传统用药方法对民间草药抑菌功效影响的比较研究

陈弘钊 赵聿文 吴道艳

（1成都市石室天府中学，四川 成都 610041；2成都市石室联合中学，610041；3四川大学，610065）

参照民间用药的常用手段，测定10种常见的具有清热消炎等功效的民间野生草药的抑菌活性，并比较2种民间常用的传统用药方法对草药抑菌活性的影响，为民间草药的合理利用提供参考。

民间草药是一类流传民间，以经验指导应用的天然药物，具有清热润肺、消肿止痛、祛风除湿、消炎解毒、止血、杀虫等功效，多用于治疗感冒、咽喉肿痛、肺炎、肠炎、皮炎、肿毒、跌打损伤、蛇虫咬伤等疾病，有一定的治疗和缓解症状的效果。民间草药经过长期的临床实践检验，疗效较为确定，具有多种活性成分[1]，而且种类繁多数量巨大，但其中很多没有被医药书籍收载，其疗效、有效成分、药用机理、使用方法、毒副作用等方面都缺乏有力的理论支撑，会大大影响其开发应用。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器与试剂

1.1.1 材料。野生草药：黄姑娘（毛酸浆Physalis pubescens L.）、龙胆草（Gentiana scabra Bunge.）、车前草（Plantago asiatica L.）、蒲公英（Taraxacum mongolicum·Hand.-Mazz.）、鱼腥草（Houttuynia cordata·Thunb.）、九节风（草珊瑚Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai）、薄荷草（Mentha haplocalyx）、石菖蒲（Acorus tatarinowii）、夏枯草（Prunella vulgaris·L.）和肺经草（Sanicula lamelligera·Hance），均采自于四川省成都市新都区斑竹园镇檀木村田间地头。

菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）由四川省资源微生物学及微生物生物技术试验室提供。

1.1.2 仪器设备。LD2X-50KBS高压蒸汽灭菌锅（上海申安医疗器械厂）、DHP-9272电热恒温培养箱（上海精密仪器有限公司）、HB50-ⅡA2生物安全柜（青岛海尔特种电器有限公司）、UV-2600紫外分光光度计（日本岛津）、AFZ-1002-U纯水仪（艾科浦）、DDHZ-300台式回旋恒温振荡器（苏州市培英试验设备有限公司）、ESJ200-4电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）、0.22m微孔滤膜、移液枪等。

1.1.3 试剂。牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、水1000mL，无菌水。

1.2 方法与步骤

1.2.1 草药提取液的制备。选取新鲜草药，洗净、晾干、切碎，称量。

由于民间草药通常采用水煎煮法和白酒泡制法进行应用，故本试验相应地采用下列2种方法制备草药提取液。

水提液：按照样品和水1∶20的比例加入纯净水，浸泡30min，再加热煎煮30min，4层灭菌纱布过滤，滤液再用微孔滤膜过滤除菌，备用。

乙醇浸提液：按照样品和50%乙醇1∶8的比例混合，30℃浸泡9d，4层灭菌纱布过滤，滤液再用微孔滤膜过滤除菌，备用。

1.2.2 培养基的制备[2]。配制牛肉膏蛋白胨培养基1000mL，灭菌备用。

1.2.3 菌悬液的制备。用接种环分别挑取活化好的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌3种细菌，并分别放入装有10mL无菌水的试管中，充分振荡，制备成均匀的菌悬液，备用。

1.2.4 滤纸片法测定。草药水提液和乙醇浸提液的抑菌活性。将制备好的细菌培养基加热融化倒平板，冷却后在平板中分别加入稀释好的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌菌悬液各100μL，用灭菌过的涂布棒涂抹均匀。

草药水提液抑菌试验：取准备好的直径为6mm的无菌圆形滤纸片，用灭过菌的镊子取滤纸片均匀地贴在含菌的平板上，用移液枪吸取每种草药水提液各35L打在滤纸片上，无菌水作为对照，并在各滤纸片对应的位置上做标记。将各平皿倒置于恒温培养箱中，37℃培养16h后取出，测定各草药水提液抑菌圈的直径。每种草药水提液设置3个重复，3个重复求其平均值即得各草药水提液的抑菌圈的平均直径。

草药乙醇浸提液抑菌试验：方法同上，由水提液改为各草药的50%乙醇浸提液，并以50%的乙醇为对照。

2 结果与分析

试验结果显示，各草药的水提液均无抑菌活性或抑菌活性很弱。中草药的药用成分较为复杂，仅以抗菌消炎中草药来讲，其活性成分大致有：有机酸、生物碱、黄酮、挥发油、醌类等[1，3]。这些物质大都难溶于水。有研究显示，石菖蒲、薄荷、鱼腥草及夏枯草的水提液有一定的抑菌作用，但相较于乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂提取物的抑菌活性还是较差[4-10]。再加上本试验制备草药样品时粉碎程度不够，煎煮过程中的高温也对活性成分也有一定的影响，所以以煎煮方式提取抗菌成分的方法效果不显著。

