葛根素含量测定方法的研究进展

潘丽丽

(贵州工业职业技术学院 化学与材料工程学院，贵州 贵阳 551400)

葛根素是从豆科植物葛根中提取的一种异黄酮类化合物，具有降血压、抗心律失常、降低心肌耗氧量、增加脑血流量、抗血栓、降血糖、降血脂、解酒等作用[1]，且毒性很低。目前葛根素临床上主要应用于治疗冠心病、心绞痛、高血压、糖尿病等疾病[2]。许多葛根及其制剂常选用葛根素的含量作为其质量控制指标，本文综述了葛根素含量测定方法的研究进展。

1 高效液相色谱法

金丽等[3]采用汉邦Lichrospher C18 柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，甲醇-水(25∶75)为流动相，检测波长250nm，测定铁必复颗粒中葛根素含量，线性范围为23.84～143.02 μg /mL，平均回收率为97.70%，RSD为0.66%。罗承锋等[4]测定大鼠血浆中葛根素含量，选用Hypersil ODS C18柱( 4.6 mm×150 mm，5μm)，流动相为甲醇∶水(含50 mmol/ L醋酸铵)=23∶77，荧光检测器激发波长250nm，发射波长480nm，葛根素在0.16～120 mg/ L范围内线性良好，最低检测限为10 μg/L。汤丹丹等[5]建立同时检测小鼠血浆、脑匀浆中葛根素的HPLC-MS/MS法，以对羟基苯甲醛为葛根素内标物，采用Agilent Eclipse plus C18柱(100 mm×4.6 mm，3.5μm)，流动相是甲醇-10 mmol/L乙酸胺(含0.1%甲酸)=80∶20，流速0.6 mL/min，柱温30 ℃；质谱条件：ESI源，雾化温度为550℃，多反应监测测定模式，葛根素和对羟基苯甲醛采用负离子方式(选择监测离子反应分别为m/z 415.0→295.0和m/z 120.9→91.8)，该方法分析时间短，仅为4 min。

2 超高效液相色谱法

赵振霞等[6]采用HPLC法和UPLC法两种方法分别测定心可舒胶囊中葛根素，UPLC 法采用 Acquity T3 C18 (2.1 mm×100 mm，1.8μm) 色谱柱，流动相为乙腈- 0. 1%三氟乙酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.5mL/min，检测波长均为287 nm。葛根素在46.05～1160μg/mL范围内线性良好，平均回收率为100.7%，RSD为1.4%，两种方法测定心可舒胶囊的葛根素含量一致，但UPLC法梯度洗脱程序较HPLC法简单，且分析时间、灵敏度等均优于HPLC 法。张晨宁等[7]建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法测定降脂活血片中葛根素，采用 Restek Uitra BiPh 色谱柱 ( 100mm×2.1mm，5μm) ，以乙腈 ( 含0.1%甲酸) -0.1%甲酸为流动相，梯度洗脱，流速0.4mL/min，柱温 40℃，进样量5 μL。质谱条件：ESI源，毛细管电压3.8 kV，离子源温度 150 ℃，喷雾气N2，体积流量 1000 L/h，碰撞气 Ar，体积流量0.16 mL/min，扫描方式为MRM。葛根素的线性范围为4.285～1097ng/mL，检测限为0.7ng/mL，平均回收率为100.2%。

3 分光光度法

梁文法等[8]点样于硅胶G板上，用氯仿-无水乙醇(7∶3)为展开剂，在紫外灯365nm下定位葛根素，刮下斑点。以乙醇作空白，在251nm处测定吸光度，标准曲线法计算葛根中葛根素含量，线性范围为1～5μg/mL，平均回收率为98.6%。贾贞[9]测定葛根素注射液中葛根素，在358nm波长激发荧光，在477nm波长处测定葛根素荧光强度。葛根素浓度在1. 0×10-7～1. 0×1 0-5mol /L范围内与荧光强度具有良好线性关系，检出限为2.02×1 0-8mol /L，与紫外吸收分光光度法结果相比，令人满意。赵慧春等[10]将愈风宁心片乙醇提取液点于硅胶GF254薄层板，以乙酸乙酯-甲酸-水(48∶6∶6)为展开剂，于紫外灯254nm下观察斑点位置，刮下斑点，用乙醇浸取，激发波长258.6 nm，发射波长477.0 nm，测定相对荧光强度。葛根素检测限为0.042μg/mL，回收率在93.1%～109.2%，RSD<2%。

