Sysmex XS-800i 血细胞分析仪血小板计数性能评价

马跃飞， 欧启水， 汤绍鹏， 王炳龙， 林锦骠， 杨 滨

Sysmex XS-800i全自动血细胞分析仪具有故障率低、噪音低、稳定性强、操作简单等特点，并且检测成本适中，适合于大、中、小型的医疗单位使用。因其可进行微量血液检测(仅需20 μL)，更加适用于小儿科、化疗科等采血相对困难的人群。Sysmex XS-800i仪器计数血小板(platelet，PLT)联合应用电阻抗法和浮动界标技术，即根据红细胞(red blood cell，RBC)和PLT因体积大小不同所致分布曲线的差别，用微积分方法计算两者交界处的最低点，作为PLT和RBC的分界线，一般在10～35 fL。小于此分界线的血细胞数量即为PLT数。但是，电阻抗法本身无法完全排除非PLT颗粒(如细胞碎片、细菌、真菌等)的干扰[1-2]。笔者科室的Sysmex XS-800i仪主要用于儿科患者末梢血标本的检测，自使用以来已经建立了完善的复检规则。但随着设备使用时间增长，仪器报警增多，PLT计数的假阴性率有增高趋势。为保证PLT计数的准确性，依据ISO 15189《医学实验室质量和能力认可准则》的要求[3]，笔者科室对Sysmex XS-800i仪检测PLT的性能和影响因素重新进行全面评估，以期为修订该仪器的PLT复检规则提供依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1标本 收集2017年3-5月在笔者医院儿科就诊患儿的末梢及静脉血液标本共498例。所有受检标本用EDTA-K2抗凝，充分混匀防止凝固，2 h内完成检测。

1.2主要仪器与试剂

1.2.1仪器 全自动血细胞分析仪(Sysmex XS-800i，日本希森美康公司)；全自动血细胞分析仪(ADVIA 2120i，德国西门子公司)；OLYMPUS普通光学显微镜(CX31，日本奥林帕斯公司)；改良牛鲍计数板、EDTA-K2真空负压采血管(批号：OTD6O26，福州长庚医疗器械公司)；微量采血管(批号：V29S518E5，美国MEDLANCE公司)。

1.2.2试剂 Sysmex XS-800i检测试剂：CELLPACK稀释液(批号：G 6459)，低值质控品(批号：70780810)，中值质控品(批号：70780811)，高值质控品(批号：70780812)，均为希森美康公司。ADVIA 2120i检测试剂：RBC/PLT计数(批号：90995)，SHEATH/RINCE(批号：0247)，中值质控品(批号：TP 72035)，高值质控品(批号：TP 73035)，均为德国西门子公司。1%草酸铵稀释液(PLT稀释液)参照文献[4]的要求配置，4 ℃保存。Baso瑞氏吉姆萨染色液(批号：416092，珠海贝索公司)。

1.3PLT 测定方法

1.3.1仪器计数法

1.3.1.1阻抗法(PLT-I) 按照Sysmex XS-800i的标准操作规程操作。操作前参照文献[5]进行校准，确保仪器正常运行。运行质控在控，试剂无过期变质现象。记录PLT计数结果，观察直方图，记录相关报警(如PLT直方图异常、PLT聚集、RBC碎片、小RBC等)。

1.3.1.2光学法(PLT-O)二维激光法 按照ADVIA 2120i的标准操作规程操作。操作前确保仪器正常运行。运行质控在控，试剂无过期变质现象。记录PLT计数结果。

1.3.2显微镜计数法(PLT-M) 参照文献[4]操作。由2名技术熟练的技师采用双盲法进行显微镜下PLT的计数，取2人计数平均值。2人计数差别较大时，则由第3人计数。取3次结果中相近的2次均值作为显微镜检计数值。