各草药50%乙醇浸提液的抑菌效果见表1，各草药抑菌活性的比较见图1。

表110 种草药50%乙醇浸提液抑菌效果

图1 10种草药50%乙醇浸提液抑菌效果的比较

从上述图表中可以看出，这10种民间草药的50%乙醇浸提液表现出了一定的抑菌作用，其中鱼腥草、薄荷草和夏枯草的50%乙醇浸提液对3种供试菌都表现出了抑制效果；龙胆草、石菖蒲和肺经草的50%乙醇浸提液对金黄色葡萄球菌和蜡状芽孢杆菌有抑制作用；而黄姑娘、车前草、蒲公英和九节风的50%乙醇浸提液则只对蜡状芽孢杆菌表现出了抑菌效果。就国内目前的研究显示，这10种草药的醇提物都有不同程度的抑菌作用[4-23]，如石菖蒲的无水乙醇提取物对番茄灰霉病菌的抑制效果最佳，水提物的抑菌效果最弱[4]；薄荷的无水乙醇浸提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌等均有较明显的抑制作用，且效果优于乙酸乙酯和水的提取物[6]；车前草用无水乙醇提取的物质对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑制作用[13]；黄酮类成分是毛酸浆（黄姑娘）抑制病原微生物的主要活性成分[21]，毛酸浆果80%乙醇提取物具有较好的抗炎活性[22，23]；九节风（草珊瑚）75%乙醇提取物[12]、鱼腥草70%乙醇提取物[18，19]、夏枯草和车前草的80%乙醇提取物[24]对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有很好的抑制作用。由以上研究结果可知，这些草药的乙醇提取物有较强的抑菌作用，而且高浓度的乙醇提取物的效果大都较好。本试验中考虑到四川民间通常使用50%左右的白酒浸泡草药，所以相应地设置乙醇提取的浓度为50%，试验结果也显示出了乙醇浸提物的抑菌效果，但活性相对较低，同时也说明民间常用的使用方法并未有效利用这些草药中的抑菌成分。

3 讨论

从试验结果可知，试验用10种民间草药都有一定的抑菌作用，但不同草药提取液的抑菌谱是不同的，说明这些植物的抑菌活性成分存在差异。本研究中采用的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌在自然界中无处不在，感染时症状主要表现为呕吐、发热、腹泻。传统中医认为在一定程度归属于热症，依据“热者寒之”之治病理念，应选取清热解毒药对症治疗[24]。本试验中的10种草药都以清热消炎、解毒祛湿等功效为主，因此，选取这3种细菌作为供试菌种，是具有一定的代表性的。本试验中草药的水提液没有显示出抑菌活性，而50%乙醇浸提液对供试菌显示出的抑制作用也不显著，提示这些草药是具有一定的抗菌药用价值的，但传统的民间用药方法没能较好地发挥出草药的抗菌效果。

草药的化学成分相当复杂，不能简单地给清热解毒药和抗菌药划等号，只有通过分析鉴定才能知道哪一种成分真正具有“杀菌消炎”的作用。但要得到有效成分，并了解其功效、使用方法及其安全性均需要更深入的科学试验。因此，民间草药的下一步发展应该是利用现代科学的方法，来确定草药的各种化学成分及其功效，因此对其进行发掘研究，是扩大新的中药和天然产物资源的一条捷径。并可以按其功能应用于医药、食品、天然日化产品等生产领域，走出一条民间草药研发和推广使用的新路。

1 赵峰等“.消炎”中草药的化学成分[J].安徽农业科学，2014（22）

2 沈萍，陈向东.微生物试验第4版[M].北京：高等教育出版社，2007

3 李曼玲.抗菌消炎中草药的研究Ⅰ活性成分——有机酸类[J].中药通报，1986（6）

4 刘铁秋等.石菖蒲提取物的抑菌效果及其提取工艺的优化[J].中国生物制品学杂志，2014（1）

5 刘锐，莫倩美.薄荷水提取物抑菌活性的研究[J].农业机械，2011（5）

6 李琼芳等.薄荷浸提液的抑菌效果研究[J].科技信息（学术研究），2008（8）

7 刘锐，莫倩美.不同溶剂提取的薄荷浸提物的抑菌效果研究[J].安徽农业科学，2011（6）

8 王放银等.夏枯草抗菌成分提取工艺及其抑菌效果研究[J].黑龙江畜牧兽医，2004（10）

9 杨力等.夏枯草提取物的抑菌性能研究[J].海南师范大学学报（自然科学版），2013（1）

10 张鹰，郑冰儿.鱼腥草抑菌物质提取工艺及抑菌效果研究[J].广东农业科学，2011（20）

11 彭丹等.40种中药提取物对6种临床常见感染菌株的体外抑菌活性观察[J].山东医药，2017（27）

12 袁珂等.草珊瑚正丁醇部位化学成分及抑菌活性研究[J].中国中药杂志，2008（15）

13 陈红，申元英.车前草几种提取物的抗菌活性研究[J].大理学院学报，2012（3）

14 代如意等.夏枯草等14味中药对金黄色葡萄球菌的体外抑菌活性[J].中国兽医学报，2014（2）

15 李安林，熊双丽.夏枯草总黄酮的提取与抑菌活性研究[J].食品研究与开发，2011（5）

16 熊大胜等.鱼腥草提取物抑菌作用研究[J].常德师范学院学报

17 李静，马媛.鱼腥草乙醇浸提液对体外细菌抑制的对比研究[J].江苏农业科学，2011（1）

18 黄亮等.鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用研究[J].安徽农业科学，2012（2）

19 魏练平等.鱼腥草抑菌有效成分的醇提、鉴定及抑菌效果研究[J].中国微生态学杂志，2011（6）

20 纪晓宇等.蒲公英不同提取物对大肠杆菌体外抑菌活性的作用[J].，广州中医药大学学报，2015（1）

21 杨炳友等.毛酸浆的研究进展[J].中草药，2017（14）

22 陈芳等.毛酸浆果乙醇提取物抗炎作用及其机制研究[J].药物评价研究，2016（5）

23 郑敬彤等.毛酸浆果提取物的抑菌活性研究[J].中国试验诊断学，2010（6）

24 王锋等.20种清热解毒中草药体外抗金黄色葡萄球菌活性筛选[J].中国感染控制杂志，2013（5）