不同川贝母制剂镇咳、祛痰和抗炎作用实验研究

巴 珂，李 颖，何文楷，李佳川，顾 健

(西南民族大学药学院，四川 成都 610041)

川贝母为百合科(Liliaceae)贝母属(Fritillaria)多种植物的干燥鳞茎，味甘、苦，微寒[1-2]，是具有代表性的川产道地名贵药材.大量研究表明，川贝母的有效成分主要为异甾体生物碱和甾体生物碱，目前已分离并确定结构的成分达百余种；同时，临床及动物实验研究表明，川贝母的主要药理作用有镇咳、祛痰、抗炎，以及抗溃疡、抗菌、镇静镇痛、保护膈肌及抗氧化作用[3-8].近年来，膨化制剂是目前市场上比较流行的保健品形式之一，具有携带服用方便、吸收程度高，易于患者接受的优势.课题组为进一步促进川产道地特色药食保健资源川贝母相关保健产品的创新开发，分别制备川贝母片和川贝母膨化制剂两种剂型，观察不同川贝母制剂的镇咳、祛痰和抗炎药效作用，为川贝母相关保健制剂的开发和推广提供一定的科学依据.

1 材料与方法

1.1 药物

川贝母原料药，经西南民族大学药学院顾健教授鉴定为百合科贝母属植物川贝母(Fritillaria cirrhosaD.Don)的干燥鳞茎.川贝母片剂按药典中片剂的一般制备方法打粉制备，规格为1 g/片；川贝母膨化剂采用高温高压膨化，较川贝母原料药色微深，偏黄，体积膨大，无焦糊.实验时，将上述川贝母原料药、川贝母片剂和川贝母膨化制剂置于40℃恒温干燥箱干燥48 h，打粉过6号药典筛，配置成0.4%的羧甲基纤维素钠药物混悬液.根据人日服药物总量和“人和动物体表面积折算等效剂量比率表”计算得川贝母原料药的小鼠给药剂量为2 g/kg；川贝母片剂高、中、低剂量的小鼠给药剂量分别为1、0.5、0.25 g/kg；川贝母膨化制剂高、中、低剂量的小鼠给药剂量分别为2、1、0.5 g/kg.

1.2 动物

清洁级KM小鼠，雌性90只，雄性290只，18～22 g，由四川省成都达硕实验动物有限公司提供，动物合格证号为SCXK[川]2015-030.

1.3 试剂

川贝清肺糖浆(漳州片仔癀药业股份有限公司，国药准字Z35020239)；苯酚红(成都市科龙化工试剂厂，批号:2016091801)；二甲苯(天津致远化学试剂有限公司，批号:2016102030)；氨水(成都市科龙化工试剂厂，批号:2016040501)；氢氧化钠(天津市瑞金特化学品有限公司，批号:20160517)；碳酸氢钠(天津博迪化工股份有限公司，批号20161208).

1.4 仪器

压缩式雾化器CNB69011(深圳市富迪康科技有限公司)，722N可见分光光度计(上海精密仪器仪表有限公司).

1.5 方法

1.5.1 镇咳实验

将健康小鼠置于烧杯中，用压缩式雾化器雾化氨水(25.0%)，通入烧杯15 s，选出能够在1.5 min内产生咳嗽的小鼠[9]，用于镇咳实验.选取筛选后的小鼠，随机分为9组，即川贝母原料药组、川贝清肺糖浆组、川贝母片剂高、中、低剂量组、川贝母膨化制剂高、中、低剂量组和正常对照组，每组10只，雌雄各半.连续灌胃给药7 d，末次给药30 min后，按氨水引咳法将小鼠放入烧杯，吸入雾化氨水(25.0%)15 s后取出.观察记录小鼠的咳嗽潜伏期和3 min内的咳嗽次数[10-11].

