不同灸温对高脂血症大鼠血脂及肝脂酶活性的影响

张会芳 孙舟红 耿婷婷 徐旺芳

【摘要】目的 观察艾灸温度对高脂血症大鼠模型血脂四项及肝脂酶活性的影响，探讨艾灸不同调脂途径。方法 采用灌胃造模方法制备高脂血症模型。将40只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为四组，分别为正常组、模型组、38℃组、43℃组，干预四周后，眼眶取血，测定血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量及肝脂酶活性。结果 与模型组比较，43℃组可明显提高HL的活性，差异具有非常显著性意义（P<0.05），38℃组数值略有提高，但无统计学意义（P>0.05）；与38℃组比较，43℃组可明显提高HL的活性，差异具有非常显著性意义（P<0.05），说明HL的活性受温度的影响，适宜的温度可提高其活性；与模型组比较，43℃组及38℃组TC、TG、LDL-C明显降低，差异具有显著性意义（P<0.05）；与38℃组比较，43℃组降低TC、TG、LDL-C明显，差异具有显著性意义（P<0.05），说明46℃组降脂疗效优于38℃组，疗效与温度有关，适宜的温度是取效的关键。HDL-C模型组高于正常组，与大鼠自身调制机制有关，两组温度对其影响区别不大，差异没有统计学意义（P>0.05）。结论 不同灸温对血脂及HL影响不同，HL途径是TRPV1调节血脂途径之一。

【关键词】高脂血症；灌胃造模；高密度脂蛋白

【中图分类号】R245 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2017.28..02

高脂血症是中老年人常见的病症，其主要危害是导致动脉粥样硬化，从而引起众多相关疾病，严重危害人类的健康。临床研究表明，灸法治疗高脂血症疗效可靠。以“温”促“通”是灸法的本质与灵魂[1]，而适宜的灸温是灸效产生的重要条件，大于43℃的艾灸刺激能产生有效调脂通脉的效应[2]。关于灸法调脂途径的研究，目前鲜见报道，与TRPV1相关性研究，尚无报道。肝脂酶（Hepatic lipase，HL）是多种脂蛋白代谢的关键酶，在脂质代谢和转运过程中起重要作用，其活性降低，可引起高脂血症，本课题根据TRPV1的激活条件，设计38℃和43℃两个温度，通过观察不同艾灸温度对高脂血症大鼠血脂及HL的影响，证实TRPV1通过介导HL途径调节血脂，进一步明确灸法调脂的生物学基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料

（1）实验动物：由上海实验动物资源中心（西普尔-必凯）提供健康成年雄性SD大鼠（许可证号：SCXK（沪）2013-0016，清洁级），体重（180±20）g。大鼠购回后，将大鼠饲养于南京中医药大学实验动物中心，温度20℃～25℃，相对湿度60%左右的实验环境。本实验过程中对动物处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。

（2）主要试剂及药品：艾条为动物用艾条，生产公司为南阳汉医艾绒有限责任公司，

直径7 mm，动物专用清艾条。猪油（自制）；丙基硫氧嘧啶片生产厂家上海朝晖药业有限公司，批号：1506N17；Bile salts生产厂家sigma-alorich pcode公司，pcode-101691716， lot-BCBQ3263V，货号：48305-50G-F；1，2丙二醇由生产厂家成都市科龙化工试剂厂提供，批号：20150712；吐温80生产厂家为成都市克隆化工试剂厂，批号为2014112601；胆固醇生产厂家为成都市科龙化工试剂厂，批号为2014071401。

（3）试剂和仪器：血脂四项。HL酶联免疫分析试剂盒购于上海联硕生物科技有限公司上海联硕生物科技有限公司。仪器SpectraMax M2酶标仪为美国Molecular Devices Corporation（MDC）公司产品。

1.2 方法

（1）脂肪乳剂配置方法

参照刘明[3]及倪鸿昌[4]的高脂模型制作方法，超市购买猪油，自行炼油去渣，冰箱8℃保存待用，取100 g猪油放于500 mL烧杯中，用电磁炉加热成液态，先后分别加入5g丙基硫氧嘧啶和100 mL吐温80，充分搅拌至完全溶解，同时准备另一个500ml烧杯，先后分别加入蒸馏水150 mL及1，2丙二醇100 mL，将其加热至60摄氏度，后再加入10 gBile salts，充分搅拌后，将此烧杯的溶液缓慢倒入第一个烧杯中，边倒边搅拌，防止因热而溢出烧杯外，之后加蒸馏水至500 mL，用玻璃棒充分搅匀后，冷却至37摄氏度后灌胃。本方法制成的脂肪乳剂含1%丙基硫氧嘧啶、20%猪油、10%胆固醇、2%胆盐。

（2）动物分组与模型复制

分组：大鼠适应性喂养1周后，称量各大鼠体重后，根据体重随机分为正常组、模型组、43℃组、38℃组，每组10只。正常组大鼠予生理盐水10 ml/kg灌胃，每日1次，其它3组予脂肪乳剂10 ml/kg灌胃，每日1次。4周后，用毛细玻璃管眼眶后静脉采血、离心取血清后检测总胆固醇和甘油三酯，经统计学分析，模型组高于正常组，且差别具有统计学意义（P<0.05），说明模型复制成功，开始干预治疗，同时除正常组外，模型组、两个不同灸溫的艾灸组继续用高脂乳剂灌胃，至取材结束。

