李 东,鲁炳怀,张树琛
(民航总医院 检验科,北京100123)
随着性传播疾病患病人数的增多,感染沙眼衣原体(CT)与淋球菌(NG)所致生殖系统炎症的患者也随之增多[1,2]。此外,解脲脲原体(UU)在生殖道特别是女性,常常可以检出,但是其致病性还有一定争议[3]。女性感染CT或NG常常引起非孕期女性阴道炎、尿道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎、盆腔炎、不孕等各类疾病。在妊娠期间,CT和NG还能通过胎盘垂直传播,从而引起孕产妇不良妊娠结局,此外,有的研究认为UU的携带与妊娠不良及预后有关,会严重危害孕产妇及新生儿的健康生命,但争议较大[4]。男性的CT病原体感染,可表现为隐匿性感染,如不及时治疗,可引起附睾炎、前列腺炎等并发症,从而造成男性不育[5]。为了了解北京地区的泌尿生殖道感染患者NG与CT感染情况及UU的携带,本实验采用实时荧光PCR技术对2011-2016年就诊的患者进行检测,结果报告如下。
1.1一般资料选取 2010 年1月-2016年12月在我院就诊及检查的妇女患者1588例,男性就诊患者293例,年龄分布为16-67岁。取材方法,女性:用窥阴器扩开阴道后,取消毒棉签,拭净宫颈外口分泌物,弃去;取一支一次性无菌拭子,分别伸入宫颈管1-2 cm,轻轻旋转,停留 20 s 以上,送入无菌试管中盖合紧密,立即送入检验科检测。男性:消毒的无菌棉拭子插入尿道口内1 cm,置留60 s后轻轻取出,置于带旋盖的无菌试管中送检。标本置于-20℃冷冻保存待检。
1.2主要仪器与试剂
1.2.1试剂 沙眼衣原体核酸测定试剂盒、解脲脲原体核酸测定试剂盒、淋球菌核酸测定试剂盒(荧光 PCR法 )均购自上海科华生物科技股份有限公司。
1.2.2仪器 罗氏LC480荧光定量 PCR仪。
1.3标本处理
在分泌物标本中加入 1 ml无菌生理盐水,充分震荡混匀,将液体转移至 1.5 ml EP管中。然后吸取每一管中的100 μl混悬液到0.5 ml EP 中,0.5 ml EP管中再加入 100 μl反应液A震荡混匀,13 000 r/min 离心10 min,离心半径 =9.35am后弃上清。沉淀加入50 μl反应液B,震荡混匀,瞬时离心后100℃沸水浴 10 min,再 13 000 r/min离心10 min,取上清2 μl作为 PCR模板,使用上述3种试剂盒对标本进行检测。设置阴阳性对照管各一个。扩增完分析软件自动分析,得到的各标本的检测结果,Ct < 37样本结果为阳性。
1.4统计学处理
所有数据利用SPSS18.0 统计软件进行数据分析,计数资料率的比较采用χ2检验,计量资料选择t检验,检验水准α= 0.05,分析差异是否具有统计学意义。
2.1男女性之间CT、NG与UU阳性检出率的比较
女性患者中,UU的阳性检出率显著高于NG和CT(P均<0.01),CT的阳性检出率显著高于NG(P<0.01);男性患者中,NG的阳性检出率显著高于女性(P<0.05),而UU的检出率显著低于女性。不同性别的CT检出率无统计学意义(P>0.05),见表1。多重感染者,分别计入感染的病原菌的阳性例数内,因此表1中的阳性例数要高于实际的阳性患者数。
2.2感染类型的分布
男性生殖道标本共计检测293例,NG+CT+UU阳性例数为188例,阳性率为64.2%。女性生殖道标本共计1588例,NG+CT+UU阳性例数1368例,阳性率为86.1%。其混合感染率见表2。从男性混合感染的感染类型来分,CT+UU以及CT+NG为主要感染类型。而女性则以CT+UU以及NG+UU为主要感染类型。
表1 男性和女性组的CT、NG与UU阳性率的比较
表2 不同性别间混合感染者不同感染类型分布
2.3不同年龄段感染阳性率的比较
男女在不同年龄阳性率分析显示年龄的关系,见表3。
2.4各组病原体的混合感染情况分析
在各种病原体阳性的患者中,男性数据方面:NG+CT共有9人,CT阳性患者51人,NG感染者有68人,NG伴随CT感染的概率为13.2%,而CT伴随NG感染的概率为17.6%。女性患者中,NG+CT感染者共有11人,CT阳性的有195人,NG阳性的有41人,NG伴随CT感染的概率为26.8%,而CT伴随NG感染的概率为5.6%。