1.5.2 祛痰实验

取定量的酚红粉末用少量氢氧化钠溶液溶解后，用5%的碳酸氢钠溶液稀释成所需浓度[12].配置浓度为0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、2.50、5.00 mg/ml的酚红溶液，用分光光度计测定吸光度，并绘制酚红标准曲线，得y＝0.164 x＋0.0079(R2＝0.9994).选取健康小鼠随机分为9组，即川贝母原料药组、川贝清肺糖浆组、川贝母片剂高、中、低剂量组、川贝母膨化制剂高、中、低剂量组和正常对照组，每组10只，雌雄各半.连续灌胃给药7d，末次给药30 min后，腹腔注射2 ml 5%酚红溶液，1 h后处死，取甲状软骨至气管分叉处气管[5，12]，用5%的碳酸氢钠溶液3 ml浸泡30 min，超声10 min，高速离心3 min，浸泡液用分光光度计测定吸光度，并利用标准曲线计算酚红排泌量.

1.5.3 抗炎实验

(1)足肿胀实验

选取健康雄性小鼠100只，随机分为10组，即川贝母原料药组、川贝清肺糖浆组、川贝母片剂高、中、低剂量组、川贝母膨化制剂高、中、低剂量组、空白对照组和模型对照组，每组10只.连续灌胃给药7 d，末次给药30 min后，右后足足趾部皮下注射10%的蛋清生理盐水溶液[13]，1 h后处死，从踝关节上0.5 cm处剪下左右两足，称重并计算足肿胀率.计算公式:足肿胀度＝右足重量-左足重量；足肿胀率＝(足肿胀度/左足重量)×100%

(2)耳肿胀实验

选取健康雄性小鼠100只，随机分为10组，即川贝母原料药组、川贝清肺糖浆组、川贝母片剂高、中、低剂量组、川贝母膨化制剂高、中、低剂量组、空白对照组和模型对照组，每组10只.连续灌胃给药7 d，末次给药30 min后，右耳涂抹0.2 ml的二甲苯，1 h后处死，用8 mm耳片打孔器取小鼠左、右耳耳片，称重并计算耳肿胀率[14-15].计算公式:耳肿胀度＝右耳重量-左耳重量；耳肿胀率＝(耳肿胀度/左耳重量)×100%

2 结果与分析

实验数据采用SPSS 18软件进行比较分析.

2.1 药物对氨水致咳小鼠的影响

由表1结果可知，与正常对照组比较，川贝母膨化制剂能部分减少小鼠3 min内的咳嗽次数(P<0.05)，显示出一定的镇咳作用，优于川贝母片剂及原料药.

2.2 药物对小鼠酚红排泌量的影响

由表2结果可知，与正常对照组比较，川贝母片剂和膨化制剂均能显著增加小鼠的酚红排泌量(均P<0.01)，作用优于川贝清肺糖浆及原料药.

表1 不同川贝母制剂对小鼠氨水致咳的影响(±s)Table 1 Effects of different formulations of Fritillaria cirrhosa on ammonia-inducing cough in mice(±s)

表1 不同川贝母制剂对小鼠氨水致咳的影响(±s)Table 1 Effects of different formulations of Fritillaria cirrhosa on ammonia-inducing cough in mice(±s)

与正常对照组比较，∗P<0.05

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表2 不同川贝母制剂对小鼠酚红排泌量的影响(±s)Table 2 Effects of different formulations of Fritillaria cirrhosa on excretion of phenol red in mice(±s)

表2 不同川贝母制剂对小鼠酚红排泌量的影响(±s)Table 2 Effects of different formulations of Fritillaria cirrhosa on excretion of phenol red in mice(±s)

与正常对照组比较，∗P<0.05，∗∗P<0.01

组别 数量/只 OD值 酚红含量/mg正常对照组 10 0.014±0.005 0.0096±0.0002川贝清肺糖浆组 10 0.037±0.023 0.0102±0.0007∗川贝母原料药组 10 0.036±0.011 0.0102±0.0003川贝母片剂高剂量组 10 0.118±0.032 0.0124±0.0009∗∗川贝母片剂中剂量组 10 0.065±0.015 0.0109±0.0004∗∗川贝母片剂低剂量组 10 0.062±0.012 0.0109±0.0004∗∗川贝母膨化制剂高剂量组 10 0.079±0.023 0.0113±0.0007∗∗川贝母膨化制剂中剂量组 10 0.092±0.024 0.0117±0.0007∗∗川贝母膨化制剂低剂量组 10 0.091±0.038 0.0116±0.0011∗∗