1.3.3镜检估值法 取标本5 μL，制成血涂片，进行瑞氏-吉姆萨染色。正常情况下在血片厚薄适中区域(RBC散开，互相接触但不重叠，相邻RBC的距离不超过1个RBC)，每个油镜视野约有8～15个PLT，或每10～30个RBC中见到1个PLT。油镜下计数11个视野的PLT总数各2次，取平均值。此法作为PLT过高或过低时，显微镜计数法的补充方法，同时作为PLT聚集和大PLT验证及筛查方法。

1.4性能评价 参照文献[6]执行。

1.4.3线性实验 将相同血型，PLT高值(>900×109L-1)、低值(<30×109L-1)两份静脉血标本按5∶1，4∶2，3∶3，2∶4及1∶5的比例配制成系列浓度，加上原标本，共7个标本，每个标本重复检测3次取平均值，以计算理论值为x轴，实际测试值为y轴，做线性回归分析。

1.4.4携带污染率 取1份PLT高值(PLT>900×109L-1)标本连续测定3次(H1，H2，H3)，再取1份PLT低值(PLT<30×109L-1)标本连续测定3次(L1，L2，L3)，用公式(L1-L3)/(H1-L3)×100%计算携带污染率。

1.4.5正确度验证 取一定浓度范围内10份新鲜末梢血液标本，在Sysmex XS-800i和ADVIA 2120i上同时检测PLT，以参加室间质评的ADVIA 2120i为基准仪器，计算偏倚，偏倚应≤12.5%。若PLT<40×109L-1，偏倚应≤15.0%。80%以上符合为正确度验证合格。

1.4.6低值PLT一致性验证 选取20例PLT低值(<55×109L-1)末梢血标本，涂片染色后镜下观察无大PLT、小RBC/RBC碎片干扰，无PLT聚集等干扰现象。分别用Sysmex XS-800i分析仪、ADVIA 2120i分析仪和显微镜检法计数PLT。以镜检法为参考方法，通过线性回归分析血液分析仪与镜检法的一致性。

1.5影响因素评价

1.5.1小RBC干扰评价 分为2组实验。

第1组实验选取PLT直方图正常、无大PLT且平均红细胞体积(mean corpuscular volume，MCV)<80 fL的末梢血标本90例。为了提供更精确的复检规则依据，本组中以80，75和70为节点分成3小组，即75 fL

第2组实验选取PLT直方图异常(峰高降低、右侧不平滑且不与横坐标相切、峰底变宽、翘尾等现象，或仪器有报警提示)、无大PLT且MCV<80 fL末梢血标本120例，因本实验室目前建立的复检规则为“MCV<65 fL时需镜检”，为了验证和细化该规则，本组按75 fL

1.6仪器报警有效性验证实验 影响PLT计数的报警类型主要为“小RBC”、“RBC大小不一”、“大PLT”“PLT分布异常”及“PLT聚集”。选取含上述报警和无报警的末梢血标本共189例进行人工涂片镜检。分别计算各仪器报警的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。

1.7统计学处理 运用SPSS 17.0软件及Excel软件进行数据处理，对各组间差别性比较采用配对t或独立样本t检验，P<0.05为差别具有统计学意义。

2 结 果

2.1精密度分析 低、中、高值日内和批间精密度分别为4.27%，1.39%，1.15%和4.09%，1.38%，1.90%，均在可接受精密度范围内(≤5.0%)(表1)。

表1 精密度实验结果

2.2线性分析 对高、低值标本进行等浓度梯度稀释后，以理论计算值为x轴，实际测试值为y轴，回归方程为y=1.001x+6.163，r=0.999 5，实际测量值与理论计算值相关性良好，表明仪器在厂家提供的测量范围内线性良好(图1)。

图1 线性分析结果Fig 1 Results of linearity experiment

2.3携带污染率 PLT高值分别为H1：962×109L-1，H2：971×109L-1，H3：971×109L-1。低值分别为L1：22×109L-1，L2：21×109L-1，L3：21×109L-1。携带污染率为0.11%，符合标准要求(≤4.0%)。

