规模肉牛场主要疫病血清学调查报告

赵建新 ，陶金林

（1.新疆额敏县第九师168团畜牧兽医站 834608；2.新疆额敏县九师兽医站 834601）

为查明塔额垦区规模化肉牛场（161、163、164、170、167 团）饲养的牛疫病的感染流行状况，2015年以来，配合兵团总站、石河子大学从五个规模化牛场以及165团夏洛来牛群采集存在流产、死胎、弱犊、肺炎、腹泻等临床表现的0日龄～8岁龄奶牛的血液样品。夏洛来牛是生活在塔尔巴哈台山深处（巴音木扎草原）。夏洛来牛，上世纪五、六十年代从国外引进，经过60年的繁衍，已经适应在本地的生活环境，临床表现健康。所采牛群均未免疫接种布鲁氏菌病、牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、牛支原体、牛弓形虫病、衣原体病、新孢子虫病、牛呼吸道合胞体、副流感－3型、冠状病毒、蓝舌病、牛白血病疫苗。对自然感染状况进行评估。

1 基本情况

1.1 布鲁氏菌病

1.1.1 材料和方法：虎红平板凝集试验抗原 （批号：20131102）、试管凝集试验（SAT）抗原购自（批号：20120625）。 试验方法按照操作说明书操作。

1.1.2 结果

表1 牛布病检测结果

1.2 牛病毒性腹泻

1.2.1 主要试剂：Ruminant BVD/BD p80－Serum试剂盒 （批号：1－BVD－015 03－2014）购自法国 LSIVET 公司。

1.2.2 试验原理：阻断ELISA;试验主要步骤:10ul血清+90ul样品稀释液→100ul已稀释样品及对照直接加至反应板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶标二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.2.3 检测结果

表2 牛病毒性腹泻抗体检测结果

1.3 牛传染性鼻气管炎

1.3.1 主要试剂：IBR抗体检测试剂盒 （批号：5－IBRS－005 10－2013）购自法国 LSIVET 公司。

1.3.2 试验原理：阻断ELISA;试验主要步骤:20ul/10ul样品及对照直接加至反应板→37℃2h或 4℃孵育 16～18h→洗板 3次→加酶标二抗100ul→37℃孵育30min→洗板3次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.3.3 检测结果

表3 牛传染性鼻气管炎抗体检测结果

1.4 牛支原体

1.4.1 主要试剂：支原体抗体检测试剂盒 （批号：MYC12I21 09－2013）购自瑞典SVANOVA BIOTECH公司。

1.4.2 试验原理：阻断ELISA;试验主要步骤:10ul血清+90ul样品稀释液→100ul已稀释样品及对照直接加至反应板→21℃孵育 1h→洗板 3次→加酶标二抗 100ul→21℃孵育 1h→洗板 3次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.4.3 检测结果

表4 牛支原体抗体检测结果

1.5 牛弓形虫病

1.5.1 主要试剂：弓形虫抗体检测试剂盒（批号：20121208）购自中国农科院兰州兽医研究所。

1.5.2 试验原理：阻断ELISA;试验主要步骤:10ul血清+90ul样品稀释液→100ul已稀释样品及对照直接加至反应板→21℃孵育 1h→洗板 3次→加酶标二抗 100ul→21℃孵育 1h→洗板 3次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.5.3 检测结果

表5 牛弓形虫抗体检测结果

1.6 牛衣原体

1.6.1 主要试剂：衣原体抗体检测试剂盒 （批号：2－ELISACHLAM－005 04－2014）购自法国 LSIVET 公司。

1.6.2 试验原理：间接ELISA;试验主要步骤:400倍稀释的血清和对照各100ul加至反应板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶标二抗100倍稀释100ul→37℃孵育1h→洗板 4次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.6.3 检测结果

表6 牛衣原体抗体检测结果

1.7 牛新孢子虫病

1.7.1 主要试剂：新孢子虫病抗体检测试剂盒（批号：2-LEINEO-004）购自法国LSIVET公司。

1.7.2 试验原理：间接ELISA;试验主要步骤:100倍稀释的血清和对照各100ul加至反应板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶标二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.7.3 检测结果

表7 牛新孢子虫病抗体检测结果

1.8 牛呼吸道合胞体病毒

1.8.1 主要试剂：牛呼吸道合胞体病毒抗体检测试剂盒（批号：2-SRSV-003）购自法国LSIVET公司。

1.8.2 试验原理：间接ELISA;试验主要步骤:10倍稀释的血清和对照各100ul加至反应板→37℃孵育1h→洗板4次→加100倍稀释的酶标二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.8.3 检测结果

表8 牛呼吸道合胞体病毒抗体检测结果

1.9 3-型副流感病毒

1.9.1 主要试剂：3-型副流感病毒检测试剂盒 （批号：2-SPIV-005）购自法国LSIVET公司。

1.9.2 试验原理：间接ELISA;试验主要步骤:10倍稀释的血清和对照各100ul加至反应板→37℃孵育1h→洗板4次→加100倍稀释的酶标二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.9.3 检测结果

表9 3-型副流感病毒抗体检测结果

1.10 冠状病毒

1.1 0.1主要试剂：冠状病毒检测试剂盒（批号：P07818）购自瑞典SVANOVA BIOTECH公司。

1.1 0.2试验原理：间接ELISA;试验主要步骤:26倍稀释的血清和对照各104ul加至反应板→37℃孵育1h→洗板3次→加酶标二抗100ul→37℃孵育1h→洗板3次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.1 0.3结果

1.11 蓝舌病

1.1 1.1主要试剂：蓝舌病检测试剂盒 （批号：2-VETBA11-002）购自法国LSIVET公司。

1.1 1.2试验原理：阻断ELISA;试验主要步骤:2倍稀释的血清和对照各100ul加至反应板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶标二抗 100ul→37℃孵育 30min→洗板 3次→加底物 100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.1 1.3检测结果：检测血清样品180份，未检出阳性样品。

1.12 牛白血病

1.1 2.1主要试剂：牛白血病检测试剂盒（批号：P07684）购自瑞典SVANOVA BIOTECH公司。

1.1 2.2试验原理：间接ELISA;试验主要步骤:26倍稀释的血清和对照各104ul加至反应板→37℃孵育1h或21℃4h→洗板3次→加酶标二抗 100ul→37℃孵育 1h→洗板 3次→加底物100ul→21℃孵育10min→终止读数→结果判定。

1.1 2.3检测结果：检测血清样品180份，未检出阳性样品。

2 结论

2.1 血清学调查结果表明，塔额垦区规模化肉牛养殖场检测出布病等10个病种，且牛群中感染率较高，未检出牛蓝舌病和白血病。

2.2 此次血清学调查警醒我们应高度重视规模养殖牛场疫病的综合防控工作。

2.3 规模化养殖肉牛疫病高感染率的原因尚待进一步调查和分析。