2.3 药物对小鼠耳肿胀、足肿胀的影响

由表3结果可知，与空白对照组比较，模型对照组小鼠的耳肿胀率和足肿胀率均明显升高，显示不同小鼠急性炎症模型制备成功.与模型对照组相比较，川贝母片剂和膨化制剂均能明显或部分抑制小鼠的耳部和足部肿胀，降低其足肿胀率和耳肿胀率(P<0.05或P<0.01)，显示出较好的抗炎作用.

表3 不同川贝母制剂对小鼠耳肿胀和足肿胀的影响(±s)Table 3 Effects of different formulations of Fritillaria cirrhosa on ear swelling and paw edema in mice(±s)

表3 不同川贝母制剂对小鼠耳肿胀和足肿胀的影响(±s)Table 3 Effects of different formulations of Fritillaria cirrhosa on ear swelling and paw edema in mice(±s)

与模型对照组比较，∗P<0.05，∗∗P<0.01

组别 数量/只 耳肿胀度/g 耳肿胀率 足肿胀度/g 足肿胀率空白对照组 10 0.001±0.001∗∗ 0.089±0.037∗∗ 0.012±0.007∗∗ 0.076±0.045∗∗模型对照组 10 0.024±0.005 0.875±0.758 0.069±0.023 0.615±0.154川贝清肺糖浆组 10 0.021±0.005 0.805±0.444 0.050±0.011 0.311±0.080川贝母原料药组 10 0.018±0.004 0.753±0.606 0.057±0.012 0.361±0.084川贝母片剂高剂量组 10 0.007±0.003∗ 0.358±0.268∗ 0.044±0.014∗ 0.295±0.087∗川贝母片剂中剂量组 10 0.005±0.003∗∗ 0.262±0.112∗∗ 0.058±0.009 0.329±0.050川贝母片剂低剂量组 10 0.005±0.003∗∗ 0.255±0.246∗∗ 0.044±0.013 0.251±0.074∗川贝母膨化制剂高剂量组 10 0.009±0.004∗ 0.392±0.484∗ 0.060±0.013 0.367±0.079川贝母膨化制剂中剂量组 10 0.008±0.005∗ 0.381±0.554∗ 0.046±0.012 0.285±0.076∗川贝母膨化制剂低剂量组 10 0.008±0.005∗ 0.371±0.486∗ 0.047±0.011 0.282±0.061∗

3 讨论

近年来，基于“药食同源”和“药补不如食补”的说法，人们对中药保健品的功效和产品类型有着较高的期望.川贝母作为川产道地特色药食同源资源，具有较高的研究和开发价值，本课题组为进一步川产道地特色资源的创新开发，对川贝母片剂和川贝母膨化制剂的基础药效进行了分析研究.一方面，川贝母片剂较市面上销售的糖浆更容易服用、携带和贮存，非常适合临床使用，另一方面，膨化剂又改善了原料药的口感，更适宜制作成药食同源的食品，提高了患者对药物的接受程度，更贴近患者的期望.通过本实验研究表明，川贝母片剂和膨化制剂均能明显或部分增加小鼠的酚红排泌量，抑制小鼠的耳部肿胀和足部肿胀，分别降低其肿胀率，显示出较好的抗炎和祛痰作用；同时，川贝母膨化制剂还能明显或部分减少氨水引起的小鼠咳嗽次数，显示出一定的镇咳作用，上述作用均优于川贝清肺糖浆及原料药，其结果表明川贝母片剂和膨化制剂具有一定的祛痰、镇咳和抗炎作用，值得进一步的开发研究.

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