表3 不同性别泌尿生殖道感染的年龄段阳性率的比较
生殖道病原体CT以及NG可以通过性接触传播从而引起感染,多数患者可无明显症状,易被患者忽略,延误治疗。对于女性患者而言,CT和NG病原体可进入孕产妇的泌尿生殖系统,诱导白细胞的增殖和前列腺素释放,导致子宫的异常收缩;而男性的泌尿生殖道炎症,可导致不孕不育。有报道显示,在世界各国报道的性传播疾病中,CT感染患病率最高[6]。
目前对于UU的生殖道致病性还有一定争议。有研究指出,生殖道的支原体/脲原体是正常菌群的一部分,在无症状的妇女体内,特别是脲原体,其定植率高达80%左右[11]。在本次研究中,女性的UU携带率为71.3%,和国外的携带率大致相同,其中女性妇科携带率为71.7%,而产科的携带率则为67.4%,说明在妇科的UU携带率仍是高于产科,妇科就诊的原因主要是阴道病,说明患者存在阴道菌群异常情况较产科人群多见。国外研究指出,阴道菌群异常时,脲原体的检出率会增高,本数据和该研究结果一致[11]。
本研究显示,北京地区的CT、NG、UU三种病原体在泌尿生殖道检出率存在性别、年龄的差异。女性患者, CT与UU常混合检出,占总阳性率的10.2%。分析其原因,UU可能是女性生殖道的定植微生物,与其他菌群共生,机体免疫力低下或黏膜受损或其他病原菌存在的情况下可大量繁殖而致病。
与北京地区的其它研究结果相比,我们研究中NG感染率为3%,CT为12%,与张有江等关于北京地区的报道趋势较为一致[7]。张有江等[7]采用的方法为培养的方法,其阳性率明显低于实时定量PCR的方法。CT的阳性检出率略低于贺望娇[8]的报道。说明随着人群的流动性,病原体的地区差别差异减小。另外,阳性检出率的微小差异也可能与入选人群有关。
本次研究还根据女性就诊情况分为产科及普通妇科,通过数据可以明显发现,女性的CT和NG的感染率在妇科及产科有显著性差异,产科的NG及CT的感染率明显降低。产科人群进行NG与CT检查多为筛查,大致可反映普通人群的感染率,而妇科患者多因生殖道感染的症状而就诊。
本实验男性患者共293人,CT与NG感染率均高于女性。男性的尿道不适的最主要病原菌是NG与CT,检出率分别为23.2%与17.4%。有研究报道指出男性NG发病主要集中在30岁以下年龄组,而CT好发于40岁以上年龄组,然而本次研究并未发现CT与NG感染数量在20-40岁年龄组上的显著差异[9]。国外学者Naumenko等研究报道,20-45岁的人群是性传播疾病的高发人群[10]。本次研究发现,20-40岁的患者3种病原体的检出率最高,40-50岁患者次之,随着年龄的增长病原体感染率逐渐下降。但是在低年龄组0-20岁组,女性的感染率明显高于男性。
NG、CT 和UU同时检测显示,同时检出2种病原体占有很高的比例,其中以CT+ UU同时检出最多见。不同性别有明显区别,在女性高达10.2%,男性达到4%。NG+CT的混合感染中,男性明显高于女性,女性仅为0.7%,而男性却有3.2%。在男性中,NG伴随CT感染的概率为13.2%,而CT伴随NG感染的概率为17.6%;在女性中,NG伴随CT感染的概率为26.8%,而CT伴随NG感染的概率为5.6%。说明在男性中,不论感染了NG或者是CT的,伴发概率大致一致,而女性则表现出明显不同,女性在感染了NG后,感染CT的概率明显高于CT感染后再感染NG的机会。NG+ UU 的混合感染中,男性为2.7%,女性为2%,差别较小。泌尿生殖道的混合感染,说明性传播疾病患者经常不是单一病原体感染,因一种病原体感染后导致人体局部抵抗力降低,从而容易合并其他病原体的协同感染。同时这也可能是一些患者在治疗后出现病情反复、迁延、症状久治不愈。CT+ UU+ NG 同时检出几率最低,女性为0.6%,男性未同时检出上述3种微生物。说明三种混合感染在泌尿生殖道发生率较低。
总之,临床医生在诊治的过程中,应对是否同时存在NG、CT 和(或)UU 感染提高警惕,尤其是对患者治疗后仍有临床症状者,或者病情反复出现的患者必须进行联合检查,特别是CT 和NG的感染,力求早期发现,及时治疗,以提高治愈率,促进患者的康复。
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