2.4正确度验证 在测量范围内，Sysmex XS-800i与参加室间质评的西门子ADVIA 2120i的检测符合率达90%，符合标准要求(表2)。

2.5低值PLT一致性评价 对于低值范围内的PLT(11×109～55×109L-1)，两台仪器检测与镜检法的一致性均良好，Sysmex XS-800i分析仪回归方程：y=8.575×10-1x+ 0.530 3，r=0.923 9。ADVIA 2120i分析仪回归方程y=8.746×10-1x+3.878，r=0.908 0。数据提示Sysmex XS-800i对11×109～55×109L-1范围内的低值PLT的准确性良好，略优于ADVIA 2120i(图2，3)。

2.6小RBC干扰评价 PLT直方图正常组与人工显微镜检计数相比，MCV<70 fL时仪器计数结果差别有统计学意义(P=0.004)；PLT直方图异常组MCV<75 fL时，各实验组仪器检测结果差别有统计学意义(P=0.043，0.003，0.000)(表3)。

表2 正确度验证实验结果

图2 Sysmex XS-800i与镜检法的低值PLT检测一致性Fig 2 Correlation of Sysmex XS-800i with manual microscopy for low-value PLT count

图3 ADVIA2120i与镜检法的低值PLT检测一致性Fig 3 Correlation of ADVIA2120i with manual microscopy for low-value PLT count

Tab3Comparation of PLT count between Sysmex XS-800i and manual microscopy in different small RBC groups

组别n仪器计数人工镜检直方图正常75fL

MCV：平均红细胞体积. 与人工镜检比较，△：P<0.05.

表4不同大血小板组仪器与显微镜检血小板计数结果比较

Tab4Comparation of PLT count between Sysmex XS-800i and manual microscopy in different large PLT groups

组别n仪器计数人工镜检MPV>x+s20231±99238±103MPV>x+2s20262±144△275±149MPV>x+3s20207±121△224±131

MPV：平均血小板体积. 人工镜检比较，△：P<0.05.

2.8仪器报警有效性验证 影响仪器计数PLT的报警有效性验证结果如表5所示。各报警的敏感性、阴性预测值均较好。特异性较高的报警为“RBC大小不一”和“小RBC”，较差的是“PLT聚集”。阳性预测值最高的报警为“RBC大小不一”，较低的是“PLT聚集”和“大PLT”。

表5 影响血小板计数的相关报警有效性验证结果

3 讨 论

多数医院使用全自动血液分析仪计数PLT。性能优越、稳定的仪器可以大大提高工作效率，缓解人力压力。但是，仪器计数只是“筛选”手段，各单位应全面了解仪器的检测性能，定期进行性能验证和评估[4]，建立适用的人工镜检规则，以保证仪器计数的稳定性和准确性[7-9]。

本研究显示，PLT检测的精密度、携带污染率、线性、正确度均符合要求，提示Sysmex XS-800i仪检测PLT性能良好，结果可靠。低值PLT检测的准确性对于血液病诊断、输血意义重大。研究发现，对于低值PLT的检测，PLT-I和PLT-O检测的不精密度均较高[10]。本研究中，Sysmex XS-800i仪检测低值标本的不精密度高于中、高值标本。笔者还对低值标本仪器与人工的检测一致性进行了初步评估，研究发现在选取的PLT低值区间(11×109～55×109L-1)，Sysmex XS-800i仪与镜检计数法的一致性良好，r=0.923 9，略优于使用光学法(PLT-O)的ADVIA 2120i仪(r=0.908 0)，与文献报道的结论相符[11]。也有报道认为，当PLT数在20×109～50×109L-1及10×109～20×109L-1时，PLT-I法的AUC为0.895和0.830[12]，表明PLT计数减少导致PLT-I检测的准确性下降，但是结果的可靠性依然较高。因此，在日常工作中对于低值PLT可使用PLT-I法检测，必要时采用镜检法进行确认。当怀疑低值结果是由标本质量问题或存在特殊情况干扰所导致时，更应该采用镜检法以便直观、真实地反映 PLT状况[13]。本研究中选取的标本例数尤其是极低值(<20×109L-1)的标本较少，后续研究中，还需增加标本数，以便对极低值标本的检测一致性进行更客观的评估。

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