（3）干预方法

用大鼠固定板将大鼠仰卧位固定，用剪刀将大鼠足三里及神阙穴位区0.5 cm×0.5 cm鼠毛剪除，暴露出局部皮肤。43℃组：艾条保持红火状态（每隔10 s弹灰1次）下距离皮肤（10±2）mm；38℃组：艾条保持红火状态（每隔10 s弹灰1次）下距离皮肤（35±5）mm；正常组及模型组：不作任何治疗，每日陪同抓取、固定。温度控制：通过掌控弹灰的速度和频率掌控红火状态，通过掌控红火状态下艾条距离皮肤的距离来控制温度，同时测温仪来精确监控温度变化。每日干预1次，共干预4周。

（4）取材及处死

四组大鼠干预四个星期之后，开始取材，取材前一天晚上8点禁食不禁水，第二天早上8点开始采血，采血前用剪刀剪去大鼠要采血眼睛同侧的胡须，避免血液污染发生溶血，之后用中性玻璃毛细管眼眶静脉丛采血法取血，即用左手紧捏大鼠头颈部皮肤，将大鼠头部固定，使大鼠眼球暴露充血，右手持长约4 cm、内径0.9 mm，壁厚0.15 mm的毛细玻璃管倾斜45度角，快速旋转插进眼内角，如无出血，可快速旋转毛细血管，调整角度及方向，用规格为5 mL的采血管采血，采血后放置采血架上静置待离心，大鼠在用无菌脱脂棉球压迫眼睛止血后，用颈椎脱臼法处死大鼠，即用左手拇指与食指用力向下按住大鼠后头部，右手抓住大鼠尾巴用力向后上方拉，将脊髓与脑髓拉断，此时左手可感觉到颈椎与头部分离的空虚感，即成功处死大鼠。

（5）指标检测

取血后，放置采血架上静置30 min，用离心机按照每分钟3000转的速度离心15分钟，用移液枪吸取上清液滴入1.5 mL的离心管中，装盒-80℃冰箱保存待测。血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）检测采用生化比色法测定，肝脂酶（HL）采用酶联免疫法测定[5-6]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以例（n），百分数（%）表示，采用x2检验；计量资料以“x±s”表示，采用t检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同灸温对高脂血症大鼠血脂四项的影响

与模型组比较，43℃组及38℃组TC、TG、LDL-C明显降低，差异具有显著性意义（P<0.05）；与38℃组比较，43℃组降低TC、TG、LDL-C明显，差异有显著性意义（P<0.05），说明46℃组降脂疗效优于38℃组，疗效与温度有关，适宜的温度是取效的关键。HDL-C模型组高于正常组，与大鼠自身调制机制有关，两组温度对其影响区别不大，差异没有统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 不同灸温对高脂血症大鼠HL活性的影响

与正常组比较，模型组HL活动性明显降低，差异具有显著性意义（P<0.05），说明造模成功，与模型组比较，43℃组可明显提高HL的活性，差异具有非常显著性意义（P<0.01），38℃组虽有所提高，但差异无显著性意义（P>0.05）；与38℃组比较，43℃组可明显提高HL的活性，差异具有非常显著性意义（P<0.01），说明HL的活性受温度的影响，适宜的温度可提高其活性；

3 讨 论

肝脂酶（Hepatic lipase，HL）是一种主要由肝实质细胞合成和分泌的糖蛋白，主要两种生理功能，一种是具有水解各种脂蛋白中的甘油三酯和磷脂，改变各种脂蛋白颗粒的大小和密度的功能；另一种是作为配体促进肝细胞摄取含载脂蛋白B（apolipoprotein B，apoB）类脂蛋白，影响着血浆中脂蛋白的浓度，在脂蛋白微粒分解和LDL与HDL转换过程中起关键作用。研究表明[7-9]，维持和提高HL活性对调节血脂、防治动脉硬化有重要意义，因此，维持和提高HL的活性，已成为治疗高脂血症的主要途径之一。

本实验研究表明：不同灸温对血脂四项影响不同，43℃组可明显优于38℃组，43℃是TRPV1激活的关键条件，說明TRPV1参与了脂代谢，TRPV1的激活与艾灸调脂效应密切相关，直接或者间接参与了血脂的代谢。同时，本研究表明不同温度对肝脂酶的活性影响亦不一样，HL的活性受温度的影响，适宜的温度可促进其活性，43℃组可明显提高HL的活性，且优于38℃组，说明HL途径是TRPV1调节血脂途径之一，进一步明确了灸法调脂的生物学基础。

参考文献

[1] 王玲玲.艾灸的特点及温通效应[J].中国针灸，2011，31（10）：865-868.

[2] 张会芳，王玲玲，张建斌，姜劲峰.艾灸温通调脂临床研究[J].世界中医药，2013，8（8）：871-879.

[3] 刘 明，董超仁，苏静怡.一种简便实用的大鼠高脂血症模型[J].中国药理学通报，1989，5（2）：119.

[4] 倪鸿昌，李 俊，金 涌，等.大鼠实验性高脂血症和高脂血症性脂肪肝模型研究[J].中国药理学通报，2004，20（6）：703-706.

[5] Nozakl S， Kubo M， Matsuzawa Y，et al.Sensitive non-radioisotopic method for measuring lipoprotein lipase and hepatic triglyceride lipase in post-heparin plasma.Clin Chem，1984，30：748-751.

[6] Kobayshi J，Hashimoto H，Fukamachi I， et al.Lipoprotein lipase mass and activity in severe hypertriglycerdemia.Clin Chim Acta，1993，216：113-123.

本文编辑：李 豆