4 薄层色谱扫描法

程庚金生等[11]点样于硅胶GF254板，以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(3∶3∶4∶1)为展开剂，采用单波长扫描，检测波长254 nm，狭缝宽度为6mm×0.3mm，测定消渴丸中葛根素含量，在2.0～10.0μg范围内线性良好，平均回收率为101.1%，RSD=1.7 %。李云霞[12]将葛根乙醇提取液点于高效硅胶GF254薄层板，以氯仿-甲醇-水(3∶1∶0.05)第1次展开，再以氯仿-甲醇-水(5∶1∶0.05)第2 次展开，反射法双波长锯齿扫描，λs =254nm，λR=333nm。葛根素在0.36 ～3.60μg范围内线性良好，平均回收率为98.72%。孙淑琴等[13]用甲醇超声提取感冒清热冲剂中葛根素，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(8.1∶9.4∶26∶4)为展开剂，激发波长为320nm，单波长荧光反射法线性扫描测定，葛根素线性范围是0.137～0. 685μg，平均加样回收率为100.40%，RSD 为1.53%。

5 毛细管电泳法

王烜[14]采用高效毛细管电泳法测定感冒清热颗粒中葛根素含量，毛细管规格为75 m×64.5cm，分离电压20kV， 检测波长254nm，柱温25℃，采用压力进样20kPa，进样时间5s。缓冲液是pH值为8.7的25mmol/L磷酸二氢钠-25mmol/L硼砂溶液。葛根素在0.011～0.11mg/mL性关系良好，检测限较低，为0.57μg/mL，加样回收率99.69%。黄丽涵等[15]采用胶束电动色谱-质谱联用法测定心脑康胶囊中的葛根素，石英毛细管(80cm×50μm)为分离通道，以30mmol/L月桂酸-90mmol /L氨水(pH值9.0)为缓冲溶液，50%异丙醇(含1mmol/L乙酸)为鞘液，鞘液流速 8μL/min。质谱条件：电喷雾电离源，采用选择性离子监测，毛细管电压为4.3 kV，喷雾气压力为34.3 kPa，干燥气10L/min，温度为325℃。葛根素的线性范围为0.50 ～500mg/L，检出限为0.050mg /L，回收率为96.5%，RSD为3.1%。

6 近红外光谱法

石猛等[16]采集消渴丸干模丸的近红外光谱，与HPLC检测结果关联进行化学计量学分析，结合偏最小二乘法建立干模丸中葛根素含量的定量校正模型：R2=0.9482，RMSECV=0.248，RPD=4.40。对验证集样品预测平均相对偏差为3.51%，模型预测性能良好。王宁等[17]建立一种快速测定心通口服液中葛根素含量的新方法，采用声光可调滤光器-近红外光谱分析技术，建立葛根素近红外光谱与HPLC分析值之间的数学模型。建立的定量模型准确性好，葛根素的内部交叉验证均方差是RMSEP=0.1371，R2=0. 9845。

7 酶联免疫吸附测定法

单文超等[18]建立间接竞争酶联免疫分析法测定葛根中葛根素的含量，线性范围为15.6～500ng/mL，孔间差和板间差均不大于3.5%，平均回收率为 101.8%，并且该法检测结果与HPLC法检测结果一致。万凤[19]采用ELISA法测定人唾液中葛根素含量，葛根素的线性范围为5～1280 ng/mL，r=0.9939，最低检测限为2.47 ng/mL，平均回收率为95%～115%，与HPLC法测定结果的相关性良好。宋兴兴等[20]利用ELISA原理研制出一种简便、快速评价葛根药材质量的胶体金试纸，葛根素胶体金试纸的半定量限为34g /mL，适用于原料采购现场的快速检测。

葛根素的测定方法很多，各具特点。高效液相色谱法是测定葛根素含量的常用方法，具有重复性好、结果准确的优点，但耗时、成本较高。液质联用技术是一种分离分析复杂有机混合物的有效手段，灵敏度高、选择性好，但仪器较昂贵，其应用还不够普遍。超高效液相色谱法与传统的HPLC相比，增加了分析的通量和灵敏度，能快速分离样品，同时节省流动相，降低分析成本。近红外光谱法具有分析速度快、对样品无破坏性、无污染、操作简便、结果精准等优点，可实现葛根素的快速分析和在线检测。酶联免疫吸附测定法具有特异性强，灵敏度高，仪器化程度低，经济无污染等特点，特别适用于分析微量基质生物样品中葛根素含量。笔者认为，随着含葛根素药物的指纹图谱和质量标准研究的不断发展，通过多种分析方法的联用，能寻求到简便快速、准确高效的测定方法，为葛根素的质量控制提供更可靠的依据。