为10%的Al(NO3)3，摇匀，静置6min。加入10 ml10%NaOH，以30%乙醇定容至25ml，静置15min后在510nm波长处测定吸光度A。标准曲线的绘制以吸光度为纵坐标，以芦丁溶液浓度(mg/g)为横坐标，得回归方程A=0.0020x+ 0.0004，R2=0.9995。

2.黄酮的提取流程。猕猴桃皮处理→干燥箱烘干至恒重→粉粹至60目→乙醇混合→超声波辅助提取→过滤定容

3.操作要点

(1)黄酮的提取在高于80℃时，有效成分会被破坏。所以在实验过程中要严格控制温度。

(2)热水通常在黄酮提取过程中不宜使用，因为热水提取率较低而且提取时杂质较多。

(3)作者探究食品级黄酮的提取工艺，在提取过程中会有部分黄酮类物质溶出，当然食品级黄酮允许部分杂质存在，且黄酮酚的特征紫外吸收波长为280nm，对测定黄酮含量无明显影响。所以可以进行试验。

(二)单因素试验方法

1.黄酮提取率依照不同乙醇浓度计算。准确称取干燥猕猴桃皮2.0g，分别用30%、40%、50%、60%的乙醇溶液，以料液比为1∶30在50℃下超声提取30min后过滤，定容。测定吸光度，通过上面的回归方程计算提取率，黄酮提取率在不同条件有一定趋势，可确定最优的乙醇浓度。

2.黄酮提取率依照不同料液比计算。准确称取猕猴桃皮2.0g，分别以1:10、1:20、1:30、1:40的料液比，用50%的乙醇溶液，在50℃下超声提取30 min后过滤，定容。测定吸光度，通过上面的回归方程计算提取率，黄酮提取率在不同条件有一定趋势，可确定最优的料液比。

3.黄酮提取率依照不同超声温度计算。准确称取猕猴桃皮2.0g，用50%的乙醇溶液，以料液比为1∶30，分别在30℃、40℃、50℃、60℃下超声提取30min后过滤，定容。测定吸光度，通过上面的回归方程计算提取率，黄酮提取率在不同条件有一定趋势，可确定最优的超声温度。

4.黄酮提取率依照不同超声时间计算。准确称取猕猴皮2.0g，用50%的乙醇溶液，以料液比为1∶30，在50℃下分别超声提取10 min、20min、30min、40min后过滤，定容。测定吸光度，通过上面的回归方程计算提取率，黄酮提取率在不同条件有一定趋势，可确定最优的超声波时间。

四、验证试验结果

可知，在乙醇浓度为50%，料液比为1:30，50℃下超声提取30min，猕猴桃皮中黄酮提取率达到26.77%，高于正交试验中提取率最大的优化条件。通过正交试验得出提取猕猴桃皮中黄酮的最佳工艺条件为：乙醇体积分数为50%，提取时间30min，料液比为1:30(g/mL)，超声波温度50℃。在最佳工艺条件下对猕猴桃皮中黄酮平行提取3次。

五、结论

本文采用超声波辅助提取猕猴桃皮中黄酮，利用紫外可见分光光度法测定吸光度并计算提取率，优化黄酮的最佳提取工艺。以乙醇浓度、超声波时间、提取温度、料液比等单因素为基础设计正交试验得出最优提取工艺。即在1:30的料液比，加入50%乙醇，在50℃下超声提取30min，黄酮的提取率达到26.77%。